复制n次,同时含有两种引物的DNA分子所占比例是多少?

复制n次,同时含有两种引物的DNA分子所占比例是2n-2。......阅读全文

分子杂交技术随机引物合成法

  随机引物合成双链探针是使寡核苷酸引物与DNA模板结合,在Klenow酶的作用下,合成DNA探针。合成产物的大小、产量、比活性依赖于反应中模板、引物、dNTP和酶的量。通常,产物平均长度为400-600个核苷酸。利用随机引物进行反应的优点是:(1)Klenow片段没有5'→3'外切

分子遗传学词汇随机引物

中文名称:随机引物外文名称:random primer定义:随机引物是指当特定mRNA由于含有使逆转录酶终止的序列而难于拷贝其全长序列时,可采用随机六聚体这一非特异的引物来拷贝全长mRNA。

分子遗传学词汇引物RNA

中文名称:引物RNA外文名称:primer定义:引物RNA是一小段单链DNA或RNA,作为DNA复制的起始点,存在于自然中生物的DNA复制。

分子杂交CDNA探针的技术特点及应用介绍

cDNA(complementary DNA)是指互补于mRNA的DNA分子。cDNA是由RNA经一种称为逆转录酶(reversetranscriptase)的DNA聚合酶催化产生的,这种逆录酶是Temin等在70年代初研究致癌RNA病毒时发现的。该酶以RNA为模板,根据碱基配对原则,按照RNA的核

Nature揭示不同寻常的DNA复制机制

  研究人员发现了细胞如何修复一种潜在的破坏性DNA损伤——双链DNA断裂的细节。   当由于氧化、电离辐射、复制错误和某些代谢产物使得染色体经受双链断裂时,细胞会利用遗传相似的染色体通过一种涉及断裂分子两端的机制来修补这一缺口。为了修复失去一端的断裂染色体,细胞会利用DNA复制机器的一种独特构型

DNA复制起点pBR322质粒的优点

pBR322质粒的优点:(1)具有较小的分子量。4363bp,2.6×106Da,(2)具有两种抗菌素抗性基因可供作转化子的选择记号。(3)具较高的拷贝数,而且经过氯霉素扩增之后,每个细胞中可累积1000~3000个拷贝。(4)对多种常见的限制性内切核酸酶只含有一个能切割的位点。

DNA半保留复制的生物学意义

DNA既然是主要的遗传物质,它必须具备自我复制的能力,即通过复制形成新的和原来一样的DNA分子的能力。但双链DNA是如何解链、如何进行复制和如何保证DNA序列不变的,一直有很多的假说。DNA在活体内的半保留复制特征已为1958年以来的大量试验所证实。DNA分子独特的双螺旋结构,为复制提供了精确的模板

哪些因素会影响病毒的-DNA-复制?

影响病毒的 DNA 复制的因素:宿主细胞的状态:宿主细胞的营养状况、代谢水平、细胞周期阶段以及是否存在免疫反应等都会影响病毒 DNA 复制。例如,营养不良或免疫功能活跃的宿主细胞可能不利于病毒复制。宿主细胞内的酶和蛋白质:宿主细胞提供的参与 DNA 合成、转录和翻译的酶类,如 DNA 聚合酶、解旋酶

DNA聚合酶与复制的保真性

DNA复制的保真性是遗传信息稳定传代的保证。生物体至少有3种机制实现保真性:①遵守严格的碱基配对规律;②5’—3’聚合酶活性中心对底物的选择,使核苷酸的错配率仅为10-4~10-5;③3’—5’外切酶活性中心在复制出错时的即时校对,使错配率降至10-6~10-8。

随机引物法介绍DNA探针的标记方法

变性的探针溶液加入6个核苷酸的随机DNA小片段,作为引物,当后者与单链DNA多个部位互补结合后,按碱基互补原则不断在其3'-OH端添加同位素标记的单核苷酸,这样也可以获得放射性比活性很高的DNA探针。

点突变不易扩增突变系统(简称ARMS)分析实验

实验材料 正常 ARMS 引物 突变 ARMS 引物共 同(普通)引物试剂、试剂盒 4dNTP10 X PCR 反应缓冲液已知基因型 DNA 模板轻矿物油Taq DNA 聚合酶loading缓冲液DNA 分子大小标记DNA 样本仪器、耗材 Perkin-Elmer Cetus thermal cyl

点突变不易扩增突变系统(简称ARMS)分析实验

实验材料正常 ARMS 引物突变 ARMS 引物共 同(普通)引物试剂、试剂盒4dNTP10 X PCR 反应缓冲液已知基因型 DNA 模板轻矿物油Taq DNA 聚合酶loading缓冲液DNA 分子大小标记DNA 样本仪器、耗材Perkin-Elmer Cetus thermal cyler (

DNA两种酶会“夺权”

  德国最新研究发现,脱氧核糖核酸(DNA)的两种酶会互相争夺对基因表达的“控制权”,这种争夺会导致DNA上的基因编码读取出错,从而引发相关疾病。   德国杜伊斯堡-埃森大学日前发表公报说,该校研究人员发现名为Sir2的酶和名为Rpd3的酶会互相争夺对基因表达的“控制权”。当其中一种酶过度活跃,另

关于PCR,你知道多少?(一)

PCR的原理多聚酶链式反应(polymerase chain reaction)简称PCR技术,是近30多年发展起来的一种体外扩增特异性DNA片段的技术,可在数小时之内对仅有几个拷贝的基因放大千万倍。那么,PCR的原理是怎样的呢?PCR技术实际上是在模板DNA、引物以及原料(四种脱氧核糖核苷酸)在适

PCR常见问题汇总(二)

PCR反应体系与反应条件--------------------------------------------------------------------------------   标准的PCR反应体系:10×扩增缓冲液 10ul4种dNTP混合物 各200umol/L引物 各10~100p

PCR)聚合酶链式反应

 PCR技术可用于:(1)检验感染性疾病是否处于隐性或亚临床状态;(2)有效检测癌基因的突变,准确检测癌基因的表达量;(3)临床应用于检测地中海贫血的基因突变。  实验方法原理 PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。  PCR由变性--退火--

cDNA探针的原理简介

  cDNA(complementary DNA)是指互补于mRNA的DNA分子。而以此制作的DNA探针称为cDNA探针。  cDNA是由RNA经一种称为逆转录酶(reverse transcriptase)的DNA聚合酶催化产生的,这种逆录酶是Temin等在70年代初研究致癌RNA病毒时发现的。该

怎样找到一个细菌的特异性引物

PCR技术中扩增的是两引物之间的核苷酸序列,意思是采用该技术,可以大量扩增引物之间的序列,一般情况下,我们需要大量的某一基因的片段时,我们在基因的两端分别设计引物(一段一条),然后在体外,采用PCR的方法,用引物进行体外DNA复制,从而大量合成引物之间的基因。PCR即聚合酶链式反应是一种用于放大扩增

聚合酶链式反应是什么技术

聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction),简称PCR,是一种分子生物学技术,用于放大特定的DNA片段。可看作生物体外的特殊DNA复制。DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链,在DNA聚合酶的参与下,根据碱基互补配对原则复

聚合酶链式反应是怎么回事

聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction),简称PCR,是一种分子生物学技术,用于放大特定的DNA片段。可看作生物体外的特殊DNA复制。DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链,在DNA聚合酶的参与下,根据碱基互补配对原则复

细胞化学词汇DNA滚环式复制

滚环式复制(rolling circle replication)是噬菌体中常见的DNA复制方式。许多病毒DNA的复制、质粒、F因子在接合(conjugation)转移时其DNA的复制,以及许多基因扩增时都采用这种方式。

细胞化学词汇DNA半不连续复制

半不连续复制是指DNA复制时,前导链上DNA的合成是连续的,后随链上是由间断合成的短片段连接而成的,不连续的,故称为半不连续复制。DNA复制的最主要特点是半保留复制,另外,它还是半不连续复制(Semidiscontinuous replication)。半不连续模型是DNA复制的基本过程。

颠覆教科书,DNA复制方式或遭改写

  美国加州大学戴维斯分校和斯隆凯特林癌症纪念中心的研究人员首次捕捉到单个DNA分子的复制过程。尽管这段11秒的视频看起来像是一款上个世纪的视频游戏,但它清楚地记录下DNA复制时散发荧光的单链由左向右延伸的过程。  此前人们一直认为,DNA聚合酶构建DNA双链的过程是相互协调以某种方式协同工作的。然

新晋院士JBC文章解析DNA复制

  7月初,台湾最高学术研究机构“中央研究院”选出第29届新院士,其中生命科学组共入选7人,包括刘扶东,郑淑珍,谢道时,吴春放,余淑美,蔡明道,魏福全。任细胞与个体生物学研究所所长的谢道时教授主要从事DNA复制,以及基因突变等方面的研究,近期其研究组发表了题为“Probing conformat

关于T4DNA聚合酶的简介

  最近年来在枯草杆菌,鼠伤寒沙门氏杆菌等细胞及噬菌体T4、T5、T7中分离到DNA聚合酶,这里只介绍T4DNA聚合酶。T4DNA聚合酶与大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ相似,也是一条多肽链,分子量亦相近,但 氨基酸组成不同,它至少含有15个半胱氨酸残基。但是,它在作用上与大肠杆菌DNApol不同;[1]它无

PCR基因扩增仪的工作原理

  基因扩增仪性能,能满足不同工作环境的多种需求。可用作以聚合酶链式反应为特征的、以检测DNA/RNA为目的的各种病原体检测及基因分析。基因扩增仪广泛应用于分子生物学、医学、食品工业、司法科学、生物技术、环境科学、微生物学、临床诊断、流行病学、遗传学、基因芯片、基因检测、基因克隆、基因表达等领域。

PCR基因扩增仪的工作原理

基因扩增仪性能卓越,能满足不同工作环境的多种需求。可用作以聚合酶链式反应为特征的、以检测DNA/RNA为目的的各种病原体检测及基因分析。基因扩增仪广泛应用于分子生物学、医学、食品工业、司法科学、生物技术、环境科学、微生物学、临床诊断、流行病学、遗传学、基因芯片、基因检测、基因克隆、基因表达等领域。基

PCR基因扩增仪的工作原理

  基因扩增仪性能,能满足不同工作环境的多种需求。可用作以聚合酶链式反应为特征的、以检测DNA/RNA为目的的各种病原体检测及基因分析。基因扩增仪广泛应用于分子生物学、医学、食品工业、司法科学、生物技术、环境科学、微生物学、临床诊断、流行病学、遗传学、基因芯片、基因检测、基因克隆、基因表达等领域。

双链DNA探针随机引物合成法

  随机引物合成双链探针是使寡核苷酸引物与DNA模板结合,在Klenow酶的作用下,合成DNA探针。合成产物的大小、产量、比活性依赖于反应中模板、引物、dNTP和酶的量。通常,产物平均长度为400-600个核苷酸。利用随机引物进行反应的优点是:(1)Klenow片段没有5'→3'外切

DNA合成由RNA引物引发过程

DNA聚合酶不能发动新链的合成,只能催化已有链的延长;RNA聚合酶则不同,只要有模板存在,不需引物,就可以合成新RNA链。因此在体内先由RNA聚合酶合成RNA引物,DNA聚合酶再从RNA引物的3‘-OH端开始合成新的DNA链。催化RNA引物合成的酶称为引物合成酶。引物长度通常只有几个~10多个核苷酸