NBT(氯化硝基四氮唑蓝)法测定琥珀酸脱氢酶的介绍
NBT易溶于水,呈淡黄色,以NBT为受氢体,接受由琥珀酸钠盐被酶作用而脱下的氢,进而形成紫蓝色的沉淀,于反应体系中加入PMS,混匀,37℃保温30min,之后加入TCA终止反应。加异丙醇溶解显色,混匀,即可于548nm测OD值。规定:30min内548nm下OD值为1.0时的酶量为1个活力单位。比活力=活力单位数/毫克蛋白。......阅读全文
硝基四唑氮蓝试验的正常值及临床意义是什么
正常值 正常人,一般认为10%以上者为阳性。5%-10%为NBT阴性。若NBT为阴性,则取0.5ml肝素抗凝血加10μg细菌内毒素后按上法试之,如NBT阳性细胞>29%,表示受检者的中性粒细胞吞噬功能正常,若仍为5%-10%,则属功能异常。 临床意义 NBT低值见于慢性肉芽肿、先天性丙球缺
琥珀酸脱氢酶染色法
淋巴细胞和单核细胞含有丰富的琥珀酸脱氢酶染色活性。该染色显示有丰富的甲替颗粒,其分布与线粒体一致。 嗜中性分叶核及粒细胞系统的幼稚阶段也有酶活性反应。 巨核细胞和血小板的琥珀酸脱氢酶活性很强。 【临床意义】 脱氢酶是一组酶,目前用组织化学方法显示的10余种。虽然显示各种脱氢酶时所用底物
关于氯化三苯基四氮唑法的基本介绍
氯化三苯基四氮唑(TTC)是标准氧化还原电位为80mV的氧化还原物质,溶于水中成为无色溶液,但还原后即生成红色而不溶于水的三苯基甲臜(TTF)。 氯化三苯基四氮唑,生成的TTF比较稳定,不会被空气中的氧自动氧化,所以TTC被广泛地用作酶试验的氢受体,植物根所引起的TTC还原,可因加入琥珀酸、延
关于氯化三苯基四氮唑法的方法介绍
1、氯化三苯基四氮唑法— 定性测定 (1)配置反应液 把1%TTC溶液,0.4moL/L琥珀酸钠和磷酸缓冲液按1:5:4比例混合。 (2)把根仔细洗净,把地上部分从茎基切除,将根放入三角瓶中,倒入反应液,以浸没根为度,置37℃左右暗处放1h,以观察着色情况,新根尖端几毫米以及细侧根都明显地变
氮蓝四唑(NBT)法测定超氧物歧化酶(SOD)活力
一、原理 超氧物歧化酶(superoxidedismutase,SOD)普遍存在于动、植物 体内,是一种清除超氧阴离子自由基的酶。本实验依据超氧物歧化酶抑制氮蓝四唑(NBT)在光下的还原作用来确定酶活性大小。在有氧化物质存在下,核黄素可被光还原,被还原的核黄素在有氧条件下极易再氧化而产生O2,可
关于氯化三苯基四氮唑法—种子测定的介绍
一、氯化三苯基四氮唑法—种子测定的原理 有生活力的种子能够进行呼吸代谢,在呼吸代谢途径中由脱氢酶催化所脱下来?的氢酶催化所脱下来的氢可以将无色的2,3,5-三苯基氯化四唑还原为红色、不溶性的三苯基甲臢,而且种子的生活力越强,代谢活动越旺盛,被染成红色的程度越深,死亡的种子由于没有呼吸作用,因而
NK细胞活性测定实验——乳酸脱氢酶释放法
实验方法原理乳酸脱氢酶(LDH)存在于细胞内,正常情况下,不能透过细胞膜。当细胞受到损伤时,由于细胞膜通透性改变,LDH可从细胞内释放至培养液中。释放出来的LDH再催化乳酸的过程中,使氧化型辅酶Ⅰ(NAD+)变成还原型辅酶(NADH2),后者再通过递氢体-吩嗪二甲酯硫酸盐(PMS)还原碘硝基氯化氮唑
MTT法测定琥珀酸脱氢酶的介绍
MTT是一种黄颜色的染料。活细胞线粒体中琥珀酸脱氢酶能够代谢还原MTT,同时在细胞色素C的作用下生成蓝色(或蓝紫色)不溶于水的甲臜(Formazana),经异丙醇作用颗粒溶解显色。在通常情况下,甲臜生成量与活细胞数成正比,因此可根据光密度570nm处OD值推测出活细胞的数目。
NK细胞活性检测实验步骤
细胞毒检测技术包括补体依赖细胞毒试验、NK细胞介导的细胞毒试验和特异性CTL活性检测,常用的实验技术有后两种。NK细胞(natural killer cell)是在天然免疫系统发挥主要作用的效应细胞,可直接杀伤病毒感染的靶细胞和某些肿瘤细胞。而细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymp
氯化三苯基四氮唑法测定根系活力的原理和操作方法
【原理】氯化三苯基四氮唑(TTC)是标准氧化还原电位为80mV的氧化还原物质,溶于水中成为无色溶液,但还原后即生成红色而不溶于水的三苯基甲 (TTF),如下式:生成的TTF比较稳定,不会被空气中的氧自动氧化,所以TTC被广泛地用作酶试验的氢受体,植物根所引起的TTC还原,可因加入琥珀酸、延胡索酸、
乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测NK细胞活性实验
实验方法原理乳酸脱氢酶(LDH)是活细胞胞浆内含酶之一。在正常情况下,不能透过细胞膜。当靶细胞受到效应细胞的攻击而损伤时,细胞膜通透性改变,LDH可释放至介质中,释放出来的LDH在催化乳酸生成丙酮酸的过程中,使氧化型辅酶I(NAD+)变成还原型辅酶I (NADH2),后者再通过递氢体-吩嗪二甲酯硫酸
乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测NK细胞活性实验
实验方法原理 乳酸脱氢酶(LDH)是活细胞胞浆内含酶之一。在正常情况下,不能透过细胞膜。当靶细胞受到效应细胞的攻击而损伤时,细胞膜通透性改变,LDH可释放至介质中,释放出来的LDH在催化乳酸生成丙酮酸的过程中,使氧化型辅酶I(NAD+)变成
乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测NK细胞活性实验
实验方法原理 乳酸脱氢酶(LDH)是活细胞胞浆内含酶之一。在正常情况下,不能透过细胞膜。当靶细胞受到效应细胞的攻击而损伤时,细胞膜通透性改变,LDH可释放至介质中,释放出来的LDH在催化乳酸生成丙酮酸的过程中,使氧化型辅酶I(NAD+)变成还原型辅酶I (NADH2),后者再通过递氢体-吩嗪
乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测NK细胞活性实验
实验方法原理 乳酸脱氢酶(LDH)是活细胞胞浆内含酶之一。在正常情况下,不能透过细胞膜。当靶细胞受到效应细胞的攻击而损伤时,细胞膜通透性改变,LDH可释放至介质中,释放出来的LDH在催化乳酸生成丙酮酸的过程中,使氧化型辅酶I(NAD+)变成
细胞碱性磷酸酶染色
实验概要细胞碱性磷酸酶染色实验原理胚胎干细胞中碱性磷酸酶的活性比较高, 5-溴-4-氯-3吲哚-磷酸盐(BCIP)能被碱性磷酸酶水解,形成一个中间体,这个中间体能与氯化硝基四氮唑蓝,也称氮蓝四唑(NBT)反应生成白色的中间二聚体和NBT-蓝紫色结晶物。通过染色结果可以相对得知碱性磷酸酶的活性,进
关于氯化三苯基四氮唑法的测定根系的试剂介绍
氯化三苯基四氮唑法的测定根系的试剂: 1、乙酸乙酯; 2、连二亚硫酸钠(Na2S2O4,为强还原剂,俗称保险粉); 3、1%TTC溶液:准确称取TTC 1.0g,溶于少量蒸馏水中,定容至100ml; 4、0.4%TTC溶液:准确称取TTC 0.4g,溶于少量蒸馏水中,定容至100ml;
氮蓝四唑(NBT)法测定超氧化物歧化酶(SOD)活力
一、原理 超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)普遍存在于动、植物体内,是一种清除超氧阴离子自由基的酶,它催化下列反应: 2O +2H →H O +O 本反应产物H O 可由过氧化氢酶进一步分解或被过氧化物酶利用。 本实验依据超氧化物歧化酶抑制
NBT反应
NBT(硝基四氮唑蓝还原试验):用以检测中性粒细胞的胞内杀菌能力。由于中性粒细胞在杀菌过程中能量消耗剧增,耗氧量亦随之增加,磷酸己糖旁路代谢活力增强,葡萄糖-6-磷酸氧化脱氢,此时,加入NBT可接受所脱的氢,使原先呈淡黄色的NBT还原成点状或块状甲朊颗粒,并沉积在胞浆。
细胞活性测定方法介绍与使用探讨(MTT法、XTT法、CCK8法...
细胞活性测定方法有台盼蓝染色法、克隆(集落)形成法、3H放射性同位素掺入法、MTT法等。其中MTT法以其快速简便,不需要特殊检测仪器、无放射性同位素、适合大批量检测的特点而得到广泛的应用。但MTT法形成的Formazan为水不溶性的,需要加有机溶剂溶解,由于在去上清操作时会有可能带走小部分的Form
冰冻切片NADH心肌黄酶活性染色试剂盒使用说明
主要用途冰冻切片NADH心肌黄酶活性染色试剂是一种旨在使用人工电子受体染料二甲基噻唑二苯基四唑嗅蓝(MTT),受到NADH心肌黄酶催化还原,产生不溶性蓝黑色色素沉淀,来分析冰冻组织样品中酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心改良传统方法、成功实验证明的。主要适用于动物组织细胞的心肌黄酶活性定性
糖化血清蛋白测定实验
实验方法原理 血清葡萄糖能与白蛋白及其它血清蛋白分子N末端的氨基上发生非酶促糖化反应,形成高分子酮胺结构.此酮胺结构能在碱性溶液中与硝基四氮唑蓝(NBT)发生还原反应,生成用甲胺,并以1-脱氧―1―吗啉果糖(OMF)为标准参照物进行比色测定,本实验来源于牡丹江医学院 本科 5 年制检验专业实验指
糖化血清蛋白测定实验
实验方法原理血清葡萄糖能与白蛋白及其它血清蛋白分子N末端的氨基上发生非酶促糖化反应,形成高分子酮胺结构.此酮胺结构能在碱性溶液中与硝基四氮唑蓝(NBT)发生还原反应,生成用甲胺,并以1-脱氧―1―吗啉果糖(OMF)为标准参照物进行比色测定,本实验来源于牡丹江医学院 本科 5 年制检验专业实验指导实验
冰冻切片NADH心肌黄酶活性染色试剂盒使用说明
冰冻切片NADH心肌黄酶活性染色试剂盒产品说明书(中文版) 主要用途 冰冻切片NADH心肌黄酶活性染色试剂是一种旨在使用人工电子受体染料二甲基噻唑二苯基四唑嗅蓝(MTT),受到NADH心肌黄酶催化还原,产生不溶性蓝黑色色素沉淀,来分析冰冻组织样品中酶活性的权威而经典的技术方法。该技术
超氧化物歧化酶(SOD)活性的测定
【实验原理】SOD是含金属辅基的酶,它催化以下反应:02 - +02 - + 2H+ H2 02 +02由于超氧阴离子自由基02 - 寿命短,不稳定,不易直接测定SOD活性,而采用间接的方法。目前常用的方法有3种, 包括氮蓝四唑(NBT)光化还原法,邻苯三酚自氧化法,化学发光法。本实验主要介绍光化还
琼脂糖凝胶电泳分离-乳酸脱氢酶同工酶实验
电泳分离法 实验方法原理 乳酸脱氢酶( lactate dehydrogenase, 简称为LDH) EC ( 1 ,1 , 1 . 2) 存在于一切有糖酵
琼脂糖凝胶电泳分离-乳酸脱氢酶同工酶实验
实验方法原理乳酸脱氢酶( lactate dehydrogenase, 简称为LDH) EC ( 1 ,1 , 1 . 2) 存在于一切有糖酵解作用的细胞中, 在NAD+存在下催化乳酸脱氢形成丙酮酸或使丙酮酸还原成乳酸。其酶蛋白是由四个亚基组成的四聚体, 亚基有心脏型( H 型) 及肌肉型( M型)
琼脂糖凝胶电泳分离-乳酸脱氢酶同工酶实验
实验方法原理 乳酸脱氢酶( lactate dehydrogenase, 简称为LDH) EC ( 1 ,1 , 1 . 2) 存在于一切有糖酵解作用的细胞中, 在NAD+存在下催化乳酸脱氢形成丙酮酸或使丙酮酸还原成乳酸。其酶蛋白是由四个亚基组成的四聚体, 亚基有心脏型( H 型) 及肌肉型
吞噬功能实验
实验材料 中性粒细胞试剂、试剂盒 NBT盐水PBS硝基蓝四氮唑肝素甲醇沙黄水仪器、耗材 试管毛细滴管玻片培养箱显微镜实验步骤 一、试管法 肝素抗凝血0.1 ml 滴于小试管底部,再加入等量NBT应用液↓37℃,30分钟(中间摇动一次),再置室温15分钟↓摇匀,用毛细管取一滴放于玻片一端,做血涂片↓立
四唑氮法的定义
中文名称四唑氮法英文名称tetrazolium method定 义以四唑盐作为氧化酶活性的定性标志,在组织切片中显示酶活性定位的方法。应用学科细胞生物学(一级学科),细胞生物学技术(二级学科)
机体细胞免疫功能的检测
实验概要本实验用硝基蓝四氮唑还原法检查了机体细胞的免疫功能。硝基蓝四氮唑,又称四唑氮蓝(nitroblue tetrazolium, NBT),是一种水溶性的淡黄色活性染料,当其被嗜中性白细胞的酶还原后,则变为非水溶性的蓝黑色甲月替(Formazan)颗粒,沉淀于胞浆内。当机体受细菌、真菌和