北京生科院最新研究进展
4月12日，中国科学院北京生命科学研究院赵方庆团队在《自然-实验手册》（Nature Protocols）上，发表了题为Full-length circular RNA profiling by nanopore sequencing with CIRI-long的研究论文，建立了环形RNA全长转录本解析和高效挖掘的技术体系。 近年的研究表明，环形RNA在真核生物体内具有广泛的生物学功能。环形RNA序列与线性RNA相似度高，因此如何高效鉴定环形RNA特有的外显子结构，是环形RNA研究中的重要问题。针对这一问题，赵方庆团队前期提出了CIRI-AS算法（基于BSJ读段对比结果对环形RNA内部可变剪接结构进行识别）。后续研究开发了CIRI-full算法（通过识别双端250bp测序数据中反向重叠区特征，对500bp以内的环形RNA进行全长重构）。由于上述方法主要基于短读长测序技术，难以对长度500bp以上的环形RNA的全长......阅读全文
降落PCR（Touchdown－PCR）的原理？
Touchdown PCR是指每隔一个循环降低1°C反应退火温度，直至达到“Touchdown”退火温度，然后以此退火温度进行10个左右的循环。该方法最初出现是为了避开确定最佳退火温度而进行的复杂的反应优化过程。正确和非正确退火温度之间的任何差异将造成每个循环PCR产物量的两倍差异（每摄氏度造成
实时荧光定量PCR（realtime－PCR）
实验步骤一、 样品RNA的抽提 1. 取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其完全溶解。2. 两相分离 每1 ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2 ml的氯仿，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12 000 rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的
PCR技术－PCR技术的应用
一滴残留在裙子上的精液使得美国总统Bill Clinton不得不坦承他与白宫实习生有不正当的关系。因为他知道现在的生物科技就连一个精子也能被用来做为证据。这种将极微量的生物标本化为可供鉴定的现代技术正是PCR(Polymerase chain reaction)--聚合酶链式反应具有的特色之一。这也
实时荧光定量PCR（realtime－PCR）
实验材料 细胞样品试剂、试剂盒 RNA提取试剂盒荧光定量PCR MixTRIZOLdNTP氯仿逆转录酶MMLV异丙醇Taq酶DEPC水ddH2OTEMgCl2琼脂糖溴化乙锭MOPS甲醛乙酸钠EDTAEB溴酚兰仪器、耗材 离心管离心机风光光度计电泳槽凝胶板Realtime PCR仪实验步骤 一、 样品
什么是反向PCR（inverse－PCR）
反向PCR（inverse PCR）反向PCR是一种多聚合酶链式反应（PCR）应用的方法，可使已知序列的核心区边侧的未知 DNA成几何级数扩增。用适当的限制性内切裂解含核心区的DNA，以产生适合于PCR扩增大小的片段，然后片段的末端再连接形成环状分子。PCR的引物同 源于环上核心区的末端序列，但其方
PCR技术（一）：PCR技术概论
PCR技术概论PCR技术简史PCR技术的基本原理PCR反应体系与反应条件PCR反应特点PCR扩增产物的分析 聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction ,PCR)是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。 它具有特异、敏感、产率高、 快速、 简便、重复性好、易自动化等突出
PCR技术（十六）：PCR产物测序
PCR技术代替了为测序而反复进行的分子克隆和模板制备步骤。PCR技术与自动测 序技术相结合后，它将成为一种最快、最有效的测定核苷权序列的方法。本章主要综 述各种测模板的制备以及如何完成PCR产物的直接测序。与传统的将PCR片段克隆入质 粒或病毒基因组相比，直接序列分析有两个主要的优点:1)由于它是一
降落PCR（Touchdown－PCR）的原理
Touchdown PCR是指每隔一个循环降低1°C反应退火温度，直至达到“Touchdown”退火温度，然后以此退火温度进行10个左右的循环。该方法最初出现是为了避开确定最佳退火温度而进行的复杂的反应优化过程。正确和非正确退火温度之间的任何差异将造成每个循环PCR产物量的两倍差异（每摄氏度造成4倍
免疫PCR技术（ImmunoPCR）
免疫PCR技术（Immuno-PCR） 免疫PCR方法（Immuno-PCR）是Takeshi等1992年将免疫学反应和PCR技术相结合而创建的一种新的检测技术，具有抗原、抗体反应的特异性和PCR技术的高效性。它运用PCR的高度敏感性来放大抗原抗体反应的特异性，使实验中只需数百个抗原分子即可检测，甚
什么是反向PCR（inverse－PCR）
反向PCR（inverse PCR）反向PCR是一种多聚合酶链式反应（PCR）应用的方法，可使已知序列的核心区边侧的未知 DNA成几何级数扩增。用适当的限制性内切裂解含核心区的DNA，以产生适合于PCR扩增大小的片段，然后片段的末端再连接形成环状分子。PCR的引物同 源于环上核心区的末端序列，但其方
原位PCR与PCR的区别
PCR是提取细胞或组织中的DNA进行基因扩增反应，而原位PCR是保持细胞或组织的完整性，使PCR反应体系渗透到组织和细胞中，在细胞的靶DNA所在的位置上进行基因扩增，不但可以检测到靶DNA，而且还可以了解靶DNA存在于何种细胞中，更有利于探讨靶DNA与细胞之间的关系。 PCR所采用的反应体系能
陈玲玲，杨力受邀Cell子刊发表综述：核重复序列
2月10日，上海生化细胞所陈玲玲研究员与上海生科院（健康院）计算生物学所杨力研究员受邀在《Trends Cell Biol》发表了题为“ALUternative Regulation for Gene Expression.”的综述论文，系统总结了灵长类（包括人）基因组中特异的Alu短散在核重复
一文知晓PCR，定量PCR，数字PCR方法选择
从1985年至今的30多年时间里，PCR分析经历了三代技术的发展。diyi代传统PCR技术，采用琼脂糖凝胶电泳的方法对PCR产物进行定性分析。第二代荧光定量PCR技术，通过在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号的积累实时监控PCR进程，最后用Cq值对基因进行定量分析。第三代数字PCR技术，通过
普通PCR仪/梯度PCR仪/实时荧光定量PCR仪/原位PCR仪应用对比
PCR：聚合酶链式反应。是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术，它可看作是生物体外的特殊DNA复制，PCR的最大特点，是能将微量的DNA大幅增加。 PCR原理示意图： 1589863475231958.jpg PCR仪的种类有：常规的普通PCR仪，梯度P
普通PCR仪/梯度PCR仪/实时荧光定量PCR仪/原位PCR仪应用对比
PCR：聚合酶链式反应。是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术，它可看作是生物体外的特殊DNA复制，PCR的最大特点，是能将微量的DNA大幅增加。PCR原理示意图：PCR仪的种类有：常规的普通PCR仪，梯度PCR仪，原位PCR仪，实时荧光定量PCR仪四类！1、普通PCR仪一般把一次PCR
诺如病毒GI型、GII型RNA核酸检测试剂盒（带IAC，PCR双色...
诺如病毒GI型、GII型RNA核酸检测试剂盒（带IAC，PCR-双色荧光法）使用说明诺如病毒GI型、GII型RNA核酸检测试剂盒（带IAC，PCR-双色荧光法）◆ 产品说明诺如病毒GI型、GII型RNA核酸检测试剂盒（PCR-双色荧光法）参照GB 4789.42-2016《食品安全国家标准 食品
RNA干涉实验
RNA 干涉（RNA1） 是指在真核细胞中引入双链 RNA ( doubt-stranded RNA，dsRNA ) 分子从而导致具有序列同源性的基因产生特异件基内沉默（gene silencing ) 的现象。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编：郑晓飞。实验方法原理当确定了靶基因上的 siRN
小分子RNA
RNA一度被认为仅仅是DNA和蛋白质之间的“过渡”，但越来越多的证据清楚的表明，RNA在生命的进程中扮演的角色远比我们早前设想的更为重要。RNA 干扰（RNA interference）的发现使得人们对RNA调控基因表达的功能有了全新的认识，更因为可以简化/替代基因敲除而成为研究基因功能的有力工具，
RNA加工修饰
中文名RNA加工修饰所属领域生物学定义RNA加工修饰，主要加工方式是切断和碱基修饰，真核生物tRNA前体一般无生物学特性，需要进行加工修饰。
Poly(A)+RNA－Isolation
Eukaryotic messenger RNA (mRNA) can be separated from the other RNA species in a total RNA preparation by affinity chromatography by virtue of the
RNA提取原理
RNA抽取一般使用Trizol法抽提:Trizol是一种总RNA抽提试剂，内含异硫氰酸胍等物质，能迅速裂解细胞，抑制细胞释放出的核酸酶活性。目前常用Trizol法进行提取组织或细胞中的RNA。Trizol作用原理:在匀质化或溶解样品中，Trizol试剂可保持RNA的完整性，同时能破坏细胞及溶解细胞成
RNA－反转录
实验材料 poly(A)+RNA反转录酶鼠源反转酶 或禽源反转录酶试剂、试剂盒 oligo(dT)12-18 lmol LTris-Cl 1mol LTris-Cl lmol LKC1 25 mmol LMgCl2 dNTP 混合物 0.lmol LDTT RNasin实验步骤 一材料与设备1)p
RNA－isolation－for－Microarray
Description RNA extraction using TRI REAGENT. This method gives ample amout of RNA.Procedure It is 3 days procedure.Day 1:1. Harvest the cells and cen
纯化RNA实验
从培养的细胞中纯化总RNA 从组织中纯化总RNA 实验材料 细胞
RNA提取原理
RNA抽取一般使用Trizol法抽提:Trizol是一种总RNA抽提试剂，内含异硫氰酸胍等物质，能迅速裂解细胞，抑制细胞释放出的核酸酶活性。目前常用Trizol法进行提取组织或细胞中的RNA。Trizol作用原理:在匀质化或溶解样品中，Trizol试剂可保持RNA的完整性，同时能破坏细胞及溶解细胞成
RNA的提取
一、准备试剂：氯仿，异丙醇，75℅乙醇，无RNase的水或0.5℅SDS（溶液均需用DEPC处理过的水配制）。二、操作步骤：1. 匀浆处理：a. 组织 将组织在液氮中磨碎，每50-100mg组织加入1ml TRIzol，用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。b. 单层培养细胞
RNA干涉实验
实验方法原理 当确定了靶基因上的 siRNA 分子作用位点以后，根据靶位点的序列可以很方便地推导得到相应的 siRNA 分子的正义与反义 RNA 链序列。它们包含 19 bp 的互补双链区和两侧的不配对区（每侧为 2 个 U 成 2 个 T )，在合成时用 T 替代 U 可以降低成本并可以提
RNA点杂交
1） 纯化的RNA的点杂交和狭线杂交安装印迹装置1．切一张合适大小的带正电荷尼龙膜。用铅笔标上表示方向的记号。用水把膜简单弄湿，在20×SSC中室温泡1 h。2．在膜浸泡期间，先用0.1 mol/L NaOH小心清洗印迹装置，再用无菌水洗干净。3．把两片厚滤纸用20×SSC浸湿，再放到真空器顶部。4
RNA－gel－electrophoresis
实验概要RNA gel electrophoresis主要试剂DEPC H2ODEPC 0.1% (v/v)q.s. de-ioinized H2O37ºC x1 hr, or r.t. overnightAutoclave.(NaOAc, EDTA and ethidium bromide sol
RNA－Isolation－Protocol
Stabilize RNAStart with 15 ml E. coli Culture containing 7.5* 109 cells (OD600= 0.2 Dilute cells or scale up)Pipet 30 ml of RNAProtect Bacteria Reagen