琥珀酸脱氢酶测定方法NBT(氯化硝基四氮唑蓝)法

NBT(氯化硝基四氮唑蓝)法NBT易溶于水,呈淡黄色,以NBT为受氢体,接受由琥珀酸钠盐被酶作用而脱下的氢,进而形成紫蓝色的沉淀,于反应体系中加入PMS,混匀,37℃保温30min,之后加入TCA终止反应。加异丙醇溶解显色,混匀,即可于548nm测OD值。规定:30min内548nm下OD值为1.0时的酶量为1个活力单位。比活力=活力单位数/毫克蛋白。......阅读全文

琥珀酸脱氢酶活力测定方法MTT法

MTT法MTT是一种黄颜色的染料。活细胞线粒体中琥珀酸脱氢酶能够代谢还原MTT,同时在细胞色素C的作用下生成蓝色(或蓝紫色)不溶于水的甲臜(Formazana),经异丙醇作用颗粒溶解显色。在通常情况下,甲臜生成量与活细胞数成正比,因此可根据光密度570nm处OD值推测出活细胞的数目。

NK细胞活性测定实验——乳酸脱氢酶释放法

实验方法原理乳酸脱氢酶(LDH)存在于细胞内,正常情况下,不能透过细胞膜。当细胞受到损伤时,由于细胞膜通透性改变,LDH可从细胞内释放至培养液中。释放出来的LDH再催化乳酸的过程中,使氧化型辅酶Ⅰ(NAD+)变成还原型辅酶(NADH2),后者再通过递氢体-吩嗪二甲酯硫酸盐(PMS)还原碘硝基氯化氮唑

NK细胞活性检测实验步骤

  细胞毒检测技术包括补体依赖细胞毒试验、NK细胞介导的细胞毒试验和特异性CTL活性检测,常用的实验技术有后两种。NK细胞(natural killer cell)是在天然免疫系统发挥主要作用的效应细胞,可直接杀伤病毒感染的靶细胞和某些肿瘤细胞。而细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymp

氯化三苯四氮唑的生产方法介绍

  1、合成苯腙:苯肼溶于95%乙醇中,加入苯甲醛水浴回流1h即得苯腙。  2、偶合:将苯腙溶于吡啶中,与苯胺重氮盐偶合。  3、合成2 -3-5 -三苯基氯化四氮唑:将上述偶合物溶于甲醇中加入亚硝酸异戊酯,然后慢慢加入通过盐酸气的甲醇溶液,加完放置3~4h,再通盐酸气20min状,水浴加热片刻,加

氯化三苯基四氮唑(TTC)法测定根系活力

【原理】 氯化三苯基四氮唑(TTC)是标准氧化还原电位为80mV的氧化还原物质,溶于水中成为无色溶液,但还原后即生成红色而不溶于水的三苯基甲  (TTF),如下式: 生成的TTF比较稳定,不会被空气中的氧自动氧化,所以TTC被广泛地用作酶试验的氢受体,植物根所引起的TTC还原,可因加入琥珀酸、延

细胞活性测定方法介绍与使用探讨(MTT法、XTT法、CCK8法...

细胞活性测定方法有台盼蓝染色法、克隆(集落)形成法、3H放射性同位素掺入法、MTT法等。其中MTT法以其快速简便,不需要特殊检测仪器、无放射性同位素、适合大批量检测的特点而得到广泛的应用。但MTT法形成的Formazan为水不溶性的,需要加有机溶剂溶解,由于在去上清操作时会有可能带走小部分的Form

硝基四唑氮蓝试验的正常值及临床意义是什么

  正常值  正常人,一般认为10%以上者为阳性。5%-10%为NBT阴性。若NBT为阴性,则取0.5ml肝素抗凝血加10μg细菌内毒素后按上法试之,如NBT阳性细胞>29%,表示受检者的中性粒细胞吞噬功能正常,若仍为5%-10%,则属功能异常。  临床意义  NBT低值见于慢性肉芽肿、先天性丙球缺

氯化三苯基四氮唑(TTC)法测定种子实验

有生命活力的种胚呼吸过程中不断进行氧化还原反应,脱下的氢使辅酶(NAD或NADP)还原。当TTC渗入种胚的活细胞内,作为氢的受体被还原性辅酶(NADH+H+或NADPH+H+)上的氢还原时,便由无色的氯化三苯基四氮唑(TTC)变为红色的三苯基甲臜(TTF)。实验方法原理有生命活力的种胚呼吸过程中不断

氯化三苯基四氮唑(TTC)法测定种子实验

实验方法原理 有生命活力的种胚呼吸过程中不断进行氧化还原反应,脱下的氢使辅酶(NAD或NADP)还原。当TTC渗入种胚的活细胞内,作为氢的受体被还原性辅酶(NADH+H+或NADPH+H+)上的氢还原时,便由无色的氯化三苯基四氮唑(TTC)变为红色的三苯基甲臜(TTF)。实验材料 小麦玉米花生水稻种

氯化三苯基四氮唑(TTC)法测定种子实验

实验方法原理:有生命活力的种胚呼吸过程中不断进行氧化还原反应,脱下的氢使辅酶(NAD或NADP)还原。当TTC渗入种胚的活细胞内,作为氢的受体被还原性辅酶(NADH+H+或NADPH+H+)上的氢还原时,便由无色的氯化三苯基四氮唑(TTC)变为红色的三苯基甲臜(TTF)。实验材料:小麦      

四唑氮法的定义

中文名称四唑氮法英文名称tetrazolium method定  义以四唑盐作为氧化酶活性的定性标志,在组织切片中显示酶活性定位的方法。应用学科细胞生物学(一级学科),细胞生物学技术(二级学科)

乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测NK细胞活性实验

实验方法原理乳酸脱氢酶(LDH)是活细胞胞浆内含酶之一。在正常情况下,不能透过细胞膜。当靶细胞受到效应细胞的攻击而损伤时,细胞膜通透性改变,LDH可释放至介质中,释放出来的LDH在催化乳酸生成丙酮酸的过程中,使氧化型辅酶I(NAD+)变成还原型辅酶I (NADH2),后者再通过递氢体-吩嗪二甲酯硫酸

乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测NK细胞活性实验

            实验方法原理 乳酸脱氢酶(LDH)是活细胞胞浆内含酶之一。在正常情况下,不能透过细胞膜。当靶细胞受到效应细胞的攻击而损伤时,细胞膜通透性改变,LDH可释放至介质中,释放出来的LDH在催化乳酸生成丙酮酸的过程中,使氧化型辅酶I(NAD+)变成

乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测NK细胞活性实验

            实验方法原理 乳酸脱氢酶(LDH)是活细胞胞浆内含酶之一。在正常情况下,不能透过细胞膜。当靶细胞受到效应细胞的攻击而损伤时,细胞膜通透性改变,LDH可释放至介质中,释放出来的LDH在催化乳酸生成丙酮酸的过程中,使氧化型辅酶I(NAD+)变成

乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测NK细胞活性实验

实验方法原理 乳酸脱氢酶(LDH)是活细胞胞浆内含酶之一。在正常情况下,不能透过细胞膜。当靶细胞受到效应细胞的攻击而损伤时,细胞膜通透性改变,LDH可释放至介质中,释放出来的LDH在催化乳酸生成丙酮酸的过程中,使氧化型辅酶I(NAD+)变成还原型辅酶I (NADH2),后者再通过递氢体-吩嗪

糖化血清蛋白测定实验

实验方法原理 血清葡萄糖能与白蛋白及其它血清蛋白分子N末端的氨基上发生非酶促糖化反应,形成高分子酮胺结构.此酮胺结构能在碱性溶液中与硝基四氮唑蓝(NBT)发生还原反应,生成用甲胺,并以1-脱氧―1―吗啉果糖(OMF)为标准参照物进行比色测定,本实验来源于牡丹江医学院 本科 5 年制检验专业实验指

糖化血清蛋白测定实验

实验方法原理血清葡萄糖能与白蛋白及其它血清蛋白分子N末端的氨基上发生非酶促糖化反应,形成高分子酮胺结构.此酮胺结构能在碱性溶液中与硝基四氮唑蓝(NBT)发生还原反应,生成用甲胺,并以1-脱氧―1―吗啉果糖(OMF)为标准参照物进行比色测定,本实验来源于牡丹江医学院 本科 5 年制检验专业实验指导实验

氯化三苯基四氮唑法测定根系活力的原理和操作方法

【原理】氯化三苯基四氮唑(TTC)是标准氧化还原电位为80mV的氧化还原物质,溶于水中成为无色溶液,但还原后即生成红色而不溶于水的三苯基甲  (TTF),如下式:生成的TTF比较稳定,不会被空气中的氧自动氧化,所以TTC被广泛地用作酶试验的氢受体,植物根所引起的TTC还原,可因加入琥珀酸、延胡索酸、

氯化三苯四氮唑的基本介绍

  氯化三苯四氮唑又称2,3,5-氯化三苯基四氮唑、四唑红,简称TTC,TTZ,或TPTZ,一种脂溶性光敏感复合物,即可用来检测种子的生存能力,也可用来检测哺乳动物组织的缺血梗塞。检测机制在于TTC本身可作为一种氧化还原指示剂,活细胞内的脱氢酶(尤其是线粒体内的琥珀酸脱氢酶)可以将TTC还原。对于种

琼脂糖凝胶电泳分离-乳酸脱氢酶同工酶实验

电泳分离法             实验方法原理 乳酸脱氢酶( lactate dehydrogenase, 简称为LDH) EC ( 1 ,1 , 1 . 2) 存在于一切有糖酵

细胞碱性磷酸酶染色

实验概要细胞碱性磷酸酶染色实验原理胚胎干细胞中碱性磷酸酶的活性比较高, 5-溴-4-氯-3吲哚-磷酸盐(BCIP)能被碱性磷酸酶水解,形成一个中间体,这个中间体能与氯化硝基四氮唑蓝,也称氮蓝四唑(NBT)反应生成白色的中间二聚体和NBT-蓝紫色结晶物。通过染色结果可以相对得知碱性磷酸酶的活性,进

小儿免疫缺陷疾病的补体和吞噬细胞功能测定

  1.补体测定  包括血清总补体溶血活性(CH50)、单个补体成分(如Clq、r、s,C2-9)和补体调节因子(如D因子、H因子、I因子、备解素和C1抑制因子)的测定。  2.吞噬细胞功能测定  包括周围血中性粒细胞计数和形态观察,以单克隆抗CD14抗体标记计数巨噬细胞,用硝基四唑氮蓝(NBT)还

中性粒细胞功能检测的原理和方法

  (一)趋化功能检测  1.原理:中性粒细胞在趋化因子如微生物的细胞成分及其代谢产物、补体活性片段(C5a、C3a)、某些细胞因子等作用下产生趋化运动,其趋化运动强度可反映中性粒细胞的趋化功能。  2.方法学:  (1)滤膜渗透法(Boyden小室法);  (2)琼脂糖平板法。  (二)吞噬和杀菌

琥珀酸脱氢酶测定方法硫酸甲酯吩嗪(PMS)反应法

琥珀酸脱氢酶能通过一系列人工电子受体,如与PMS(吩嗪二甲酯硫酸盐),DCPIP(2,6-二氯酚靛酚)等发生反应催化琥珀酸的氧化,而借助这些中间产物的颜色变化,通过分光光度计检测即可加以定量反映,其反应式为:①Succinate+PMS→Fumarate+PMSH2;②PMSH2+DCPIP→PMS

氮蓝四唑(NBT)法测定超氧物歧化酶(SOD)活力

一、原理 超氧物歧化酶(superoxidedismutase,SOD)普遍存在于动、植物  体内,是一种清除超氧阴离子自由基的酶。本实验依据超氧物歧化酶抑制氮蓝四唑(NBT)在光下的还原作用来确定酶活性大小。在有氧化物质存在下,核黄素可被光还原,被还原的核黄素在有氧条件下极易再氧化而产生O2,可

琼脂糖凝胶电泳分离-乳酸脱氢酶同工酶实验

实验方法原理乳酸脱氢酶( lactate dehydrogenase, 简称为LDH) EC ( 1 ,1 , 1 . 2) 存在于一切有糖酵解作用的细胞中, 在NAD+存在下催化乳酸脱氢形成丙酮酸或使丙酮酸还原成乳酸。其酶蛋白是由四个亚基组成的四聚体, 亚基有心脏型( H 型) 及肌肉型( M型)

琼脂糖凝胶电泳分离-乳酸脱氢酶同工酶实验

实验方法原理 乳酸脱氢酶( lactate dehydrogenase, 简称为LDH) EC ( 1 ,1 , 1 . 2) 存在于一切有糖酵解作用的细胞中, 在NAD+存在下催化乳酸脱氢形成丙酮酸或使丙酮酸还原成乳酸。其酶蛋白是由四个亚基组成的四聚体, 亚基有心脏型( H 型) 及肌肉型

冰冻切片NADH心肌黄酶活性染色试剂盒使用说明

主要用途冰冻切片NADH心肌黄酶活性染色试剂是一种旨在使用人工电子受体染料二甲基噻唑二苯基四唑嗅蓝(MTT),受到NADH心肌黄酶催化还原,产生不溶性蓝黑色色素沉淀,来分析冰冻组织样品中酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心改良传统方法、成功实验证明的。主要适用于动物组织细胞的心肌黄酶活性定性

NBT反应

NBT(硝基四氮唑蓝还原试验):用以检测中性粒细胞的胞内杀菌能力。由于中性粒细胞在杀菌过程中能量消耗剧增,耗氧量亦随之增加,磷酸己糖旁路代谢活力增强,葡萄糖-6-磷酸氧化脱氢,此时,加入NBT可接受所脱的氢,使原先呈淡黄色的NBT还原成点状或块状甲朊颗粒,并沉积在胞浆。

超氧化物歧化酶(SOD)活性的测定

【实验原理】SOD是含金属辅基的酶,它催化以下反应:02 - +02 - + 2H+ H2 02 +02由于超氧阴离子自由基02 - 寿命短,不稳定,不易直接测定SOD活性,而采用间接的方法。目前常用的方法有3种, 包括氮蓝四唑(NBT)光化还原法,邻苯三酚自氧化法,化学发光法。本实验主要介绍光化还