组织的分离实验_胰蛋白酶消化消化分离法
实验方法原理胰蛋白酶适于消化细胞间质较小的软组织，如胚胎组织、羊膜、上皮组织、肝、肾等软组织，对传代细胞也非常好。用于消化纤维性组织或较硬的癌组织则较差。Ca2+和Mg2+对胰蛋白酶的活性有一定抑制作用，故需用不含这些离子的BSS 配制。血清有抑制胰蛋白酶活性的作用，因此在做细胞传代时，用胰蛋白酶消化细胞后，可不必再用Hanks 液冲洗，直接加入含有血清的培养液进行培养即可。残留的微量胰蛋白酶即被血清抑活，对细胞没有什么影响。实验材料新鲜组织试剂、试剂盒Hanks培养液胰蛋白酶仪器、耗材三角烧瓶吸管实验步骤使用胰蛋白酶消化细胞法如下：1. 剪切把组织剪切成3~5 立方毫米的小块；2. 加液把组织置入三角烧瓶中（瓶内有铁蕊的搅棒或玻璃小球），注入比组织量多30~50 倍的0.25%的胰蛋白酶（预加温至37 ℃）；3. 消化置电磁搅拌器台上，消化30~60 分钟，或置于37 ℃水浴中，或放于37 ......阅读全文
组织的分离实验_胰蛋白酶消化消化分离法
实验方法原理胰蛋白酶适于消化细胞间质较小的软组织，如胚胎组织、羊膜、上皮组织、肝、肾等软组织，对传代细胞也非常好。用于消化纤维性组织或较硬的癌组织则较差。Ca2+和Mg2+对胰蛋白酶的活性有一定抑制作用，故需用不含这些离子的BSS 配制。血清有抑制胰蛋白酶活性的作用，因此在做细胞传代时，用胰蛋白酶消
组织的分离实验_EDTA－消化分离法
实验方法原理EDTA是一种非酶性消化物，常用不含Ca2+和Mg2+的BSS 配成0.02%的工作液。关于EDTA的作用机制一般认为是：一些组织，尤其是上皮组织，在生存中需要Ca2+和Mg2+才能维持组织的完整性。EDTA能从这些组织生存环境中吸收这些离子，形成螯合物，能促进细胞相互分离。EDTA 作
组织的分离实验_胶原酶消化分离法
实验方法原理胶原酶是一种由细菌中提取出的酶，对胶原有很强的消化作用，适于消化纤维性组织、上皮组织以及癌组织等。上皮细胞本身对胶原酶有一定耐性，但胶原酶对细胞间质有好的消化作用，可使上皮细胞与胶原成分脱离而不受伤害，效果甚好。此酶在钙和镁离子存在情况下仍有活性，故可用BSS和含有血清的培养液配制。实验
钙调蛋白的胰蛋白酶消化实验
试剂、试剂盒 消化缓冲液经 TPCK 处理的胰蛋白酶HCl纯的钙调蛋白实验步骤 材料经 TPCK 处理的胰蛋白酶（其干粉可从 WorthingtonBiochemicalCorp. 买到)HCl(1 mmol/L)纯的钙调蛋白（干粉；无盐（0.1~1 mg)试剂消化缓冲液(配方，见"试剂的配制
钙调蛋白的胰蛋白酶消化实验
试剂、试剂盒消化缓冲液经 TPCK 处理的胰蛋白酶HCl纯的钙调蛋白实验步骤材料经 TPCK 处理的胰蛋白酶（其干粉可从 WorthingtonBiochemicalCorp. 买到)HCl(1 mmol/L)纯的钙调蛋白（干粉；无盐（0.1~1 mg)试剂消化缓冲液(配方，见"试剂的配制'
钙调蛋白的胰蛋白酶消化实验
钙调蛋白的胰蛋白酶消化实验 试剂、试剂盒 消化缓冲液 经 TPCK 处理的胰蛋白酶
胰蛋白酶，组织细胞消化的理想之选
胰蛋白酶（胰酶，Trypsin），CAS：9002-07-7，为蛋白酶的一种，EC3.4.4.4，是从牛、羊、猪的胰脏提取的一种丝氨酸蛋白水解酶。来源于胰腺的一种丝氨酸蛋白酶，由223个氨基酸残基组成的单链多肽，底物特异性是带正电荷的赖氨酸和精氨酸侧链。胰酶主要切割赖氨酸和精氨酸羧基端，当两者之一紧
关于酶消化法的胰蛋白酶消化的基本介绍
1、加入消化液：小心吸出旧培养液，用PBS清洗（冲洗），加入适量消化液（胰蛋白酶液），注意消化液的量以盖住细胞最好，在37℃培养箱消化2min。 2、显微镜下观察细胞：倒置显微镜下观察消化细胞，若细胞质回缩，细胞间不再连接成片，表明此时细胞消化适度。 3、加入培养液：更换吸管，加入新鲜的培养
组织的分离实验_离心分离法
实验方法原理如培养物为血液、羊水、腹水和胸水等细胞悬液时，可采用离心法分离。一般用低速500~1000 转/分速度，离心5~10 分钟即可。如悬液量大，离心时间可适当延长，但如离心速度过大和时间太长，易压挤细胞使之受损或死亡。微量全血法淋巴细胞培养时，可不必进行淋巴细胞分离，可采用全血培养法。在需用
神经胶质细胞培养实验_胰蛋白酶消化法
实验材料大鼠试剂、试剂盒CMF-Hanks液胰蛋白酶DMEM F12仪器、耗材水浴锅培养箱实验步骤一、原代培养1. 选用生后1周的新生大白鼠，用碘酒,酒精棉球消毒，断头取其大脑皮层组织。 2. 解剖显微镜下，剥离脑膜，切除大脑髓质部分。 3. 将大脑皮质在无Ca2+、Mg2+Hanks液(CM
怎样配置胰蛋白酶消化液
1．D．Hanks液高压灭菌之后，晾至室温，4℃保存备用。2．称取一定量胰蛋白酶粉末于研磨器中(夏天时研磨器应放在冰浴中)，加入少量D－Hanks液研磨1 000次左右，调制成糊状。再放入4℃预冷的适量D-Hanks液中，4℃下磁力搅拌使完全溶解。3．用NaHC03干粉将胰酶溶液的pH值调至8.0左
硬质组织脱钙与软质组织消化
不论是以治病为先的“医疗”，还是以美容为本的“医美”，组织修复始终是一个重要的课题。再生医学与先进材料的研究在“十三五“国家重点研发计划、国家杰出青年基金、国家自然科学基金等多项国家计划中也占据着一席之地，是医学、生物学、材料学成功交叉的领域。缺损组织修复、软（硬）组织再生，涉及干细胞成骨、种植体骨
大鼠星型胶质细胞培养实验——胰蛋白酶消化法
实验材料大鼠胚胎试剂、试剂盒L-15培养基胶原酶DnaseD-MEM-BSFCS-DMEM阿糖胞苷仪器、耗材离心机水浴锅培养瓶培养箱实验步骤一、分离大鼠胚胎（16-18周）新皮层，置于L-15（或Hank's平衡盐/DMEM溶液，无Hepes）培养基中，除去脑膜和血管、海马、尾核和其他非皮层
锚定酶消化cDNA实验
试剂、试剂盒 溶液与缓冲液引物仪器、耗材 试剂盒MPC-EPCR仪Gene PulserII 型系统实验步骤 实验方案 A1.通过加入下列物质来消化双链 cDNA2.在 37°C 下消化 lh。3.65°C 孵育 20 min 热失活限制性酶。4.等体积 PCI 抽提后乙醇沉淀（实验方案 A, 第
锚定酶消化cDNA实验
试剂、试剂盒 溶液与缓冲液 引物 仪器、耗材 试剂盒 MPC-E PCR仪
细胞传代实验_消化法
实验方法原理用胰蛋白酶消化细胞，用于贴壁细胞传代培养。实验材料细胞试剂、试剂盒胰蛋白酶酒精PBS仪器、耗材超净工作台酒精灯酒精棉球培养箱显微镜吸管离心管离心机实验步骤一、传代前准备 1. 预热培养用液：把已经配制好的装有培养液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴锅内预热。 2. 用75%酒精
锚定酶消化cDNA实验
试剂、试剂盒溶液与缓冲液引物仪器、耗材试剂盒MPC-EPCR仪Gene PulserII 型系统实验步骤实验方案 A1.通过加入下列物质来消化双链 cDNA2.在 37°C 下消化 lh。3.65°C 孵育 20 min 热失活限制性酶。4.等体积 PCI 抽提后乙醇沉淀（实验方案 A, 第 2 步
数显消化炉的消化步骤
样品的消化步骤 称取经粉碎通过40～60目/寸的试样0.3～1g，无损地放入已洗净烘干的消化管内，加水、催化剂和10mL硫酸。 1、将消化管分别放入各个消化架的各个孔内，然后置于消化器上，放上已装好密封圈的排污管。 2、打开抽气三通进水(自来水)，使抽气三通处于吸气状态。 3、再接通电源，
数显消化炉的消化步骤
样品的消化步骤 称取经粉碎通过40～60目/寸的试样0.3～1g，无损地放入已洗净烘干的消化管内，加水、催化剂和10mL硫酸。 1、将消化管分别放入各个消化架的各个孔内，然后置于消化器上，放上已装好密封圈的排污管。 2、打开抽气三通进水(自来水)，使抽气三通处于吸气状态。 3、再接通电源
原代细胞的培养与建系3
（二）消化分离法组织消化法是把组织剪切成较小团块（或糊状），应用酶的生化作用和非酶的化学作用进一步使细胞间的桥连结构松动，使团块膨松，由块状变成絮状，此时再采用机械法，用吸管吹打分散或电磁搅拌或在摇珠瓶中振荡，使细胞团块得以较充分的分散，制成少量细胞群团和大量单个细胞的细胞悬液，接种培养后，细胞容易
限制性内切酶消化DNA实验——部分消化
实验方法原理有时需要得到仅在DNA片段的内部存在的部分限制性位点切割产生DNA，这在用待克隆片段内部存在的限制酶切位点进行克隆和构建酶切图谱时特别有用。实验材料DNA试剂、试剂盒限制性内切酶缓冲液仪器、耗材电泳仪实验步骤1. 配制100 ul 含DNA和1x限制酶缓冲液的反应混合物。 2. 将反
原代细胞培养之——细胞分离技术（一）
原代细胞的分离和制作人或动物体内（或胚胎组织）由于多种细胞结合紧密，不利于各个细胞在体外培养中生长繁殖，即使采用1mm3的组织块，也只有少量处于周边的细胞可能生存和生长，若需获取大量细胞，必须将现有的组织块充分散开，使细胞解离出来，常采用的方法如下： 一、悬浮细胞的分离方法 组织材料若来自血液、羊水
悬浮细胞的分离方法
组织材料若来自血液、羊水、胸水或腹水的悬液材料，zui简单的方法是采用1000r/min的低速离心10分钟，若悬液量大，可适当延长离心时间，但速度不能太高，延时也不能太长，以避免挤压或机械损伤细胞，离心沉淀用无钙、镁PBS洗两次，用培养基洗一次后，调整适当细胞浓度后再分瓶培养，若选用悬液中某些细胞，
原代细胞中各种组织消化方法汇总
细胞培养名称：新生大鼠皮质星形胶质细胞培养组织来源：种属：大鼠年 龄：新生1天-2天取材部位： 皮质选用的酶：0.125%胰酶消化时间：37度15min注意事项：胰酶平时用1.5ml EP管分装冻存，用时解冻，37预温1min，以保持胰酶好的活性，消化时每隔5min轻轻摇动消化组织。细胞培养名称：成
新鲜实体组织样本的制备（酶消化法）
实验方法原理 对实体组织分散的作用原理主要有3个方面：① 可以破坏组织间的胶原纤维、弹性纤维等；② 可以水解组织间的黏多糖等物质；③ 可以水解组织细胞间的紧密联结装置的蛋白质物质。实验材料 组织酶仪器、耗材 试管离心管尼龙网实验步骤 1. 将适合于酶消化的组织置于离心管中。2. 将选好的酶溶掖 1~
新鲜实体组织样本的制备（酶消化法）
实验方法原理对实体组织分散的作用原理主要有3个方面：① 可以破坏组织间的胶原纤维、弹性纤维等；② 可以水解组织间的黏多糖等物质；③ 可以水解组织细胞间的紧密联结装置的蛋白质物质。实验材料组织酶仪器、耗材试管离心管尼龙网实验步骤1. 将适合于酶消化的组织置于离心管中。2. 将选好的酶溶掖 1~2 ml
新鲜实体组织样本的制备（酶消化法）
实验方法原理对实体组织分散的作用原理主要有3个方面：① 可以破坏组织间的胶原纤维、弹性纤维等；② 可以水解组织间的黏多糖等物质；③ 可以水解组织细胞间的紧密联结装置的蛋白质物质。实验材料组织
原代细胞的分离和制作方法介绍
一、悬浮细胞的分离方法 组织材料若来自血液、羊水、胸水或腹水的悬液材料，最简单的方法是采用1000r/min的低速离心10分钟，若悬液量大，可适当延长离心时间，但速度不能太高，延时也不能太长，以避免挤压或机械损伤细胞，离心沉淀用无钙、镁PBS洗两次，用培养基洗一次后，调整适当细胞
酶法组织消化技术：从粗制的胶原酶到高纯度消化产品一
酶法组织消化中常用的胶原酶（Collagenase），能特异性地降解胞外胶原蛋白，使胶原蛋白和纤维粘连蛋白的网状结构解离，而不损坏细胞表面结构的完整性。由于细胞外基质的成分复杂，除胶原蛋白外，还含有弹性蛋白，糖蛋白等其他大分子结构。而且不同组织类型，不同物种来源，不同年龄的组织中胞外基质组份不同。所
酶法组织消化技术：从粗制的胶原酶到高纯度消化产品二
罗氏高纯度研究级别酶混合物Liberase Research Grade Enzyme BlendsLiberase Research Grade Enzyme Blends包含了一系列酶混合物，它们由不同比例的中性蛋白酶（非梭菌蛋白酶）和高纯度Collagenase I + Collage