蛋白质N端测序服务Edman法
服务简介几乎所有的蛋白质合成都起始于N-端，蛋白质N-端的序列组成对于蛋白质整体的生物学功能有着巨大的影响力。例如N-端序列影响蛋白质的半衰期，同时关联着蛋白亚细胞器定位等，这些与蛋白的功能和稳定性息息相关，对蛋白进行N-端测序分析，有利于帮助分析蛋白质的高级结构，揭示蛋白质的生物学功能。对蛋白N端测序主要分类两大类，其一为非质谱技术，其二为质谱技术。各自都有其使用的长处和制约之处。蛋白质和多肽N-端测序技术是以Edman化学降解法为基础的。Edman化学降解是测定蛋白质一级结构的方法主要是从蛋白质或多肽氨基酸末端进行分析，其基本原理是包括通过异硫氰酸苯脂与蛋白质和多肽的N-端残基的偶联，苯氨基硫甲酰酞（PTC-肽）环化裂解，和噻唑呤酮苯氨（ATZ）转化为苯异硫尿氨基酸（PTH-氨基酸）三个主要的化学步骤，每个循环从蛋白质与多肽裂解一个氨基酸残基，同时暴露出新的游离的氨基酸进行下一个Edman降解，而后通过转移的PTH-氨基酸鉴......阅读全文
蛋白质质谱鉴定技术概述及常见问题
蛋白质（Protein）是生物体中含量最高，功能最重要的生物大分子，存在于所有生物细胞，作为生命的物质基础之一，蛋白质在催化生命体内各种反应进行、调节代谢、抵御外来物质入侵及控制遗传信息等方面都起着至关重要的作用，因此蛋白质也是生命科学中极为重要的研究对象。现代研究结果发现越来越多的多肽同蛋白质一样
双脱氧法DNA测序实验——α标记核苷酸进行热循环测序反应
实验材料DNA试剂、试剂盒DNA测序缓冲液dATPDNA聚合酶仪器、耗材热心换反应装置离心机实验步骤1. 对应于毎个待测模板，分别以A、G、C、T 标记好4个微量离心管。2. 分别往标好A、G、C、T 的管子中，加A、G、C、T 测序混合液各3 μl。 3. 对于单链模板：在0.5 ml 微量
成功的端到端称重数据集成
成功的端到端称重数据集成February 27, 2018 -设计单机配料控制解决方案，满足您特定的流程需求称重流程数据向更高级别 MES 或 ERP 系统的高效传输，可确保包括配料控制系统在内的制造过程更高效、更透明。透明度提高后，即可改善资产使用、降低运营成本，从而更易符合认证标准或行业规定的要
DNA结构3′端和5′端的差异
中文名称3′端英文名称3′-end定 义DNA或RNA单链带有游离3′-羟基或其磷酸酯的一个末端。一条核酸链通常从5′端到3′端书写。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），核酸与基因（二级学科）中文名称5′端英文名称5′-end定 义DNA或RNA单链带有游离5′-羟基或其磷酸酯的一个末端。
大鼠I型胶原N末端肽(NTX)ELISA检测法
大鼠I型胶原N末端肽(NTX)ELISA试剂盒 (用于血清、血浆、细胞培养上清液和生物体液内) 原理本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA法。用抗大鼠 NTX 单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的 NTX与单抗结合，加入生物素化的抗大鼠NTX，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Stre
H5N1病毒RTPCR－检测法
⑴ 流感病毒RNA 提取：用 Qiagen RNA 提取试剂盒 ，参照使用说明步骤如下：1. 吸取560ul 含有载体RNA ( carrier RNA ) 的 Buffer AVL 到 一个干净的1.5ml Eppendorf 管。2. 吸取140 ul病毒尿囊液/或含有病毒的样品液到上述的Epp
双重测序法：准确度提高千万倍！
在去年圣诞节期间的加拿大落基山脉冰攀之旅中，两位来自华盛顿大学的年轻研究人员：Michael Schmitt和Jesse Salk突发奇想，谈到了一个简单但功能强大，可用于检测癌细胞，获得更好结果的新方法――如果他们能降低DNA测序中的错误率，那么就可以更好的检测出这些细胞中的变异，这种改进
DNA测序——MaxamGilbert化学修饰法
实验方法原理用化学试剂 处理具有末端放射性标记的DNA片段 ，造成碱基的特异性切割并产生一组具有不同长度的DNA链降解产物，经凝胶电泳分离和放射自显影后，可直接读出待测DNA片段的核苷酸序列。实验材料DNA试剂、试剂盒蒸馏水仪器、耗材电泳仪实验步骤一、取待测DNA片段，既可以是单链也可以是双链。 此
研究人员创建精准N糖蛋白质组学分析方法
复旦大学化学系教授杨芃原团队、中科院计算技术研究所研究员贺思敏团队、国家蛋白质科学中心（上海）研究员黄超兰团队合作，创建了基于质谱的高通量糖基化肽段分析方法，为精准N糖蛋白质组学提供了新技术。9月5日，相关研究成果发表于《自然—通讯》。 糖基化是最复杂的蛋白后修饰之一。与其他蛋白后修饰相比
蛋白质中O,N原子的数量计算公式
蛋白质中O,N原子的数量计算公式：O原子数=肽链数×2+肽键数+R基上的O原子数=各氨基酸中O原子的总数-脱去的水分子数。N原子数=肽链数+肽键数+R基上的N原子数=各氨基酸中N原子的总数。
蛋白质自动测序仪的日常维护
流动相的选择采用与检测器相匹配且黏度小的“HPLC”级溶剂，经过蒸馏和0.45μm的过滤去除纤维毛和未溶解的机械颗粒等，经过0.2μm的过滤可除去有紫外吸收的杂质对试样有适宜的溶解度。避免使用会引起柱效损失或保留特性变化的溶剂[1]。 水的等级需用纯化水，因为不纯物的存在会增加去离子的吸光率，
蛋白质质谱测序技术和仪器国产化
2015年10月17日，第二届全国质谱分析学术报告会在浙江大学紫荆港校区体育馆盛大开幕，在5位院士的精彩报告后，多位学者做了高水平的大会报告。 复旦大学杨芃原教授：蛋白质质谱测序技术和仪器国产化 复旦大学教授杨芃原教授做题为《蛋白质质谱测序技术和仪器国产化》的报告。蛋白质质谱测
磷酸化位点分析实验_磷酸肽的化学测序
实验方法原理磷酸化位点的确定也使用一些通用方法；磷酸化蛋白质被纯化，如果可能蛋白质要均一；磷蛋白被特异性的化学或酶反应切断、产生肽混合物，其中含有一到两个磷酸肽不同之处在干其分离磷酸肽的策略是为了确定氨基酸序列，定位肽段内磷酸化的残基。上面所述的分离方法， 2D-PP 作图、 HPLC 或 lMAC
磷酸化位点分析实验_磷酸肽的化学测序
实验方法原理磷酸化位点的确定也使用一些通用方法；磷酸化蛋白质被纯化，如果可能蛋白质要均一；磷蛋白被特异性的化学或酶反应切断、产生肽混合物，其中含有一到两个磷酸肽不同之处在干其分离磷酸肽的策略是为了确定氨基酸序列，定位肽段内磷酸化的残基。上面所述的分离方法， 2D-PP 作图、 HPLC 或 lMAC
磷酸化位点分析实验磷酸化位点的确定
实验方法原理 磷酸化位点的确定也使用一些通用方法；磷酸化蛋白质被纯化，如果可能蛋白质要均一；磷蛋白被特异性的化学或酶反应切断、产生肽混合物，其中含有一到两个磷酸肽不同之处在干其分离磷酸肽的策略是为了确定氨基酸序列，定位肽段内磷酸化的残基。上面所述的分离方法， 2D-PP 作图、 HPLC 或 l
罗氏牵手迪安诊断引入“全面基因组测序分析服务”
艾尔建偏头痛药物取得第二项三期试验成功；曹雪涛院士团队新成果：反馈性免疫自身识别可及时促进炎症消退；更安全有效的CAR-T 2.0疗法要来了？……我们专注医药研发最新动态，给研发人员提供及时准确的信息参考。罗氏牵手迪安诊断引入“全面基因组测序分析服务”27日，罗氏公司宣布，罗氏及其控股公司Fo
GE向瑞典著名研究所提供新一代测序服务
通用电气医疗集团(GE Healthcare)近日宣布，它将向瑞典卡罗林斯卡学院的一个研究小组独家提供新一代测序服务。这是该公司在欧洲的第一份大规模测序协议。它将由GE Healthcare的子公司SeqWright Genomic Services提供。 据介绍，第一个使用GE
蛋白质含量测定法福林酚法（Lowry法）
本法系依据蛋白质分子中含有的肽键在碱性溶液中与Cu2+螯合形成蛋白质-铜复合物，此复合物使酚试剂的磷钼酸还原，产生蓝色化合物，同时在碱性条件下酚试剂易被蛋白质中酪氨酸、色氨酸、半胱氨酸还原呈蓝色反应。在一定范围内其颜色深浅与蛋白质浓度呈正比，以蛋白质对照品溶液作标准曲线，采用比色法测定供试品中蛋
磷酸化位点分析实验磷酸化位点的确定
磷酸肽的化学测序 磷酸肽的质谱分析 源后衰变 用酶和化学方法去磷酸化 实验方法原理 磷酸化位点的确定也使用一
方案2－蛋白质还原和S羧甲基化：大规模方法
实验方法原理蛋白质链间或链内完整的二硫键，会给酶解或化学裂解带来麻烦。如：1.二硫键连接的肽段洗脱物，在基于RP-HPLC的肽段作图中会产生单个的峰，从而使这些肽段图很难解释；2.最理想的方法是在序列测定之前，分离由S—S键连接的肽段，否则会使序列数据的解释变得复杂；3.没有断裂二硫键的蛋白质不便于
蛋白质印迹法的分类
显色的方法主要有以下几种：i. 放射自显影ii. 底物化学发光ECLiii. 底物荧光ECFiv. 底物DAB呈色现常用的有底物化学发光ECL和底物DAB呈色，体同水平和实验条件的是用第一种方法，发表文章通常是用底物化学发光ECL。只要买现成的试剂盒就行，操作也比较简单，原理如下（二抗用HRP标记）
蛋白质纯化亲和层析法
若表达蛋白质上含有一段六个His 的片段，而亲和吸附胶上接有镍离子，此蛋白质会特异性地结合到吸着胶体；洗去杂质后可imidazole 洗脱目标蛋白质。（Pharmacia 操作手册， Affinity Chromatography）。仪器设备：亲和层析管柱 （Bio-Rad 731-1550 Pol
蛋白质纯化胶体过滤法
不同大小的蛋白质分子进入胶体过滤管柱，可依其分子量差异分离；是一种广泛应用的partition色析法 （Pharmacia操作手册， Gel Filtration）。仪器设备：色析管柱 （Pharmacia C column, 1.6×100 cm）、铁架、铁夹及水平仪；部分收集器（fracti
批量层析法浓缩蛋白质实验
实验方法原理批量层析的特点在于层析用树脂不放在柱中，而是放在烧杯或瓶子的容器中；通过搅拌或摇动而混内层析；以过滤或离心的办法分出层析液。实验材料蛋白质溶液仪器、耗材离子交换层析装置实验步骤1. 在烧杯或锥形瓶中平衡树脂，不断搅拌以促进平衡；2. 倾泻掉大部分溶液，保留的溶液置要使树脂能轻松的搅拌；3
蛋白质印迹法的概念
蛋白质印迹法（免疫印迹试验）即Western Blot。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息。蛋白质印迹法是由瑞士米歇尔弗雷德里
蛋白质的盐析分离法
一、蛋白质盐析分离的原理：蛋白质在稀盐溶液中溶解度会随着盐浓度的增大而上升（盐溶），当盐浓度增大到一定数值时，其溶解度又逐渐下降直至蛋白质析出。盐析的发生是由于盐浓度增大到一定数值时使水活性降低，导致蛋白质分子表面电荷逐渐被中和，水化膜逐渐被破坏，引起蛋白质分子之间相互聚集并从溶液中析出，最后经离心
蛋白质的直接定量（UV法）
蛋白质的直接定量（UV法） 分光光度计原理说明的这种方法是在280nm波长，直接测试蛋白。选择Warburg公式，光度计可以直接显示出样品的浓度，或者是选择相应的换算方法，将吸光值转换为样品浓度。蛋白质测定过程非常简单，先测试空白液，然后直接测试蛋白质。由于缓冲液中存在一些杂质，一般要消除
蛋白质纯化胶体过滤法
仪器设备：色析管柱 （Pharmacia C column, 1.6×100 cm）、铁架、铁夹及水平仪；分划收集器 （fraction collector, 需准备干净试管约100 支）；浓缩用离心机 （低速5,000 rpm）；浓缩用离心管Centriprep-30 （Amicon 4322）
蛋白质印迹法的原理
与Southern Blot或Northern Blot杂交方法类似，但Western Blot法采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。经过PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）上，固相载体以非共价键形式吸附
什么是蛋白质印迹法？
蛋白质印迹法(免疫印迹试验)即Western Blot。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息。