基于PCR的基因分型实验——用末端标记的引物PCR扩增SSLP
试剂、试剂盒正向和反向引物10 X T4 多聚核苷酸激酶缓冲液ATPT4 多聚核苷酸激酶模板DNA10 X PCR 扩增缓冲液4dNTP 混合液Taq DNA 聚合酶轻矿物油2 X 甲酰胺载样液仪器、耗材96孔微量板热循环仪用旧的X光胶片或者 Whatman 3MM 的过滤纸实验步骤展......阅读全文
基于-PCR-的差减-cDNA-克隆实验
实验方法原理 实验材料 A 和 B 类细胞的双链 cDNA (ds cDNA) 试剂、试剂盒
基于-PCR-的差减-cDNA-克隆实验
实验方法原理 实验材料 A 和 B 类细胞的双链 cDNA (ds cDNA)试剂、试剂盒 ALuIRsaIATPT4 多聚核苷酸激酶及其缓冲液DNA连接酶和及其缓冲液Taq DNA聚合酶及其缓冲液寡核苷酸引物4dNTP 混合物驱动 dNTP 混合物转化感受态菌株HEPES缓冲液链霉亲和素溶
基于-PCR-的差减-cDNA-克隆实验
差减克隆是分离和鉴定两个细胞群中差异表达的 mRNA 的有效技术。相比较的细胞类型是[+](或 测 试)细胞和[-](或驱动)细胞,在测试细胞中表达而不在驱动细胞中表达的 mRNA 将被分离出来。必需的差减次数主要取决于 cDNA 的多样性。多样性是指每一个细胞类型中不同的cDNA 或 cDNA 片
基于-PCR-的-DNA-斑点印迹实验
对于高通量的筛选,推荐使用几个热循环仪厂家提供的 96 孔或 384 孔 PCR 板,或者使用单个的管子。本实验来源于 PCR 实验指南(第二版),作者:种康,瞿礼嘉。实验方法原理dNTP ,PCR 缓冲液,聚合酶混合液,嵌套引物,LB-氨苄液体培养基,溶液NaOH,SSC,Tris-HCl,PCR
基于-PCR-的-DNA-斑点印迹实验
实验方法原理 dNTP ,PCR 缓冲液,聚合酶混合液,嵌套引物,LB-氨苄液体培养基,溶液NaOH,SSC,Tris-HCl,PCR 产物微量滴定板,尼龙膜,紫外交联装置,96 孔或 384 孔复制器,热循环仪,PCR 管或反应板
基于-PCR-的-DNA-斑点印迹实验
实验方法原理 dNTP ,PCR 缓冲液,聚合酶混合液,嵌套引物,LB-氨苄液体培养基,溶液NaOH,SSC,Tris-HCl,PCR 产物微量滴定板,尼龙膜,紫外交联装置,96 孔或 384 孔复制器,热循环仪,PCR 管或反应板试剂、试剂盒 dNTP PCR 缓冲液聚合酶混合液嵌套引物LB-氨苄
基于PCR技术的染色质沉淀分析
INTRODUCTIONAfter chromatin immunoprecipitation (ChIP), different PCR-based approaches can be used to determine how much DNA is precipitated at a locu
基于PCR技术的染色质沉淀分析
INTRODUCTION After chromatin immunoprecipitation (ChIP), different PCR-based approaches can be used to determine how much DNA is precipitated at a loc
基于-PCR-的-DNA-文库筛选实验方法
试剂、试剂盒 PCR 混合物PCR 引物寡核苷酸 杂交寡核苷酸PCR 正对照PCR 主要混合物蒸馏水仪器、耗材 琼脂糖凝胶电泳设备实验步骤 一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂蒸馏水2. 酶和酶缓冲液PCR 混合物(可以放在一起冰冻),对于 lml 反应,包括:200nmol 的各种 dNTP;1XVe
基于-PCR-的-DNA-文库筛选实验方法
试剂、试剂盒 PCR 混合物 PCR 引物寡核苷酸 杂交寡核苷酸 PCR 正对照 PCR 主要混合物 蒸馏水
基于-PCR-的-DNA-文库筛选实验方法
试剂、试剂盒PCR 混合物PCR 引物寡核苷酸杂交寡核苷酸PCR 正对照PCR 主要混合物蒸馏水仪器、耗材琼脂糖凝胶电泳设备实验步骤一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂蒸馏水2. 酶和酶缓冲液PCR 混合物(可以放在一起冰冻),对于 lml 反应,包括:200nmol 的各种 dNTP;1XVent 溶
基于PCR评估sgRNA特异性的方法
CRISPR/Cas9已经成为一种通用的基因组工程工具,依赖于一个单导向RNA(sgRNA)和Cas9酶进行基因组编辑。研究人员可以用简单、快速和经济的方法来产生sgRNAs,因此能够在培养细胞、小鼠、斑马鱼和其他模型系统中进行靶向诱变。为了靶向效率,预先筛选sgRNAs,对于成功诱变和减少动物
基于PCR技术的染色质沉淀分析2
METHOD Analysis of precipitated chromatin fractions (from Chromatin Immunoprecipitation on Unfixed Chromatin from Cells and Tissues to Analyze Histone
基于PCR技术的染色质沉淀分析1
INTRODUCTIONAfter chromatin immunoprecipitation (ChIP), different PCR-based approaches can be used to determine how much DNA is precipitated at a locu
基于EVAGREEN®方法的CRYSTAL数字PCR绝对定量检测
基于EVAGREEN®方法的CRYSTAL数字PCR绝对定量检测EvaGreen®是一种无致突变性、无细胞毒性的DNA结合染料,NaicaTM Crystal全自动微滴芯片数字PCR仪系统可兼容EvaGreen®染料进行的数字PCR实验分析。反应体系中游离的的EvaGreen®染料不发出荧光信号,但
基于-PCR-的基因分型实验——用末端标记的引物-PCR-扩增-SSLP
试剂、试剂盒正向和反向引物10 X T4 多聚核苷酸激酶缓冲液ATPT4 多聚核苷酸激酶模板DNA10 X PCR 扩增缓冲液4dNTP 混合液Taq DNA 聚合酶轻矿物油2 X 甲酰胺载样液仪器、耗材96孔微量板热循环仪用旧的X光胶片或者 Whatman 3MM 的过滤纸实验步骤展
基于PCR的遗传疾病风险检测新方法
当你问一个即将做父母的人在想什么,他们会告诉你,最重要的事情不是为宝宝准备好房间、安装汽车安全座椅、或者安排日托,而是孩子能够健康地出生。然而,许多父母并不知道他们携带致命基因突变,直至有缺陷的孩子出生。然后他们想知道,如果再生一个孩子是否会发生同样的事情。在生育年龄之前导致严重出生缺陷和死亡的基因
基于PCR的遗传疾病风险检测新方法
当你问一个即将做父母的人在想什么,他们会告诉你,最重要的事情不是为宝宝准备好房间、安装汽车安全座椅、或者安排日托,而是孩子能够健康地出生。然而,许多父母并不知道他们携带致命基因突变,直至有缺陷的孩子出生。然后他们想知道,如果再生一个孩子是否会发生同样的事情。 在生育年龄之前导致严重出生缺陷和死
基于数字PCR的单分子DNA定量技术研究进展(三)
3.2 dPCR在转基因植物检测方面的研究 转基因植物及相关食品的定量分析主要测定转入基因的相对含量。目前常用qPCR作为核酸定量方法。dPCR可以不需要校准物而准确测量低拷贝的DNA分子。Corbisier 等用dPCR分析了提取于MON810玉米种子的外源检测基因和hmg基因的拷贝数,验证了dP
基于数字PCR的单分子DNA定量技术研究进展(四)
NGS 是一种识别和确认未知致病菌的前景广阔的技术,然而其在生物防御和公共健康应用等方面的时效性,却往往因为缺乏快速、有效、可靠的自动DNA样品制备方法而受到限制。为了突破这种限制,Kim 等设计了一种基于流体分布元件的数字微流体(DMF) 平台,使得多子系统模块能够进入自动NGS库样品
基于数字PCR的单分子DNA定量技术研究进展(二)
2 qPCR与dPCR比较研究 qPCR是目前DNA定量研究的主要技术,该技术通过在PCR反应体系中加入荧光结合染料(SYBR green I) 或荧光标记的探针( 如TaqMan Probes) ,利用实时积累的荧光信号监测整个扩增过程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析,以此来评估
基于数字PCR的单分子DNA定量技术研究进展(一)
摘要 数字PCR是一项针对单分子目标DNA的绝对定量技术。该技术是将含有DNA模板的反应溶液分配到大量独立的反应室中并且发生扩增反应,通过统计反应室中的阳性信号来定量DNA的拷贝数。DNA样品在反应室中随机和独立分布是单分子成功扩增和准确定量D NA拷贝数的关键因素。本文综述了数字PCR的发展历
上海应物所发展出基于酸碱调控的室温PCR新方法
近日,中国科学院上海应用物理研究所与清华大学合作,发展了一种新型的离子介导聚合酶链式反应(Ion-Mediated Polymerase Chain Reaction, IM-PCR),通过精确调控溶液pH值(即质子和氢氧根离子),可以在室温下完成PCR扩增,相关结果发表于《德国应用化学》(An
基于-PCR-的基因分型实验——无放射性的多重分析SSLP
实验材料模板DNA试剂、试剂盒10XPCR扩增缓冲液混合引物Taq DNA 聚合酶轻矿物油Qiaex Gel Extraction Kit (Qiagen)2X 甲酰胺载样缓冲液M13序列泳道内标TBE 缓冲液预杂交液地高辛标记的探针Oligo 清洗缓冲液阻滞液碱性磷酸盐连接的抗地高辛Fab片段检测
数字PCR新应用:基于S1PFGEddPCR技术的质粒介导耐药基...
病原细菌产生耐药性,能够降低细菌感染后的药物治疗效果,并增加细菌感染和传播的风险,是造成食品安全问题和健康威胁的重要因素。细菌耐药性可分为固有耐药(intrinsic resistance)和获得性耐药(acquired resistance)两种。在获得性耐药中,携带耐药基因的质粒可导至耐
基于Naica-数字PCR平台三色检测Her2基因拷贝数变异
人表皮生长因子受体2(Human Epidermal Growth Factor Receptor 2,HER2)检测是预测HER2靶向疗法(如曲妥珠单抗)潜在效果的生物标志。为了提高HER2检测有效性和临床实用性,美国临床肿瘤学会(American Society of Clinical On
基于Naica-数字PCR平台三色检测Her2基因拷贝数变异
人表皮生长因子受体2(Human Epidermal Growth Factor Receptor 2,HER2)检测是预测HER2靶向疗法(如曲妥珠单抗)潜在效果的生物标志。为了提高HER2检测有效性和临床实用性,美国临床肿瘤学会(American Society of Clinical On
基于微流控的多重荧光数字PCR可用于乳腺癌的靶向治疗
数字PCR是一种用于基因检测的绝对定量方法,具有前所未有的准确度和精确度,正成为撬动精准医学发展的新支点。它是继实时定量PCR技术之后的第三代PCR基因检测技术,在液体活检、肿瘤伴随诊断、无创产前筛查、病原体载量监测等方面具有重要应用前景。遗憾的是,目前在数字PCR市场,主流产品还是被欧美跨国公司的
基于PCR的基因分型实验—用银染的方法无放射性的分析SSLP
实验材料PCR 扩增 SSLP 的变性聚丙烯酰胺凝胶试剂、试剂盒乙醇硝酸硝酸银染色溶液显色液乙酸仪器、耗材Whatman 滤纸染色仪器80℃真空电炉实验步骤1.电泳后,小心的打开仪器,分开玻璃板。将有胶的那块板子放于染色一起的底部,仔细地将上面的架子和垫圈放置于胶边缘的上面,拧紧闩子。胶里如果有小空
基于数字PCR的甲状腺乳头状癌BRAF-V600E突变检测新方法
近日,华山医院关明教授团队在《Clinica Chimica Acta》杂志发表题为”Detection of BRAF V600E mutation in fine-needle aspiration fluid of papillary thyroid carcinoma by drop