胶原酶和胰酶在细胞原代培养中的区别
酶的浓度 胰蛋白酶一般采用的浓度为 0.1%-0.25%（活力 1:200 或 1:250），但遇到难消化的组织时，浓度可适当提高，消化时间适当延长。浓度高对细胞有毒性，而较低浓度的胰蛋白酶在培养液中可促进细胞的增殖，若培养液中加入血清，其少量胰蛋白酶可被血清中抗胰蛋白酶因子所清除。 温度 一般认为胰蛋白酶在 56℃时活性最强，但由于对细胞有损害而不能被采用，常使用的温度为 37℃，通常在 37℃进行消化比室温作用快。 pH pH8~pH9 是胰蛋白酶活力适宜范围，但随碱性的增加其活力也随之减少，活性强分散快，细胞也容易被消化下来，消化分离细胞时 PH 只能选用 7.6~8.0 之间，否则对细胞有损伤。无机盐离子 若用含有钙和镁的盐类溶液来配制胰蛋白酶时，可以发生抑制胰蛋白的消化作用。因此，在配制时应采用无钙镁离子的 PBS 配制。 消化时间 如果细胞消化时间过长，可以损害细胞的呼吸酶，从而影响细......阅读全文
细胞技术专题：大鼠脑微血管内皮细胞原代培养实验－一
大鼠脑微血管内皮细胞原代培养可以：（1）应用于血脑屏障的研究；（2）脑血管疾病的病理生理及分子生物学研究；（3）新药筛选；（4）脑微血管内皮细胞生理生化及药理学研究。实验方法酶消化法 实验方法原理丁香园站友参考文献采用以大脑皮质为材料、酶消化及梯度离心分离脑微血管段并进行原代培养,，成功地摸索出大鼠
monESCs传代、冻存及复苏
实验概要monESCs传代、冻存及复苏主要试剂DMEM/F12培养液、monESCs培养液、冻存液C、1 mg/mL胶原酶Ⅳ主要设备15 mL离心管，5 mL、10 mL移液管，冻存管、6孔培养板、倒置显微镜实验步骤传代前一天首先准备好MEF饲养层细胞，饲养层细胞要求密度为1.2×104～1.5×1
人滑膜细胞原代培养实验_酶消化法
人滑膜细胞原代培养可应用于：（1）细胞保种；（2）用于相应细胞生理、形态学研究；（3）用于相关疾病研究。实验方法原理将人滑膜从机体中取出，经胰酶、螯合剂（常用EDTA）处理，分散成单细胞，置α-MEM生长培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖。实验材料滑膜组织试剂、试剂盒Ⅰ型胶原酶胎牛血清生理盐水
人滑膜细胞原代培养实验_酶消化法
人滑膜细胞原代培养可应用于：（1）细胞保种；（2）用于相应细胞生理、形态学研究；（3）用于相关疾病研究。实验方法原理将人滑膜从机体中取出，经胰酶、螯合剂（常用EDTA）处理，分散成单细胞，置α-MEM生长培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖。实验材料滑膜组织试剂、试剂盒Ⅰ型胶原酶胎牛血清生理盐水
大鼠乳鼠成骨细胞培养实验
酶消化法 实验方法原理 取材于出生2~3 d 小鼠颅骨，以含20%胎牛血清的DMEM培养液进行培养，采用胶原酶消化法分离成骨细胞，并进行细胞接种与传代。采用胶
成骨细胞的体外培养
成骨细胞的来源主要有骨、骨膜、骨髓及骨外组织。及人的胚胎颅骨或新生动物的颅骨为成骨细胞的常用来源。Robey(1985)采用胶原酶处理松质骨骨块以除去结缔组织和骨髓造血组织，再将处理过的骨块进行培养来获得更纯净的成骨细胞。将人胚胎颅骨中所获得的成纤维样细胞通过加入β-甘油磷酸钠诱导分化后培养3周
细胞组织消化常用的几种酶的选择
直接从生物体获取的组织，一般需要将其消化成单个细胞才能进行体外培养。这种直接从离体组织获得的细胞，更接近于生物体内的生活状态，且生物性状尚未发生很大改变，因此在药物筛选、细胞移植、类器官培养、肿瘤研究等众多领域备受欢迎。但组织消化过程中常遇到多种问题，例如消化不完全、细胞死亡率高等。如何克服这些问题
树突细胞的分离实验（二）
1.将2 管 I m l 的 4000U /m l 胶 原 酶 D 稀 释（足够用于2 0 个脾脏）： Im l 加 入 9m l H B S S(稀 释 至 400U /m l ，步 骤 8 使用）， I m l 加 入 39m l 的 H B S S (稀 释 至 100U /ml)。置
人脐动脉平滑肌细胞培养实验
消化法 贴块法 实验方法原理 运用消化法进行人脐动脉血管平滑肌细胞的培养，并用倒置显微镜进行形态学观察和用免疫组化对培养细胞进行鉴定。
人脐动脉平滑肌细胞培养实验
消化法 贴块法 实验方法原理 运用消化法进行人脐动脉血管平滑肌细胞的培养，并用倒置显微镜进行形态学观察和用免疫组化对培养细胞进行鉴定。
大鼠胰岛细胞培养实验
实验方法原理水合氯醛腹腔麻醉，采用胶原酶ⅴ逆行灌注、原位消化及Ficoll-400梯度离心的方法分离、纯化大鼠胰岛，并分离、培养胰岛单细胞。实验材料 一周龄Wistar 大鼠 试剂、试剂盒 D-Hanks’液 胰蛋白酶 Ⅴ型胶原酶 葡萄糖 碘乙酸 仪器、耗材 手术剪 手术钳 眼科剪刀 眼科镊子
人脐动脉平滑肌细胞培养实验——消化法
人脐动脉平滑肌细胞培养可以：（1）获得人脐动脉平滑肌细胞；（2）作为重大动脉疾病的研究底物；（3）研究血管模型；（4）对血管疾病的药理学和治疗继续提供信息。实验方法原理运用消化法进行人脐动脉血管平滑肌细胞的培养，并用倒置显微镜进行形态学观察和用免疫组化对培养细胞进行鉴定。实验材料脐带试剂、试剂盒胶原
原代细胞分离与培养，你都掌握了吗？
对于大部分科研人员来说，研究中一般用到均是现成的细胞系/株，我们只需要：进行细胞传代和保种。然而，这些细胞系常常由于体外长期培养，而丢失原有生物学特性，对药物处理的反应差距越来越大。因此，原代细胞的地位日渐凸显，Paper中若有了原代细胞的数据都会添色不少。然而，就小编亲生经历，原代细胞分离着实
MMP2基因的结构及作用
该基因是基质金属蛋白酶（MMP）基因家族的成员，是锌依赖性酶，能够切割细胞外基质的成分和参与信号转导的分子。该基因编码的蛋白是一种胶原酶A，IV型胶原酶，在其催化位点包含三个纤维连接蛋白II型重复序列，允许变性的IV型和V型胶原和弹性蛋白结合。与大多数MMP家族成员不同，这种蛋白的活化可以发生在细胞
乳腺癌相关的－MMP2因突变类型及临床解释
该基因是基质金属蛋白酶（MMP）基因家族的成员，是锌依赖性酶，能够切割细胞外基质的成分和参与信号转导的分子。该基因编码的蛋白是一种胶原酶A，IV型胶原酶，在其催化位点包含三个纤维连接蛋白II型重复序列，允许变性的IV型和V型胶原和弹性蛋白结合。与大多数MMP家族成员不同，这种蛋白的活化可以发生在细胞
关于半胱氨酸蛋白酶的基本介绍
半胱氨酸蛋白酶 包括组织蛋白酶B、H、L等，一般存在于溶酶体，主要参与细胞吞噬和细胞内多余物质的清除和消化。 近年来组织蛋白酶B（Cathepsin B，CB）的作用日受重视。正常组织中分离到的CB最适PH为酸性，在中性或碱性条件下无活性，但肿瘤组织中CB却在中性或碱性时活性更高，这似乎更
脐带和脐血来源干细胞的培养实验_从脐静脉分离干细胞
实验材料脐带试剂、试剂盒胶原酶培养基仪器、耗材导管实验步骤(a)在正常分娩后6〜12h内收集和处理脐带。(b)在脐静脉内插入导管，用PBSA完全地洗2次。(c)夹住远端脐带。(d)用0.1%胶原酶溶液充满静脉。(e)夹住近端脐带。(f)将脐带在37℃孵育20min。(g)轻轻按摩脐带，收集含有内皮和
大鼠乳鼠成骨细胞培养实验_酶消化法
大鼠乳鼠成骨细胞培养培养用于：（1）获得大鼠乳鼠成骨细胞；（2）骨修复的细胞学机制研究。实验方法原理取材于出生2~3 d 小鼠颅骨，以含20%胎牛血清的DMEM培养液进行培养，采用胶原酶消化法分离成骨细胞，并进行细胞接种与传代。采用胶原酶消化法分离培养成骨细胞是一种可靠、简便、快速的细胞原代分离培养
大鼠乳鼠成骨细胞培养实验
酶消化法 实验方法原理 取材于出生2~3 d 小鼠颅骨，以含20%胎牛血清的DMEM培养液进行培养，采用胶原酶消化法分离成骨细胞，并进行细胞接种与传代。采用胶
细胞膜的制备方法实验
从悬浮细胞中制备细胞膜从组织培养皿中的汇合或部分汇合细胞中分离顶层膜、基底膜或中间膜从生长于微载体上的细胞中分离细胞膜实验材料胶原酶 试剂、试剂盒EDTA
细胞膜的制备方法实验——从悬浮细胞中制备细胞膜
实验材料胶原酶试剂、试剂盒EDTAHBSS胶原酶溶液阳离子硅胶贮存液仪器、耗材离心机实验步骤一、用胶原酶/EDTA 释放细胞1. 用预保温溶液洗涤单层细胞并用胶原酶处理(1) 预保温溶液洗涤细胞。预保温溶液：5 mmol/L EDTA 钠盐溶于 HBSS，不含二价阳离子。(2) 在单层细胞上加 1%
细胞膜的制备方法实验
从悬浮细胞中制备细胞膜 从组织培养皿中的汇合或部分汇合细胞中分离顶层膜、基底膜或中间膜 从生长于微载体上的细胞中分离细胞膜 实验材料
概述老年人间质性肺炎的发病机制
ILD确切的发病机制尚未完全阐明，但不同病因的ILD改变都从肺泡炎开始，在发展和修复过程中导致肺纤维化的倾向有其共同之处。活化的巨噬细胞具有调整淋巴细胞的功能和分泌炎性介质如补体成分、前列腺素、胶原酶、弹性硬蛋白酶、中性蛋白酶、纤维蛋白溶酶活化剂、β葡萄糖醛酸酶、血管生成因子、成纤维细胞生长因子
脐带和脐血来源干细胞的培养实验_酶消化法
实验材料脐带试剂、试剂盒Wharton胶PBSA胶原酶仪器、耗材培养瓶实验步骤(a)脐带取材后，可在PBSA中保存1〜24h。(b)除去血管，将Wharton胶剪成大约0.5cm的小组织块。(c)将剪碎的组织块转移到50mL离心管，用无血清DMEM洗，室温250g离心5min。(d)倒掉上清液，将离
物理方法对胶原蛋白进行改性
通过物理手段对胶原蛋白改性有紫外线照射、重度脱水、λ射线照射和热交联等方法。胶原溶液如被紫外线等照射，将在分子间产生交联，粘度增加，生成凝胶。常用的紫外线交联胶原膜的方法是将胶原膜放在铝箔上，距离254nm紫外灯20cm高度，照射1～5h。对紫外线照射的胶原膜进行力学性能和胶原酶试验表明：交联胶
胶原蛋白的物理方法交联改性方法介绍
通过物理手段对胶原蛋白改性有紫外线照射、重度脱水、λ射线照射和热交联等方法。胶原溶液如被紫外线等照射，将在分子间产生交联，粘度增加，生成凝胶。常用的紫外线交联胶原膜的方法是将胶原膜放在铝箔上，距离254nm紫外灯20cm高度，照射1～5h。对紫外线照射的胶原膜进行力学性能和胶原酶试验表明：交联胶原膜
流式细胞术常用样品的制备方法
实验概要流式细胞术的实验检测对象是单细胞悬液，因此，在组织化学和免疫组织化学实验中欲对待测样品细胞进行分类计数，也需把样品制备成细胞悬液，并要求被检细胞大小为0.2～80pm，每个样品中至少有20 000个细胞，细胞浓度为105～107个／ml。制备成的单细胞悬液经荧光或免疫荧光标记即可上机检测。本
上皮细胞类培养实验_胃上皮细胞培养实验
实验方法原理胃癌为我国高发癌症之一，培养正常人胃上皮细胞对研究胃癌癌变机理有很大应用价值。近年来培养人的肾脏上皮、气管上皮、前列腺上皮等都有报道，但培养人胃上皮细胞少见成功。近年我研究室通过培养90例正常胃上皮细胞初代培养获得成功，并建成转化细胞系（Ges-1）。培养人正常胃上皮细胞获得成功主要在于
植入胶原的基因修正的成纤维细胞入成年鼠脑的腔内
实验材料基因修正的成纤维细胞试剂、试剂盒DMEM 10%FBS 培养基PBSNaOH胶原酶成年宿主鼠抗菌素仪器、耗材圆锥管孵育箱牙科钻头27G 针巴斯德管手术用具水凝胶泡沫术后恢复笼实验步骤1.用 PBS 和胰酶清洗基因修正的成纤维细胞。用 37℃ DMEM/10%FBS 培养基重悬细胞。细胞计数并
老年人间质性肺炎的发病机制
ILD确切的发病机制尚未完全阐明，但不同病因的ILD改变都从肺泡炎开始，在发展和修复过程中导致肺纤维化的倾向有其共同之处，活化的巨噬细胞具有调整淋巴细胞的功能和分泌炎性介质如补体成分，前列腺素，胶原酶，弹性硬蛋白酶，中性蛋白酶，纤维蛋白溶酶活化剂，β葡萄糖醛酸酶，血管生成因子，成纤维细胞生长因子