关于酶消化法的胰蛋白酶消化的基本介绍

1、加入消化液:小心吸出旧培养液,用PBS清洗(冲洗),加入适量消化液(胰蛋白酶液),注意消化液的量以盖住细胞最好,在37℃培养箱消化2min。 2、显微镜下观察细胞:倒置显微镜下观察消化细胞,若细胞质回缩,细胞间不再连接成片,表明此时细胞消化适度。 3、加入培养液:更换吸管,加入新鲜的培养液。 4、吹打:用吸管将已经消化细胞吹打成细胞悬液。......阅读全文

关于酶消化法的胰蛋白酶消化的基本介绍

  1、加入消化液:小心吸出旧培养液,用PBS清洗(冲洗),加入适量消化液(胰蛋白酶液),注意消化液的量以盖住细胞最好,在37℃培养箱消化2min。  2、显微镜下观察细胞:倒置显微镜下观察消化细胞,若细胞质回缩,细胞间不再连接成片,表明此时细胞消化适度。  3、加入培养液:更换吸管,加入新鲜的培养

组织的分离实验_胰蛋白酶消化消化分离法

实验方法原理胰蛋白酶适于消化细胞间质较小的软组织,如胚胎组织、羊膜、上皮组织、肝、肾等软组织,对传代细胞也非常好。用于消化纤维性组织或较硬的癌组织则较差。Ca2+和Mg2+对胰蛋白酶的活性有一定抑制作用,故需用不含这些离子的BSS 配制。血清有抑制胰蛋白酶活性的作用,因此在做细胞传代时,用胰蛋白酶消

关于消化酶的介绍

  消化酶(digestive enzyme ):参与消化的酶的总称。 一般消化酶的作用是水解,有的消化酶由消化腺分泌,有的参与细胞内消化。细胞外消化酶中,有以胃蛋白酶原、胰蛋白酶原、羧肽酶原等一些不活化酶原的形式分泌然后再被活化的。  缺少消化酶会导致食物的不完全分解,然后集中在结肠,容易造成消化

神经胶质细胞培养实验_胰蛋白酶消化法

实验材料大鼠试剂、试剂盒CMF-Hanks液胰蛋白酶DMEM F12仪器、耗材水浴锅培养箱实验步骤一、原代培养1.  选用生后1周的新生大白鼠,用碘酒,酒精棉球消毒,断头取其大脑皮层组织。 2.  解剖显微镜下,剥离脑膜,切除大脑髓质部分。 3.  将大脑皮质在无Ca2+、Mg2+Hanks液(CM

细胞纯化酶消化法的方法介绍

酶消化法是比较常用的纯化方法,不仅对贴壁细胞可行,能利用上皮细胞和成纤维细胞对胰蛋白酶的耐受性不同,使两者分开,达到纯化的目的,对贴壁细胞与半贴壁及粘附细胞间的分离纯化也是十分有效的。

细胞人工纯化的酶消化法介绍

  酶消化法是比较常用的纯化方法,不仅对贴壁细胞可行,能利用上皮细胞和成纤维细胞对胰蛋白酶的耐受性不同,使两者分开,达到纯化的目的,对贴壁细胞与半贴壁及粘附细胞间的分离纯化也是十分有效的。  (1)上皮细胞与成纤维细胞的分离纯化  两者在胰蛋白酶的作用下,由于成纤维细胞先脱壁,而上皮细胞要消化相当长

钙调蛋白的胰蛋白酶消化实验

试剂、试剂盒 消化缓冲液经 TPCK 处理的胰蛋白酶HCl纯的钙调蛋白实验步骤 材料经 TPCK 处理的胰蛋白酶(其干粉可从 WorthingtonBiochemicalCorp. 买到)HCl(1 mmol/L)纯的钙调蛋白(干粉;无盐(0.1~1 mg)试剂消化缓冲液(配方,见"试剂的配制

钙调蛋白的胰蛋白酶消化实验

钙调蛋白的胰蛋白酶消化实验             试剂、试剂盒 消化缓冲液 经 TPCK 处理的胰蛋白酶

钙调蛋白的胰蛋白酶消化实验

试剂、试剂盒消化缓冲液经 TPCK 处理的胰蛋白酶HCl纯的钙调蛋白实验步骤材料经 TPCK 处理的胰蛋白酶(其干粉可从 WorthingtonBiochemicalCorp. 买到)HCl(1 mmol/L)纯的钙调蛋白(干粉;无盐(0.1~1 mg)试剂消化缓冲液(配方,见"试剂的配制'

怎样配置胰蛋白酶消化液

1.D.Hanks液高压灭菌之后,晾至室温,4℃保存备用。2.称取一定量胰蛋白酶粉末于研磨器中(夏天时研磨器应放在冰浴中),加入少量D-Hanks液研磨1 000次左右,调制成糊状。再放入4℃预冷的适量D-Hanks液中,4℃下磁力搅拌使完全溶解。3.用NaHC03干粉将胰酶溶液的pH值调至8.0左

关于消化酶的特点的介绍

  1、消化酶是人体消化器官分泌的消化液中所含有的物质,是一种蛋白质。  2、消化酶的主要作用是将食物分解为人体能够吸收的小分子物质。  3、所有的酶都是专一的,一种酶只催化另一种或一类化学反应,所以消化酶有很多种。  4、消化酶具有生物活性,其受外部环境影响很大(温度,湿度,酸碱度)等。  5、常

酶消化法的实验前准备相关介绍

  1、预热培养用液:把已经配制好的装有培养液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴锅内预热。准备离心管、吸管,紫外线30min消毒超净工作台。  2、用75%酒精擦拭经过紫外线照射的超净工作台和双手。  3、正确摆放使用的器械:保证足够的操作空间,不仅便于操作而且可减少污染。  4、点燃酒精灯,

关于消化酶的分类分解酶的介绍

  α-葡糖苷酶(麦芽糖酶)存在于高等动物的唾液、肠液以至低等动物的消化液中。β-葡糖苷酶,存在于高等动物的小肠液中。β-半乳糖苷酶(乳糖酶)存在于高等动物的肠液及低等动物的消化液中。淀粉酶,广泛存在于高等动物的唾液、胰液和低等动物的消化液中。高等动物唾液中的淀粉酶,特称为唾液淀粉酶。纤维素酶存在于

基因重组胰蛋白酶与传统胰酶的消化对比

胰蛋白酶(Trypsin)是一种丝氨酸蛋白水解酶。其前体为无生物活性的胰蛋白酶原(trypsinogen),产生于胰脏。随胰液分泌到小肠中,被小肠中的肠肽酶激活后,能将蛋白质分解为多肽,进而分解成为氨基酸。其切割肽链的位点主要位于赖氨酸或精氨酸的羧基端。故在体外细胞培养中,胰蛋白酶被用于消化贴壁细胞

大鼠星型胶质细胞培养实验——胰蛋白酶消化法

实验材料大鼠胚胎试剂、试剂盒L-15培养基胶原酶DnaseD-MEM-BSFCS-DMEM阿糖胞苷仪器、耗材离心机水浴锅培养瓶培养箱实验步骤一、分离大鼠胚胎(16-18周)新皮层,置于L-15(或Hank's平衡盐/DMEM溶液,无Hepes)培养基中,除去脑膜和血管、海马、尾核和其他非皮层

干消化法与湿消化法的优缺点

  1.湿消化法:指在适量的食品样品中,加入氧化性的强酸,然后在一定温度条件下反应,破坏食品中的有机物,使待测的无机成分释放出来,形成不挥发的无机化合物的方法。  优点:有机物分解速度快,加热温度较干灰化法低,可减少待测成分的挥发损失。  缺点:试剂用量大,有时空白值比较高,消化过程中会产生大量有害

胰蛋白酶,组织细胞消化的理想之选

胰蛋白酶(胰酶,Trypsin),CAS:9002-07-7,为蛋白酶的一种,EC3.4.4.4,是从牛、羊、猪的胰脏提取的一种丝氨酸蛋白水解酶。来源于胰腺的一种丝氨酸蛋白酶,由223个氨基酸残基组成的单链多肽,底物特异性是带正电荷的赖氨酸和精氨酸侧链。胰酶主要切割赖氨酸和精氨酸羧基端,当两者之一紧

酶法组织消化技术:从粗制的胶原酶到高纯度消化产品二

罗氏高纯度研究级别酶混合物Liberase Research Grade Enzyme BlendsLiberase Research Grade Enzyme Blends包含了一系列酶混合物,它们由不同比例的中性蛋白酶(非梭菌蛋白酶)和高纯度Collagenase I + Collage

酶法组织消化技术:从粗制的胶原酶到高纯度消化产品一

酶法组织消化中常用的胶原酶(Collagenase),能特异性地降解胞外胶原蛋白,使胶原蛋白和纤维粘连蛋白的网状结构解离,而不损坏细胞表面结构的完整性。由于细胞外基质的成分复杂,除胶原蛋白外,还含有弹性蛋白,糖蛋白等其他大分子结构。而且不同组织类型,不同物种来源,不同年龄的组织中胞外基质组份不同。所

什么是胶原酶消化法

就是用胶原酶处理消化组织达到分离细胞的目的,所用胶原酶有不同类型:1、胶原酶Ⅰ用于上皮、肺,脂肪和肾上腺组织细胞的分离。用于消化组织中连接部分使其成为单个细胞,用于哺乳动细胞的分离。2、胶原酶Ⅳ包含至少7种蛋白酶成分,分子量从68-130KD不等。它能消化多种组织。3、胶原酶Ⅴ包含至少7种蛋白酶成分

什么是胶原酶消化法

就是用胶原酶处理消化组织达到分离细胞的目的,所用胶原酶有不同类型:1、胶原酶Ⅰ用于上皮、肺,脂肪和肾上腺组织细胞的分离。用于消化组织中连接部分使其成为单个细胞,用于哺乳动细胞的分离。2、胶原酶Ⅳ包含至少7种蛋白酶成分,分子量从68-130KD不等。它能消化多种组织。3、胶原酶Ⅴ包含至少7种蛋白酶成分

关于生理性消化不良的基本介绍

  生理性消化不良指由于新生儿的消化系统如口腔、食管、胃、肠、肝、胰腺、肠道细菌等都处于发育不成熟阶段,在进食过程中,或者之后发生的一系列不适症状,一般婴儿无清楚主诉,表现为哭闹、烦躁不安等,父母可通过婴儿大便和体征表现等发现。

关于消化腺的基本信息介绍

  消化腺(digestive gland)是指动物体分泌消化液的腺体。在脊椎动物中可分两类:①壁内腺。分布于消化管壁的粘膜或粘膜下层。分泌物可直接排入消化管腔内。如唇腺、舌腺、食管腺、胃腺和肠腺等。②壁外腺。较大,位于消化管壁外,并有导管开口于消化管腔内。腺体外有结缔组织被膜,并深入到腺实质内,将

关于儿童消化性溃疡的基本介绍

  儿童消化溃疡分为原发性和继发性两类,6岁以下患儿的原发性溃疡主要是胃溃疡,以后十二指肠球部溃疡占优势,小儿胃溃疡年龄偏小(新生儿也不能幸免),十二指肠球部溃疡年龄偏大。男性儿童的发生率高于女性儿童,为3∶1~6∶1。10岁以下的儿童溃疡病为继发性溃疡。消化性溃疡在儿童中发生情况相对较少,儿童住院

关于下消化道出血的基本介绍

  下消化道出血(lower gastrointestinal hemorrhage)是临床常见的症候群,可由多种疾病所致,如恶性肿瘤、炎症性疾病、憩室、血管畸形、全身系统性疾病累及肠道。病因有头昏、乏力、心悸、脉搏加快、血压下降、皮肤苍白等。

关于丝氨酸蛋白酶的消化酶的介绍

  胰分泌的酶里面有三种是丝氨酸蛋白酶:  1、糜蛋白酶  糜蛋白酶,又称为胰凝乳蛋白酶,水解酶类的一种肽链内切酶,主要促使疏水性氨基酸尤其是酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸及亮氨酸的羧基端多肽裂解。由胰以糜蛋白酶原的形式分泌,在小肠内经胰蛋白酶作用而激活。糜蛋白酶A及B分子大小不同,但特异性则相似。  2

胰蛋白酶消化细胞的时间为何要严格控制

消化时间太短,消化就不充分,不能使细胞充分分散开来;消化时间太长,会导致细胞膜表面蛋白大量被分解,从而导致细胞死亡!

胰蛋白酶消化细胞的时间为何要严格控制

原因:消化时间太短,消化就不充分,不能使细胞充分分散开来;消化时间太长,会导致细胞膜表面蛋白大量被分解,从而导致细胞死亡!

新鲜实体组织样本的制备(酶消化法)

实验方法原理对实体组织分散的作用原理主要有3个方面:① 可以破坏组织间的胶原纤维、弹性纤维等;② 可以水解组织间的黏多糖等物质;③ 可以水解组织细胞间的紧密联结装置的蛋白质物质。实验材料组织                                                    

新鲜实体组织样本的制备(酶消化法)

实验方法原理对实体组织分散的作用原理主要有3个方面:① 可以破坏组织间的胶原纤维、弹性纤维等;② 可以水解组织间的黏多糖等物质;③ 可以水解组织细胞间的紧密联结装置的蛋白质物质。实验材料组织酶仪器、耗材试管离心管尼龙网实验步骤1. 将适合于酶消化的组织置于离心管中。2. 将选好的酶溶掖 1~2 ml