为什么电泳的一个泳道出现两条条带
应该是PCR的杂带。这种情况的原因可能很多，比如引物设计的特异性不好，或者退火温度不合适等。......阅读全文
快速了解maxanGilbert化学修饰法
实验方法原理用化学试剂 处理具有末端放射性标记的DNA片段 ，造成碱基的特异性切割并产生一组具有不同长度的DNA链降解产物，经凝胶电泳分离和放射自显影后，可直接读出待测DNA片段的核苷酸序列。实验材料DNA试剂、试剂盒蒸馏水仪器、耗材电泳仪实验步骤一、取待测DNA片段，既可以是单链也可以是双链。 此
DNA测序——MaxamGilbert化学修饰法
实验方法原理用化学试剂 处理具有末端放射性标记的DNA片段 ，造成碱基的特异性切割并产生一组具有不同长度的DNA链降解产物，经凝胶电泳分离和放射自显影后，可直接读出待测DNA片段的核苷酸序列。实验材料DNA试剂、试剂盒蒸馏水仪器、耗材电泳仪实验步骤一、取待测DNA片段，既可以是单链也可以是双链。 此
方案3－多蛋白质复合体的非变性琼脂糖凝胶电泳实验
实验材料含有目标蛋白的细胞提取物试剂、试剂盒琼脂糖凝胶脱色液凝胶染色液甘油2 X 上样缓冲液SDS-聚丙烯酰胺凝胶仪器、耗材玻璃纸锥形瓶凝胶电泳装置微量离心过滤装置小型离心机微波炉Ultrafree-DA 装置实验步骤一、非变性凝胶的制备在非变性凝胶缓冲液中，制备水平的 0.8% 琼脂糖凝胶，规格约
PCR法检测支原体
PCR法是20世纪80年代中期建立起来的一种体外DNA扩增技术，其基本原理是酶促DNA合成反应，即在DNA模板、引物和脱氧核糖核酸存在下，经DNA聚合酶的作用，使DNA 链扩增延伸。该方法具有灵敏度高、特异性强、快速的特点，但其对实验环境的要求严格，实验成本较高，有时还有假阳性的现象出现。1、仪器设
PCR法检测支原体
PCR法是20世纪80年代中期建立起来的一种体外DNA扩增技术，其基本原理是酶促DNA合成反应，即在DNA模板、引物和脱氧核糖核酸存在下，经DNA聚合酶的作用，使DNA 链扩增延伸。该方法具有灵敏度高、特异性强、快速的特点，但其对实验环境的要求严格，实验成本较高，有时还有假阳性的现象出现。1、仪
微生物学技术:PCR法检测支原体
PCR法是20世纪80年代中期建立起来的一种体外DNA扩增技术，其基本原理是酶促DNA合成反应，即在DNA模板、引物和脱氧核糖核酸存在下，经DNA聚合酶的作用，使DNA 链扩增延伸。该方法具有灵敏度高、特异性强、快速的特点，但其对实验环境的要求严格，实验成本较高，有时还有假阳性的现象出现。1、仪
用于PCR的植物基因组DNA快速制备方法（二）
2 结果与讨论2.1 PCR模板DNA的快速制备本方法是将少量植物叶片在TE溶液或去离子水中，经钨合金珠在离心管内的振荡破碎，直接获得DNA溶液。用多功能组织细胞研磨器（MTM-60）一次可操作60个样品。琼脂糖凝胶电泳表明，用TE和去离子水都可获得分子量较大的DNA片段（图1A）。用TE制备的DN
做电泳跑page、提取质粒、做WESTERN－BLOT时注意点
做电泳时注意容易出问题，以下问题要注意1. 跑page胶的时候小电压跑会避免高电压产生的热量尔导致的胶层变形。低电压泳道会比大电压泳道跑的直一些，且分离效果更高，有利于分子量相差不大的蛋白分离。2. 提取质粒的时候最后一步的酒精挥发很关键，基本上是其后续的酶切反应的决定性因素。所以这一步尽量挥发长一
SDSPAGE染色一般要多久
SDSPAGE染色一般要3min。十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)是在聚丙烯酰胺凝胶电泳中引用了SDS，是最常用的一种蛋白表达分析技术根据检体中蛋白质分子量大小的不同，使其在电泳胶中分离。SDS-PAGE实验步骤：1、组装胶板时检查封闭是否完全。否则跑出来的胶形状可能千奇百怪甚至
脉冲场凝胶中DNA片段的直接回收
实验方法原理 低熔点琼脂糖制备规模的 PFGE 经常被用于 DNA 片段的分离。不同大小的 DNA 可以用限制酶酶切产生高分辨率酶切图谱或产生用于插入噬菌体或质粒载体的片段。实验材料 DNA 大小标准基因组 DNA试剂、试剂盒 溴化乙锭酚：氯仿仪器、耗材 水浴实验步骤 一、材料1. 缓冲液和溶液溴化
脉冲场凝胶中DNA片段的直接回收
实验方法原理 低熔点琼脂糖制备规模的 PFGE 经常被用于 DNA 片段的分离。不同大小的 DNA 可以用限制酶酶切产生高分辨率酶切图谱或产生用于插入噬菌体或质粒载体的片段。 实验材料
RNA的甲醛变性电泳实验
RNA的甲醛变性电泳 实验方法原理 用溴化乙锭等荧光染料示踪的核酸电泳结果可用于判定核酸的纯度。由于DNA分子较RNA分子大许多，电泳迁移率低；而RNA中以
蛋白电泳现像之涂抹痕迹
如果你能够非常熟练的制备一块完美的凝胶，甚至对它进行改进都不十分困难，那么你真的应该值得庆幸。但是如果你不能达到这个水平也不要灰心。所有的优秀的科学家都是从失败中成长起来的，事实上，如果不出错我们就很难学到更多的东西。 我们整理了 SDS-PAGE「失误大全」，包括了过去实验室中许多学生跑的最「烂」
植物内参抗体该怎么选？
先来说说为什么要用内参抗体？内参抗体的真的是必要的吗？ 我举个例子，印度人和韩国人谁更富有？那还用说，当然是韩国人富有。 可是分明印度的GDP更高，为什么说韩国人更富有呢？ 那怎样实现呢，如果我们能数一数细胞，不同的泳道上同样数量的细胞是最好的，可是这实现不了。这时候我们就需要一个大致能代
常规组织样本核酸（DNA/RNA）提取纯化
20 分钟内快速纯化高品质，高产量，即用型 DNA（见图 20）多种规格可选择：Mini Kit 可处理 25 mg 组织，Micro Kit 可处理小于 10 mg 组织完全去除污染物和抑制剂可在 QIAcube 上进行自动化纯化表1 QIAamp DNA Mini Kit纯化各类样本的核酸产量样
刚刚！诺奖得主涉嫌造假又被撤稿－还有52篇论文P图造假
2019年，诺贝尔生理与医学奖联合授予William G. Kaelin Jr、Sir Peter J. Ratcliffe和Gregg L. Semenza，以表彰他们“对细胞感知和适应氧气供应的发现”。 近期，Gregg L. Semenza被质疑多篇论文涉嫌学术不端，Pubpeer已经挂
PCR需要注意的一些问题
扩增长目的片段当扩增大于5kb的目的片段时，可以使用用于超长PCR的酶或酶混合物以获得最佳产量（图24）。Taq DNA聚合酶并不能有效扩增较长目的片段（大于5kb），可能是因为其缺少3'-5'外切核酸酶活性，不能纠正dNTP错误掺入。错误配对的延伸几率大大降低，减少了较长产物的产量
RNA的甲醛变性电泳实验
RNA的甲醛变性电泳可以用于：（1）提取样品的总RNA后，一般根据RNA的凝胶电泳图来判断RNA的质量；（2）由于RNA容易形成二级结构，因此常用甲醛变性胶来进行RNA电泳，得到的电泳图能真实反映RNA的质量状况。实验方法原理用溴化乙锭等荧光染料示踪的核酸电泳结果可用于判定核酸的纯度。由于DNA分子
脉冲场凝胶中DNA片段的直接回收
低熔点琼脂糖制备规模的 PFGE 经常被用于 DNA 片段的分离。不同大小的 DNA 可以用限制酶酶切产生高分辨率酶切图谱或产生用于插入噬菌体或质粒载体的片段。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理低熔点琼脂糖制备规模的 PFGE 经常被用于 DNA 片段的分离。不同大小的 D
细胞系的－DNA－STR－谱_细胞系结果分析
实验材料GeneScan®和Genotyper®软件PowerMac计算机实验步骤本节包括 2 个主要领域：分析利用GeneScan®分析软件中 DNA 程序收集软件收集到的原始数据，和利用Genotype®软件为前面用GeneScan®软件分析过的 DNA 谱中的指定等位基因名称。1. 打开凝胶图
仅扩增全长cDNA末端的高级RACE方法
为了获得全长的cDNA 5’及3’末端序列，许多研究人员使用了称之为cDNA末端快速扩增，或RACE的方法。传统的RACE方法得到的PCR产物含有全长及断裂的cDNA产物。GeneRacer™试剂盒确保您只得到含有全长cDNA末端的完整序列，是您得到更高效的结果并节省您的时间GeneRacer™
Western－Blot－时，上样量是多少由什么决定
目的蛋白在样品中的含量，如果含量高，那么样品上样量要少一点，避免因条带过亮，印象分子量的确定以及微弱的修饰等。一般细胞裂解液样品，义翘的上样量大致在30µg/泳道。
PCR需要注意的一些问题
PCR需要注意的一些问题扩增长目的片段当扩增大于5kb的目的片段时，可以使用用于超长PCR的酶或酶混合物以获得zui佳产量）。Taq DNA聚合酶并不能有效扩增较长目的片段（大于5kb），可能是因为其缺少3'-5'外切核酸酶活性，不能纠正dNTP错误掺入。错误配对的延伸几率大大降低
如何避免IP检测过程中的重链干扰与轻链干扰？
免疫沉淀 (Immunoprecipitation，IP) 是利用抗原抗体特异性反应纯化富集目的蛋白的一种方法。抗体与细胞裂解液或表达上清中相应的蛋白结合后，再与ProteinA/G偶联的agarose或Sepharose珠子孵育，通过离心得到珠子-蛋白A/G-抗体-目的蛋白复合物，沉淀经过洗涤
两种蛋白质测定方法比较
植物组织总蛋白质的提取方法较多,常用的方法有TCA-acetone(三氯醋酸-丙酮沉淀)法,Tris法、磷酸缓冲液(PB)法和试剂盒法等。另外,蛋白质浓度的测定方法有紫外分光光度法(UV法)、Bradford法、定氮仪法、双缩脲(Biuret)法、BCA(Bicinchoninic Acid)法
蛋白Marker使用常见问题分析
做蛋白表达实验时，通常用SDS-PAGE电泳检测目的蛋白的表达情况，MARK是其中非常重要的参照物，使用Mark会遇到以下几种情况：条带模糊：电压过高或电泳时间过长，产热过多导致电泳缓冲液温度升高。建议参照Trans产品使用说明书。电泳缓冲液陈旧，建议使用新鲜的电泳缓冲液，为了获得理想的结果建议在使
五种致泻性大肠埃希氏菌鉴定试剂盒（PCR法）使用说明
产品说明病菌检测系列可针对食品、饲料等样品中的致病微生物的特异核酸片段进行扩增，仪器实时监测扩增过程中的荧光信号变化，自动判读结果。本产品用于致泻大肠埃希氏菌的检测。检出限为103 CFU/ml。 产品组成（96测试）试剂含量作用孔1反应液-uidA23μl/孔12孔/排8排（本产品使用12联PCR
做原核表达的几点教训和体会
最近在做原核表达，包涵体。以前也做过，但经验不多。一点失败的教训以及纯化过程中的体会，贴出来与大家共享，同时希望得到同行们的指正1. 首先介绍一下背景。载体是invitrogen公司的pET22b，Amp抗性。菌株是该公司的BL21 star DE3，是一个蛋白降解酶突变菌株，也就是说是一种优化表达
westernbloting电泳胶可以4度过夜吗
跑westernblot时电泳时的条带呈斜行原因很多主要可能是电泳凝胶配制时未搅拌均匀，造成条带未能直线跑完电泳凝胶中混入气泡，造成条带被挤压倾斜也可能是样品缓冲液有干扰，造成条带迁移率不统一另外上样量过大，被其他泳道挤压也有可能
western－blot－怎么保证上样量一致
western blot 要保证上样量一致关键就是保证每个泳道样品的蛋白量一致可以先进行浓度检测，通过浓度检测得出样品总蛋白量。根据总蛋白量调整SDS PAGE的上样体积，保证上样量一致或者先行将SDS PAGE染色，根据条带大小调整上样体积也能保证上样量一致