T细胞及B细胞的分离
将淋巴细胞悬液通过尼龙棉柱,B 细胞粘附于尼龙棉上,T细胞则不粘附,先用RPMI l640 培基洗脱尼龙棉柱,流下的细胞悬液含有丰富的T 细胞。然后用力反复挤压尼龙柱、挤出粘附在尼龙棉上的B 细胞,并用少量的RPMI l640 培基洗脱,此细胞悬液含有丰富的B 细胞。尼龙柱(塑料管)的长短和尼龙棉的多少,视分离细胞的多少而定。......阅读全文
T-细胞及B-细胞的分离
将淋巴细胞悬液通过尼龙棉柱,B 细胞粘附于尼龙棉上,T细胞则不粘附,先用RPMI l640 培基洗脱尼龙棉柱,流下的细胞悬液含有丰富的T 细胞。然后用力反复挤压尼龙柱、挤出粘附在尼龙棉上的B 细胞,并用少量的RPMI l640 培基洗脱,此细胞悬液含有丰富的B 细胞。尼龙柱(塑料管)的长短和尼龙棉的
关于T-细胞及B-细胞的分离介绍
将淋巴细胞悬液通过尼龙棉柱,B 细胞粘附于尼龙棉上,T细胞则不粘附,先用RPMI l640 培基洗脱尼龙棉柱,流下的细胞悬液含有丰富的T 细胞。然后用力反复挤压尼龙柱、挤出粘附在尼龙棉上的B 细胞,并用少量的RPMI l640 培基洗脱,此细胞悬液含有丰富的B 细胞。尼龙柱(塑料管)的长短和尼龙
磁珠法分离T细胞和B细胞
基 本 方 案 1 用 AUTOMACS 系 统 进行 总 T 细胞、 CD4 + 细 胞 或 CD8+T细胞的自动分离材 料小鼠HBSS 洗涤缓冲液基 本 方 案 2 使 用 AUTOMACS 系 统 进 行 B 细胞的自动分选材 料小鼠HBSS 洗涤缓冲液MACS 缓冲液CD45R (B2 2
T、B淋巴细胞分离实验
实验方法原理 淋巴细胞与用溴花二氨基异硫氢化物(简称AET)处理的绵羊红细胞(SRBC)混合后,其中全部T淋巴细胞均能吸附AET—SRBC,形成牢固稳定而巨大的E—花环,较正常未处理的SRBC形成的E—花环百分比为高,而且形成快速,不易脱落,重复性好。再经淋巴细胞分层液分离时,AET—E花环易沉于管
T、B淋巴细胞分离试验
实验概要淋巴细胞主要分T淋巴细胞和B淋巴细胞两大亚群,它们具有不同的特性和功能,为此在进行某些免疫学实验时,首先需分离出纯的T淋巴细胞和B淋巴细胞。本实验介绍了T、B淋巴细胞分离试验的操作步骤。实验原理本试验的原理为:淋巴细胞与用溴花二氨基异硫氢化物(简称AET)处理的绵羊红细胞(SRBC)混合后,
T、B淋巴细胞分离试验
淋巴细胞主要分T淋巴细胞和B淋巴细胞两大亚群,它们具有不同的特性和功能,为此在进行某些免疫学实验时,首先需分离出纯的T淋巴细胞和B淋巴细胞。本试验的原理为:淋巴细胞与用溴花二氨基异硫氢化物(简称AET)处理的绵羊红细胞(SRBC)混合后,其中全部T淋巴细胞均能吸附AET—SRBC,形成牢固稳定而巨大
T、B淋巴细胞分离实验
淋巴细胞主要分T淋巴细胞和B淋巴细胞两大亚群,它们具有不同的特性和功能,用于(1)免疫学研究(2)淋巴细胞的鉴定。实验方法原理淋巴细胞与用溴花二氨基异硫氢化物(简称AET)处理的绵羊红细胞(SRBC)混合后,其中全部T淋巴细胞均能吸附AET-SRBC,形成牢固稳定而巨大的E-花环,较正常未处理的SR
磁珠法分离小鼠T细胞和B细胞
PriCells: 磁珠法分离小鼠T细胞和B细胞 基本方案用AUTOMACS系统进行总T细胞、CD4+细胞或CD8+T细胞的自动分离 实验材料1、小鼠2、HBSS洗涤缓冲液3、MACS缓冲液4、磁珠5、RPMI-10完全培养基6、AUTOMACS系统和分选柱7、30μm尼龙网或40μm预分离滤膜 实
人外周血B、T淋巴细胞的分离方法
目前常用Ficoll密度梯度离心法直接分离和纯化外周血单个核细胞。方法: 1. 在短中管中加入适量淋巴细胞分离液。 2. 取肝素抗凝静脉血与等量Hank's液或RPMI1640充分混匀,用滴管沿管壁缓慢叠加于分层液面上,注意保持清楚的界面。水平离心2000rpm×20分钟。 3. 离心
流式细胞术分离法分离T淋巴细胞和B淋巴细胞
一、试剂及配制1. RPMI-1640培养基:应选购不含酚红的,使用时加入5%的小牛血清。2. FITC-抗CD3单克隆抗体:FITC为异硫氰酸荧光素,CD3为T细胞表面特有的蛋白质分子(分化抗原)。二、操作方法1. 用聚蔗糖-泛影葡胺密度梯度离心法分离单个核细胞,用RPMI-1640培养基配成1×
按细胞比重分离B细胞
按细胞比重分离B细胞1.将2~3ml含3×107纯化的B细胞(B细胞>90%)的细胞悬液加到3ml Percoll溶液(比重1.074)上,水平离心1000×g 20分钟。2.吸去无细胞上清液,交界面的低密度B细胞和大部分Percoll溶液。由于此时细胞沉淀非常松散,需留下约0.2ml Percol
T细胞亚群的分离
T细胞亚群的分离分离T细胞亚群,包括各种CD抗原阳性的亚群、αβ型T细胞受体阳性的T细胞或γδ型T细胞、或者其它表面标志不同的T细胞亚群,通常需要有相应的特异性抗体。用直接或间接免疫荧光染色,通过FACS分离细胞;或用抗体包被的免疫磁珠,通过磁场分离细胞;或用抗体亲和层析柱分离细胞。
T细胞与B细胞的活化过程
T、B细胞活化都需抗原,但T细胞不能直接识别抗原,而只能识别经抗原提呈细胞处理过的抗原B细胞可以直接识别抗原,也可以识别经提呈细胞处理过的抗原。T\B细胞活化过程所需的Th细胞不同。
关于T细胞、B细胞亚群的简介
淋巴细胞是构成机体免疫系统的主要细胞群,参与机体细胞及体液免疫。可将其分为 T 淋巴细胞、B淋巴细胞和自然杀伤细胞(NK细胞)。T细胞亚群是细胞免疫的主要免疫应答形式,根据表型不同分为CD3细胞、CD4细胞、CD8细胞三类,在正常情况下,这三类细胞处于动态平衡状态,其中CD3细胞是全T细胞标志,
B细胞对T细胞依赖抗原的应答
一般情况下当大量抗原进入未经免疫的机体后,诱发初次免疫应答时其抗原呈递细胞多由巨噬细胞完成。经Mφ活化TH细胞后再由活化的TH细胞辅助B细胞产生抗体和形成记忆B细胞。但当再次免疫应答发生时,抗原呈递细胞则主要由已扩增的B细胞克隆承担。由于其膜Ig受体亲和力增高故对少量抗原也能摄取,故可取代巨噬细
T-细胞亚群的分离纯化
分离出来的T 细胞用抗CD8 抗体可分为CD4 + 和 CD8+ T 细胞。由于两种细胞都可回收,此法优于抗体和补体溶解法作者:J.E.科利根等,译者:曹雪涛等,本实验来自「精编免疫学实验指南」实验步骤基 本 方 案 间 接 淘 洗 法 分 离 T 细胞亚群材 料亲和纯化的人免疫球蛋白吸附的羊抗鼠
T-细胞亚群的分离纯化
基 本 方 案 间 接 淘 洗 法 分 离 T 细胞亚群材 料亲和纯化的人免疫球蛋白吸附的羊抗鼠 Ig (Tago)0.05m ol/L Tris •Cl,pH9. 5抗 CD 8 抗体或其他特异性小鼠抗体(多克隆或单克隆;如 Coulter 或 Becton Dickinson)PBS总 T 细
从单个核细胞中分离T细胞
从单个核细胞中分离T细胞1)用玫瑰花结形成试验分离E+细胞1.制备AET-绵羊红细胞1)在刻度离心管中,用无菌的含5%小牛血清的Hanks液洗涤绵羊红细胞3次,每次离心500×g 10分钟。2)吸净上清液,测量红细胞比容。轻击试管分散红细胞,加入4倍红细胞比容量、新鲜制备的AET溶液,混匀。室温中反
简述T细胞、B细胞亚群的临床意义
评价体内免疫调节的平衡状态。CD4/CD8维持在1.5~2.0之间,如机体免疫功能发生异常,则T细胞亚群细胞会出现数量的变化,引起一系列的病理改变。 1.CD4/CD8升高:结节病,自身免疫性疾病,如系统性红斑狼疮(SLE)、类风湿等。SLE免疫异常的核心是多克隆B细胞的激活、自身抗体产生,B
T淋巴细胞的分离技术
(一)原理 混合单个核细胞悬液在通过尼龙毛柱时,B细胞、浆细胞、单核细胞和一些辅助细胞被选择性粘附于尼龙毛上,而多数T细胞则通过尼龙毛柱,这是获得富含T细胞群的有效方法。(二)材料及试剂1.尼龙毛(Femwall Laboratories,LP-1 Leukoqak leukocyte Filte
T淋巴细胞的分离技术
(一)原理 混合单个核细胞悬液在通过尼龙毛柱时,B细胞、浆细胞、单核细胞和一些辅助细胞被选择性粘附于尼龙毛上,而多数T细胞则通过尼龙毛柱,这是获得富含T细胞群的有效方法。 (二)材料及试剂 1.尼龙毛(Femwall Laboratories,LP-1 Leukoqak leu
T淋巴细胞的分离技术
(一)原理混合单个核细胞悬液在通过尼龙毛柱时,B细胞、浆细胞、单核细胞和一些辅助细胞被选择性粘附于尼龙毛上,而多数T细胞则通过尼龙毛柱,这是获得富含T细胞群的有效方法。 (二)材料及试剂 1.尼龙毛(Femwall Laboratories,LP-1 Leukoqak leukocyte F
从单个核细胞中分离T细胞的方法
1)用玫瑰花结形成试验分离E+细胞:1.制备AET-绵羊红细胞:1)在刻度离心管中,用无菌的含5%小牛血清的Hanks液洗涤绵羊红细胞3次,每次离心500×g 10分钟。2)吸净上清液,测量红细胞比容。轻击试管分散红细胞,加入4倍红细胞比容量、新鲜制备的AET溶液,混匀。室温中反应30分钟。3)用无
Cell揭秘:B细胞与T细胞的相互作用
免疫系统是多种不同细胞共同抵御入侵者的一个复杂网络,能否成功地击退感染,取决于这些细胞之间的相互作用。在众多免疫细胞中,B细胞是一类特化的免疫细胞,它们生成的抗体可以结合微生物表面上称作为抗原的外源分子。在感染发生前,机体就拥有一个多样化的B细胞库,每个B细胞都能生成一种独特的抗体;而T细胞则是
T依赖性B细胞活化
一旦激活,B细胞就会参与一个两步分化过程,该过程既产生短暂的浆母细胞以提供直接保护,又产生长寿命的浆细胞和记忆B细胞以提供长期保护。[12]第一步为卵泡外反应,发生在淋巴滤泡外,但仍在二级淋巴器官内。[12]在此步骤中,活化的B细胞增殖,免疫球蛋白发生类别转换,并分化为成浆细胞,产生早期弱的抗体,大
Cell:B细胞诱导T细胞抗肿瘤免疫机制
近日,美国耶鲁大学的研究团队发现B细胞诱导肿瘤抗原特异性的滤泡辅助性CD4+T 细胞,从而发挥抗肿瘤免疫应答作用的机制。相关研究成果发表在《Cell》,题为:Neoantigen-driven B cell and CD4 T follicular helper cell collaborati
T、B及其他免疫细胞的纯化
经密度梯度离心法获得的单个核细胞是不均一的细胞群,还可根据各种细胞的生物学特性、表面标记等进一步纯化。例如单核细胞等具有粘附和吞噬作用,可用玻璃或塑料容器的粘壁法和吞噬羰基铁颗粒的磁铁吸引法除去或获得。绵羊红细胞能与人T细胞形成E花环,藉此可通过花环沉降法分离T与B淋巴细胞。此外,利用B细胞具有
T淋巴细胞要如何分离
操作方法1.尼龙毛的清洗与干燥(1)戴上已经洗去滑石粉的一次性手套,将尼龙毛(1包或2包,每包35g)放入烧杯中,加入蒸馏水或去离子水,用铝箔盖上烧杯并煮沸约10min。(2)冷却至常温,倒入漏斗内,使水滴干。(3)重复(1)、(2)步骤6次。(4)将尼龙毛摊在铺有纱布的方盘内,37℃温箱干燥2~3
用尼龙毛法分离B细胞
用尼龙毛法分离B细胞1)尼龙毛柱的制备1.取直接3D,长度约250px的尼龙毛,用0.2mol/L HCl浸泡处理过夜。用双蒸水洗净HCl,置37℃烘干备用。2.称取50mg尼龙毛,均匀分散,置Hanks液中浸泡。取1ml注射器,出口接塑料管并夹住。将尼龙毛均匀填塞入注射器中,排净空气,柱高约5~1