黄荷凤院士：最好的预防从生命源头开始
DNA究竟携带着什么？DNA序列信息如何解释复杂的生命活动现象？5月26日，复旦大学庆祝建校118周年相辉校庆系列学术报告会上，中国科学院院士、复旦大学生殖与发育研究院院长黄荷凤从理论到实验，再到临床诊断，阐述了表观遗传在糖尿病早期预防中的重要作用。黄荷凤。复旦大学供图中国糖尿病患者居全球第一，庞大的人口基数让糖尿病防控压力剧增。寻求防控思路的转变，找到突破口，迫在眉睫。对此，黄荷凤团队聚焦发育起源糖尿病，从发育角度探索糖尿病发生的机制和早期防控策略。当一位女性怀孕前就是一个糖尿病病人，这个卵母细胞会不会将糖尿病的易感性传递后代？对此，黄荷凤团队和徐国良院士团队一起展开攻关。团队以孕前糖尿病为例，建立糖尿病小鼠体外受精-胚胎移植模型。最后发现，高糖卵子来源的子代成年后出现糖耐量受损，“高脂饮食”会加快子代糖耐量受损的发生。可见，卵母细胞直接将糖尿病的易感性传递到子一代。而子一代糖耐受量的受损，则是由于胰岛素分泌障碍。高糖来源卵母......阅读全文
中科院生态中心DNA损伤修复研究取得进展
日前，中国科学院生态环境研究中心环境化学与生态毒理学国家重点实验室汪海林研究组在DNA损伤修复方面取得重要进展，相关研究成果近日在线发表于《细胞发现》杂志。 具有活性的RecA/Rad51核蛋白丝的结构及其介导的链交换过程，一直以来是DNA修复研究的热点和难点。 汪海林研究组设想，在生理条件下
中科院Cell Res揭示DNA修复新机制
来自中科院北京基因组研究所、清华大学的研究人员证实，Ago2通过同源重组促进了Rad51招募以及DNA双链断裂修复。这一研究发现发表在3月25日的《细胞研究》(Cell Research)杂志上。 中科院北京基因组研究所的杨运桂 (Yun-Gui Yang)研究员和清华大学的戚益军(Y
中科院再发文，中性粒细胞识别DNA分子机制
中性粒细胞是天然免疫反应的第一道防线，当感染或炎症反应发生时，中性粒细胞总是第一时间出现在病发区域。目前已知的触发天然免疫反应的感受元件以TLR为代表，它们可以识别来自病原微生物的特异性分子，从而引发下游的信号传递过程。在DNA识别的研究领域，已经有研究发现TLR9可以识别CpG甲基化的DNA序
智能抗癌？中科院团队发明世界首个DNA纳米机器人
近期的《自然·生物技术》上，中科院国家纳米科学中心和亚利桑那州立大学（ASU）华人科学家团队的成果让人眼前一亮：科学家们用DNA折纸技术制造出了世界上第一种智能抗癌的纳米机器人，它们可以在人体内自行找到给肿瘤供血的血管，随后释放药物制造血栓阻塞血管，从而“饿死”肿瘤，在动物实验中体现了良好的疗效
中科院学者最新Nature改写教科书对DNA甲基化酶的分类
雌性哺乳动物的一生中只能提供有限数目的卵子。卵子的DNA甲基化水平很低，只有精子和绝大部分终末分化的体细胞的DNA甲基化水平的一半左右。然而，卵子的这种独特的DNA甲基化状态是怎样形成的，受哪些因子调控，又有着怎样的生物学意义却并不清楚。 中科院生物物理研究所的研究人员发表了题为“Stell
DNA重组（DNA recombination）技术：DNA序列测定-3
2．利用末端转移酶和α-32P-ddNTP标记DNA的3ˊ-末端 在二价阳离子存在下，末端转移酶催化dNTP加入DNA分子的3ˊ-羟基末端，如果作为底物的核苷酸经过修饰（如ddNTP），则可以在DNA的3ˊ-OH上仅加入一个核苷酸。对于双链DNA片段，亦存在DNA的两侧均被标记问题，可通过上述同
DNA重组（DNA recombination）技术：DNA序列测定-2
目前应用的两种快速序列测定技术是Sanger等（1977）提出的酶法（双脱氧链终止法）和Maxam（1977）提出的化学降解法。虽然其原理大相径庭，但这两种方法都同样生成相互独立的若干组带放射性标记的寡核苷酸，每组核苷酸都有共同的起点，却随机终止于一种（或多种）特定的残基，形成一系列以某一特定核苷酸
DNA重组（DNA recombination）技术：DNA序列测定-1
㈣ DNA聚合酶 如前所述，选用合适的DNA聚合酶进行测序反应也是保证测序质量的重要因素之一。常用于双脱氧末端终止法测序的有几种不同的酶： 1．大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ大片段（Klenow片段） 此酶是最早用于建立Sanger测序的酶。但通常会有两个问题：①Klenow片段的持续合成能力较
DNA重组技术(DNA Recombination)
一、DNA 的酶切与连接（1）酶切反应：同质粒DNA 的鉴定，只不过是质粒DNA 换为载体DNA 。若大量酶切，则成比例增加。（2）加2倍体积的预冷无水乙醇和1/10体积的3mol/l NaAc混匀，-20℃2h以上。（3）15000rpm离心15min，弃上清。（4）加入75%乙醇洗涤2次，离心弃
DNA重组（DNA recombination）技术：DNA重组与鉴定-3
当多克隆位点有外源DNA片段插入时，破坏此酶的N端阅读框架，产生无α互补功能的N端片段，因此在带有外源DNA片段的细菌在含有IPTG/X-gal的培养基上呈白色，见图7-11 。如果外源DNA插入片段相当短，不破坏β-半乳糖苷酶的氨基端氨基酸序列的阅读框，有时产生的重组体菌落不呈白色而是呈浅蓝色。4
DNA重组（DNA recombination）技术：DNA重组与鉴定-1
重组DNA是在体外用限制性内切酶，将不同来源的DNA分子进行特异地切割，获得的目的基因或DNA片段与载体重新连接，从而组成一个新的DNA杂合分子。重组的DNA分子能够通过一定的方式进入相应的宿主细胞，在宿主细胞中进行无性增殖，获得大量的目的基因或DNA片段，此过程称基因克隆。重组的DNA分子也能够在
DNA重组（DNA recombination）技术：DNA重组的载体-2
二、噬菌体载体作为细菌寄生物的噬菌体，大多数具有编码多种蛋白质的基因，能利用宿主细胞的蛋白质合成体系，进行生长和增殖。构建的噬菌体载体，以λ噬菌体、M13和粘粒最为常用。㈠ λ噬菌体载体野生型λDNA是一种基因组为4.8 kb的线性双链DNA，全部序列已知，共编码50多个基因。其中约一半基因参与
DNA重组（DNA recombination）技术：DNA重组的载体-1
载体（vector）是携带靶DNA（目的DNA）片段进入宿主细胞进行扩增和表达的运载工具。常用的载体是通过改造天然的细菌质粒、噬菌体和病毒等构建而成。目前已构建成的载体主要有质粒载体、噬菌体载体、病毒载体和人工染色体等多种类型，亦可根据其用途不同分为克隆载体和表达载体二类。载体的构建和选择应考虑以下
DNA重组（DNA recombination）技术：DNA重组与鉴定-2
（1）CaCl2处理以后的转化: 当细菌处于0℃、二价阳离子（如Ca2+、Mg2+等）低渗溶液中时，细菌细胞膨胀成球形，处于感受态；此时转化混合物中的DNA形成抗DNA酶的羟基-钙磷酸复合物粘附于细胞表面，重组DNA在42℃短时间热冲击后吸附在细胞表面，在丰富培养基中生长数小时后，球状细胞恢复原
DNA重组（DNA recombination）技术：DNA重组的载体-3
在作为载体时，这些噬菌体有一个很大的优点，即克隆到M13mp载体的外源DNA片段（双链），在子代噬菌体便成为了单链形式。故应用M13mp进行克隆，可方便地分离到大量含有外源DNA某一单链的DNA分子。这种单链DNA可在下列工作中作模板：①主要用作双脱氧链终止法进行DNA序列测定的模板；②制备仅有一条
DNA合成（DNA synthesis ）技术介绍
蛋白质概念提出：DNA多肽合成（DNA synthesis ）：按照预定核苷酸的顺序，将脱氧核苷酸逐个进行人工连接合成DNA链的方法。目前多是采用固相合成法，即是在多聚体支持物上从3′端延伸核苷酸，可自动化操作。)目前，oligo DNA合成一般都采用固相亚磷酰胺三酯法合成DNA片段，此方法具有高效
DNA 指纹的概念高变区DNA与DNA指纹
人的卫星DNA 或称随体DNA 是由一些短的DNA 片段（10bp 左右）多次重复所构成的。重复片段的组成和拷贝数在不同的个体及基因组的不同位置上不一样。提取不同个体的基因组DNA 后，用其切点能识别序列为4 个碱基而又不切割该重复片段的限制性内切酶在重复片段的两侧切割基因组DNA ，然后将样品进行
DNA Fingerprinting, DNA Barcoding, and Next Generation Sequencing ...
DNA fingerprinting of plants has become an invaluable tool in forensic, scientific, and industrial laboratories all over the world. PCR has becom
DNA Immunoprecipitation for the Determination of DNA-Binding Specificity
Andrea J. Gossett and Jason D. Lieb1 Department of Biology, University of North Carolina at Chapel Hill, Chapel Hill, NC 27599, USA 1Correspond
“垃圾DNA”或是编码DNA的“卫士”
“垃圾DNA”的概念是在上世纪70年代提出来的，用来形容那些基因组中不是编码蛋白质的DNA序列，而在学术上被称为非编码DNA序列。 由于当时的科学家普遍认为有生物学意义的蛋白质才是决定生物性状的关键，而且也没有一种好的理论和技术手段来解释这些“垃圾”存在的原因，于是“垃圾DNA”这一观念便形
“垃圾DNA”或是编码DNA的“保镖”
"垃圾DNA"的概念源自上世纪70年代，用来形容基因组中不是编码蛋白质的DNA序列，在学术上被称为非编码DNA序列。 非编码DNA"开关说"究竟是个啥？ 科学家们发现，人类基因组中包含多达400万个基因开关和功能调节因子，它们的载体便是"垃圾DNA"。这强烈地冲击了"DNA序列=生物性
DNA连接酶(DNA ligase)介绍
DNA连接酶是1967年在三个实验室同时发现的。它是一种封闭DNA链上缺口酶，借助ATP或NAD水解提供的能量催化DNA链的5'-PO4与另一DNA链的3'-OH生成磷酸二酯键。但这两条链必须是与同一条互补链配对结合的(T4DNA连接酶除外)，而且必须是两条紧邻DNA链才能被DNA
DNA提取方法--洗涤 DNA（或 RNA）
当裂解物通过硅胶膜进行离心分离,现在所提取的 DNA 或 RNA 应该与柱子结合,杂质、细胞蛋白和多糖应该已经通过了。 但是,膜仍然被残留的细胞蛋白质和盐弄脏。如果样品来自植物,仍然会有多糖,也许一些色素留在膜上,或者如果样品是血液,膜可能会被染成棕色或黄色。洗涤步骤用于去除这些杂质。通常有两次洗涤
DNA重组（DNA recombination）技术：工具酶
一、限制性内切酶限制性内切酶（restriction endonucleases，RE）是其中最重要的工具酶之一。它是一类核酸水解酶，能识别和切割双链DNA分子中的特定核苷酸序列。（一）命名原则限制性内切酶大多从细菌中发现，根据来源进行命名，限制酶的第一个字母（大写，斜体）为宿主菌的属名，第二、第三
DNA提取方法--DNA 提取后纯化：将 DNA 与色谱柱结合
离液盐对于裂解至关重要,而且对于将 DNA(或 RNA)与色谱柱结合也是如此。此外,为了增强和影响核酸与二氧化硅的结合,还添加了酒精。大多数情况下这是乙醇,但有时可能是异丙醇。乙醇百分比和体积有很大的影响。太多,你会带入大量降解的核酸和小物种,这会影响 A260 读数并降低你的一些产量。太少,可能难
Phage DNA
IntroductionThe phage lysate from the plate contains bacterial DNA and RNA, as well as phage DNA encased in the phage coat. The following procedure, d
DNA Laddering
I. Protocol1. Harvest cellsOptional: wash plate with 37°C PBS (gently, so as not to lose cells); check on microscope,after aspirate PBS or mediaPlace
electrophoresis of DNA
Agarose Gel Electroporesis of DNA Making the gel: 1. Place casting platform with well former sideways in gel stand where you wish to pour
DNA重组
目的：简单介绍了DNA重组技术的一些方法。包括重组质粒、PCR等。包括细胞结构、DNA，DNA如何改点等。
DNA转染
DNA转染· Transfection of Mammalian Cells Using Lipofectamine (LTI)· Guide to Eukaryotic Transfections with Cationic Lipid Reagents (PDF)