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核酸序列扩增法的技术特点

中文名称核酸序列扩增法英文名称nucleic acid sequence-based amplification;NASBA定 义一种在等温系统中扩增核酸的方法。即利用T7RNA聚合酶仅在结合核酸上相应位点时才能起作用的特点,将结合位点序列与靶序列相连,然后产生靶分子的RNA拷贝,形成反转录和RNA转录的连续循环,从而使靶序列扩增。应用学科免疫学(一级学科),应用免疫(二级学科),免疫学检测和诊断(三级学科)......阅读全文

核酸序列扩增法的技术特点

中文名称核酸序列扩增法英文名称nucleic acid sequence-based amplification;NASBA定  义一种在等温系统中扩增核酸的方法。即利用T7RNA聚合酶仅在结合核酸上相应位点时才能起作用的特点,将结合位点序列与靶序列相连,然后产生靶分子的RNA拷贝,形成反转录和RN

核酸序列扩增法的定义

中文名称核酸序列扩增法英文名称nucleic acid sequence-based amplification;NASBA定  义一种在等温系统中扩增核酸的方法。即利用T7RNA聚合酶仅在结合核酸上相应位点时才能起作用的特点,将结合位点序列与靶序列相连,然后产生靶分子的RNA拷贝,形成反转录和RN

依赖核酸序列的扩增技术叙述

  国内外的研究结果均表明,草莓组织中富含多糖等物质,分离优质核酸较困难,核酸巾的杂质影响taq DNA聚合酶的活性,从而影响PCR技术在草莓病毒检测中的应用。为了提高利用PCR技术草莓病毒检测的稳定性,国内外的学者在草莓核酸提取方法做了较多的研究,利用OIAGEN公司生产的植物RNA提取试剂盒(P

依赖核酸序列的扩增技术检测

  1 核酸提取  NASBA 方法的核酸提取可按照常规的RNA提取方法进行,根据实际需要可以采取不同的方法。  2 核酸扩增  将纯化的RNA 加到标准的NASBA 反应体系中后,先在65 ℃条件下作用5 min 去除RNA 的二级结构,然后在恒温的42 ℃条件下开始扩增反应。  3 产物的检测 

依赖核酸序列的扩增技术简述

  该技术的检测反应有赖于AMV逆转录酶、噬菌体T7RNA多聚酶、核糖核酸酶H、两种特别设计的特异性寡核苷酸引物和分子信标探针共同协作而完成。  NASBA全称是nucleic acid sequence-based amplification,即依赖核酸序列的扩增技术。 依赖核酸序列的扩增技术,是

依赖核酸序列的扩增技术相关

  NASBA的简要过程如下:1.RNA模板链进入反应混合物后,第一个引物首先与模板链的3'端结束。2. 反转录酶,合成反义的补偿的DNA链。3. RNA 酶H(一种核糖核酸内切酶,能够特异性地水解杂交到DNA链上的RNA磷酸二酯键,分解RNA/DNA杂交体系中的RNA链,但不能消化单链或双

核酸序列的扩增技术优势

  相对于免疫学方法或其他基因检测法,NASBA在试验的快速、敏感性、特异性方面有更多的优势。  特异性强:NASBA是一种快速、等温的RNA扩增技术,通过AMV逆转录酶和T7 RNA聚合酶进行的扩增反应,因为反应条件温和以及比PCR短的反应时间,因此转录更加忠实于模板,错配率很低,因而特异性更强。

依赖核酸序列的扩增技术解析

1.概述:依赖核酸序列的扩增(Nucleic acid sequence-basedamplification,NASBA),又称自主序列复制系统(self-sustainedsequence replication,3SR)或再生长序列复制技术。1990年Guatelli等首先报道了这一技术.NA

核酸序列扩增法的定义和原理

中文名称核酸序列扩增法英文名称nucleic acid sequence-based amplification;NASBA定  义一种在等温系统中扩增核酸的方法。即利用T7RNA聚合酶仅在结合核酸上相应位点时才能起作用的特点,将结合位点序列与靶序列相连,然后产生靶分子的RNA拷贝,形成反转录和RN

依赖核酸序列的扩增技术的定义和原理

1.概述:依赖核酸序列的扩增(Nucleic acid sequence-based amplification,NASBA),又称自主序列复制系统(self- sustainedsequence replication,3SR)或再生长序列复制技术。1990年Guatelli等首先报道了这一技术.

依赖核酸序列的扩增的基本方法

基本方法为:将引物,标本加入扩增反应液,65℃1min使RNA分子二级结构打开,降温至37℃加入逆转录酶,T7rna聚合酶和RNaseH,并在37℃反应1——1.5小时,其产物经琼脂 糖电泳,溴乙锭染色即可在紫外仪下看到条带.NASBA的特点为操作简便,不需特殊仪器,不需温度循环.整个反应过程由三种

核酸扩增—环介导的等温扩增法

  2000年日本学者Notomi在Nucleic Acids Research(核酸研究)杂志上公开了一种新的适用于基因诊断的恒温核酸扩增技术,即环介导等温扩增技术,英文名称为“Loop-mediated isothermal amplification",受到了世卫组织、各国学者和相关政府部门的

恒温核酸扩增技术的扩增速度

  由于恒温核酸扩增只需要在一个温度下进行,相比较于PCR不同温度之间的循环,恒温扩增不需要反复的升温降温过程,有些恒温扩增的速度是快于PCR的扩增速度的。例如:环介导恒温核酸扩增(LAMP),重组聚合酶扩增法(RPA)以及切刻内切酶恒温扩增(NEAR)。目前英国公司optigene已经成功的改造了

核酸扩增—转录介导的扩增技术(TMA)

  TMA是一种利用RNA聚合酶和逆转录酶在约42℃等温条件下来扩增RNA或DNA的技术,其原理是带有T7 RNA聚合酶识别的启动子序列的启动子引物与模板退火经反转录形成RNA-DNA杂交分子,被反转录酶的RNase H活性水解形成单链RNA,然后与引物2退火,通过反转录合成双链DNA,在T7 RN

核酸扩增—链置换扩增技术(SDA)

  SDA是一种基于酶促反应的DNA体外等温扩增技术,采用标记的两种不同荧光基团的探针。在SDA过程中,该探针被掺入到双链扩增产物中,由限制内切酶的酶切使淬灭基团与荧光基团分开,从而释放荧光,用荧光偏振检测法定量检测。SDA较之PCR有更高的扩增效率,耗时仅30min。其基本系统包括一种限制性核酸内

恒温核酸扩增技术通量

  在实际的产业化中,分子诊断仪器的通量往往至关重要。对于qPCR而言,由于引物设计的成熟和荧光通道的多样性,往往可以比较好的实现高通量检测。由于恒温核酸扩增技术引物设计较为困难,单一的反应温度会造成引物和模板,引物与引物之间的非特异性链接和扩增,使得恒温扩增的检测通量受到限制。但同时也得益于反应温

恒温核酸扩增技术概述

  恒温核酸扩增技术是利用各种酶,引物,脱氧核苷三磷酸(dNTP),模板DNA以及缓冲液的混合物在同一温度下温浴一定时间,让不同的酶与DNA进行反应,从而达到特定DNA片段的扩增。与传统的PCR核酸扩增相比,恒温核酸扩增不需要在不同温度之间的转换,只要保持酶反应的最佳温度,37℃、42℃、56℃或6

核酸等温扩增技术及其应用

据微生物学家的估计,采用培养技术,仅有约1%的细菌可以培养。在过去的一个世纪里,以聚合酶链反应(PCR)为代表的基于核酸的检测技术发展迅速,为其他病原体的精确检测诊断提供了可能。毋庸置疑,Kary Mtlllis发明的PCR技术是20世纪80年代分子生物学领域的一项革命性突破。也许他本人当时也没有想

EMA -常温核酸扩增技术介绍

基于分子仿生学的原理,把生物体内(如大肠杆菌,酵母或人体等)多酶介导的核酸复制机理在体外再现,使痕量的核酸靶标在普通生物耐受的条件下(常温下)进行快速的扩增,同时利用特异性荧光探针结合扩增产物,通过荧光检测仪实时监测荧光信号,实现核酸靶标的快速扩增和检测。 常温核酸扩增技(简称EMA技术),是由点晶

基因扩增技术的技术特点

特异性高首次报导的PCR所用的DNA聚合酶是大肠杆菌的DNAPolymerase I的Klenow大片段,其酶活性在90℃会变性失活,需每次PCR循环都要重新加入Klenow大片段,同时引物是在37℃延伸(聚合)易产生模板—引物之间的碱基错配、致特异性较差,1988年Saiki等从温泉水中分离到的水

核酸序列分析

【实验目的】1、 掌握已知或未知序列接受号的核酸序列检索的基本步骤;2、 掌握使用BioEdit软件进行核酸序列的基本分析;3、 熟悉基于核酸序列比对分析的真核基因结构分析(内含子/外显子分析);4、 了解基因的电子表达谱分析。【实验原理】针对核酸序列的分析就是在核酸序列中寻找基因,找出基因的位置和

恒温核酸扩增技术的特异性

  由于恒温核酸扩增的整个反应是没有温度的变化,模板DNA双链的打开,引物与互补片段的链接以及新片段的合成都是在同一温度下进行的。这就造成某些情况下的反应体系里引物之间形成非特异性互补,扩增,最后造成假阳性的结果。与PCR相比,恒温核酸扩增更易出现假阳性的结果。

志贺菌属核酸扩增法的检测介绍

  核酸扩增技术,即聚合酶链式反应(polymerase chainreaction,PCR),其基本原理是设计、合成两条寡核苷酸,作为引物,对应于待测病原微生物某一段特异性序列的两端,然后在体外模拟DNA体内复制的过程反复扩增,使靶序列放大上万倍甚至上百万倍而被检测出来。

恒温核酸扩增技术与传统PCR对比

  和传统的PCR技术相比,恒温核酸扩增不仅仅是缩短了核酸扩增的时间,更重要的是核酸扩增摆脱了对硬件的束缚。PCR技术原理是利用94℃高温使DNA双链解开,并在耐高温的DNA聚合酶的作用下扩增DNA片段。PCR反应至少需要2个不同的温度使DNA片段得到特异性的扩增。恒温核酸扩增是利用各种酶与DNA之

标准核酸序列的分类

  标准核酸序列可分为植物来源、动物来源、微生物来源及重组生物制品的鉴别或鉴定用标准核酸序列等。  1.植物来源  植物来源的标准核酸序列系指用种属来源明确的植物样本按DNA测序技术指导原则测定得到的标准序列,可用于植物来源的物种如中药材、中药饮片或提取物等的原植物鉴别或鉴定。  2.动物来源  动

核酸序列的检索实验

实验方法原理掌握核酸序列检索的操作方法;熟悉GenBank数据库序列格式及其主要字段的含义;了解EMBL数据库序列格式及其主要字段的含义;熟悉GenBank数据库序列格式的FASTA序列格式显示与保存;实验材料电脑仪器、耗材笔记本笔实验步骤1.  使用Entrez信息查询系统检索核酸序列BC0608

扩增敏感仪的技术特点

中文名称扩增敏感仪英文名称amplisensor定  义一种实时定量分析仪。即根据荧光能量转移理论,检测互补核苷酸间双螺旋形成,可用于以PCR为基础的检测。应用学科免疫学(一级学科),应用免疫(二级学科),免疫学检测和诊断(三级学科)

核酸序列分析实验

实验方法原理针对核酸序列的分析就是在核酸序列中寻找基因,找出基因的位置和功能位点的位置,以及标记已知的序列模式等过程。在此过程中,确认一段 DNA 序列是一个基因需要有多个证据的支持。一般而言,在重复片段频繁出现的区域里,基因编码区和调控区不太可能出现;如果某段 DNA 片段的假想产物与某个已知的蛋

恒温核酸扩增技术对引物的高要求

  自80年代PCR技术发明以来,PCR引物的设计已经相当成熟,市场上有很多关于PCR引物设计的软件可供使用。所以设计一对好的PCR的引物并不困难。恒温核酸扩增刚好相反。一对或者几对好的引物对任何一种恒温核酸扩增技术都是相当关键的,可是由于恒温核酸扩增技术各不相同,引物设计方法很难相互借鉴。目前虽然

PCR技术(十七):用PCR扩增cDNA库中的特异序列

最常用的基因分离方法需要建立组织或细胞RNA的cDNA库,然后用抗体或 DNA探针筛选出感兴趣的基因。虽然这个方法已成功地克隆了大量基因,但建立和筛 选CDNA库是一项非常耗时.费力的工作,而且用寡聚核苷酸作探针进行筛选需大量蛋 白质序列结构的资料。聚合酶链的反应(PCR)方法可使一种特异DNA扩增