沉默是金:强大的RNAi筛选技术
在过去，想要发现哺乳动物细胞的重要生理过程，通常需要通过化学突变或将转座子插入到基因组中对细胞内的基因进行干扰。但是，大约10年前，RNA 干扰(RNAi)技术的出现改变了这种状态。这项技术的核心是，设计一个短链RNA，使其在转录过程中与目的基因序列互补结合，从而阻止目的基因翻译成蛋白。RNAi技术的问世，使得对哺乳动物体内每一个细胞内基因进行干扰成为了可能。 “这个技术的出现开辟了了解哺乳动物基因功能的一个全新领域。”美国国家卫生研究院国家转化科学推进中心从事RNAi筛选的科学家Scott Martin说。利用RNAi筛选方法已经发现了许多关键的细胞过程，如细胞增殖、细胞凋亡和细胞复制等。 尽管近年来RNAi筛选技术在不断提高，我们拥有了更多有效的RNA探针来干扰目标基因，但是这项技术也存在一定的缺陷。“脱靶效应是主要的限制，” Martin说。你需要采取一定的措施来清除用以沉默靶基因的RNAis而......阅读全文
血清学筛选克隆新抗原/新基因（二）
19. 第一轮筛选得到阳性克隆需要进行第二轮筛选以去除假阳性并获得阳性单克隆噬菌体。过程如第一轮筛选，只不过用直径90mm 平板；具体过程见步骤4，这时所加入的噬菌体溶液是第一轮筛选得到的噬菌体上清（见步骤18），在用前要滴定好噬菌体的滴度，噬菌斑的数量以可区分出单个克隆，同时密度不能太稀为
基因编辑鼠的构建－Guide－RNA设计和筛选
众所周知，CRISPR/Cas9被业内誉为“基因剪刀”，它可以高效地实现靶基因的编辑，自问世以来就备受关注和青睐。CRISPR/Cas9系统是由CRISPR相关基因和Cas9组成，Cas9核酸酶会在向导RNA（Guide RNA, gRNA）的指引下，在完整基因组上的特定位点完成切割反应，同
流式细胞仪能筛选出单克隆细胞么
可以。为了制备牛型布鲁菌核蛋白L7/L12的单克隆抗体,试验采用流式细胞仪与间接ELISA相结合的方法进行单克隆筛选,以及Western-blot分析。结果表明:最终筛选出3株表达量较高的杂交瘤细胞株,细胞培养上清液的抗体效价可达1∶3 200,3株单克隆抗体均能与核蛋白L7/L12发生特异性结合,
中等量细胞克隆的杂交法筛选实验
实验方法原理 这一方法适用于任何大小的细菌克隆，但小的克隆可以给出最清楚的结果。小克隆可以产生尖锐的杂交信号，而且在克隆从琼脂板转到膜的过程中不会弥散。操作中 采用能够包含 2500 克隆的 90 mm 板效果最好。在保证
利用细胞的功能和小鼠的表型筛选
利用细胞的功能筛选 与典型的受体-配体成键化验相比, 使用细胞的功能筛选有几个优点. 它可以识别拮抗肌和主缩肌的不同成键方式, 这通过测键能是分不开的. 同时, 在多步信号传递中有能筛选大量靶蛋白的优点. 由于有关于细胞的化合物吸收, 新陈代谢, 排泄, 以及细胞毒素等的信息, 可以忽略体外筛选
利用细胞的功能和小鼠的表型筛选
利用细胞的功能筛选与典型的受体-配体成键化验相比, 使用细胞的功能筛选有几个优点. 它可以识别拮抗肌和主缩肌的不同成键方式, 这通过测键能是分不开的. 同时, 在多步信号传递中有能筛选大量靶蛋白的优点. 由于有关于细胞的化合物吸收, 新陈代谢, 排泄, 以及细胞毒素等的信息, 可以忽略体外筛
中等量细胞克隆的杂交法筛选实验
实验方法原理 这一方法适用于任何大小的细菌克隆，但小的克隆可以给出最清楚的结果。小克隆可以产生尖锐的杂交信号，而且在克隆从琼脂板转到膜的过程中不会弥散。操作中 采用能够包含 2500 克隆的 90 mm 板效果最好。在保证没有气泡的情况下，用更大的滤膜很难正好覆盖于 150 mm 板。实验材料
Cell子刊：细胞重编程加速药物筛选
最近，美国约翰霍普金斯大学的研究人员报道称，一种实验室培养的人类神经细胞可与心肌细胞搭档，来刺激收缩。因为加速心跳的神经细胞来自于由人类皮肤细胞制成的诱导多能干细胞(iPS)，因此研究人员认为，这些细胞——称为交感神经细胞，将有助于我们研究影响神经系统的疾病，也就是说，科学家将能够在实验室里培养
Nature子刊：细胞重编程助力药物筛选
Johns Hopkins大学的研究人员利用iPSC技术进行药物筛选取得了实质性的进展，这项成果为一些遗传疾病提供了成本更低更快捷的药物研发途径，还将有助于发展个性化医疗，用来自患者自身的细胞在体外测试治疗手段的安全性和有效性。文章于十一月二十五日发表在Nature Biotechnol
G418筛选稳定表达细胞系
1.G418的配制：取1g G418溶于1ml 1M的HEPES液中，加蒸馏水至10ml，过滤消毒，4度保存。2.细胞培养：取待测培养细胞，制备成细胞悬液，按等量接种入多孔培养板中，培养6小时左右开始加药。3.制备筛选培养基：在100ug/ml~1000ug/ml范围内确定几个梯度，比如先做个100
悬浮培养法细胞的筛选驯化和保藏
实现悬浮培养首先需要选择合适的宿主细胞，细胞系的特征直接影响放大的可能性以及放大技术的选择。同一种细胞在悬浮培养和贴罐培养时对同一病毒的敏感性不同；同一株细胞不同的克隆对营养条件有不同的需求，对病毒敏感性亦可能不同。 常根据毒株特性，综合考虑所用毒株能在何种细胞上增殖、表达，悬浮或贴壁细胞属性足否适
中等量细胞克隆的杂交法筛选实验
这一方法适用于任何大小的细菌克隆，但小的克隆可以给出最清楚的结果。小克隆可以产生尖锐的杂交信号，而且在克隆从琼脂板转到膜的过程中不会弥散。操作中采用能够包含 2500 克隆的 90 mm 板效果最好。在保证没有气泡的情况下，用更大的滤膜很难正好覆盖于 150 mm 板。本实验来源「分子克隆实验指南第
谷物筛选原理以及筛选仪器
筛选是指根据物料粒度的不同，利用一层或数层静止的或运动的筛面对物料进行分选的方法。由于筛选和重力分选的主要对象是谷物，就其性质而言，介于固体和液体之间而被称为散粒体。散粒体具有流动性和自动分级性能。谷物筛选器检验颗粒粮食、油料试样的含杂率及大米中、糠粉含量，确定其品质等级的一种检验仪器，确定其害虫密
重组质粒的筛选（抗生素平板筛选和α互补筛选）
重组DNA转化受体细胞后，须在不同水平上进行筛选，以区别转化子与非转化子、重组子与非重组子以及鉴定所需的特异性重组子。在转化过程中，并非每个受体细胞都被转化；即使获得转化细胞，也并非都含有目的基因，所以需采用有效方法进行筛选。筛选的方法包括根据遗传表型筛选、限制性内切酶分析筛选、核酸探针筛选、PCR
细胞移植应用药物筛选用中空纤维细胞移植管（膜）
细胞移植应用--CellMax® 药物筛选用中空纤维细胞移植管（膜）In vivo筛选潜在抗癌或抗HIV活性化合物的方法现在已经不再常用，美国国家癌症研究所开发了抗癌药物筛选的新技术，该技术将人的细胞移植到宿主动物体内然后一同取出，在宿主体内，细胞与潜在的化学治疗剂接触，作用的结果可通过将细胞取
多色流式细胞术筛选活化T淋巴细胞（一）
T淋巴细胞是一种重要的免疫活性细胞，由一群功能不同的异质性淋巴细胞组成，在胸腺内分化成熟，在整个免疫应答中处于中心环节。在T细胞发育不同阶段，其细胞膜分子表达的种类和数量均不相同。譬如，初始T细胞胞体小，细胞质少，表达CD45RA、CCR7、CD62L、CD127和CD132等，但不表达一些活化相关
多色流式细胞术筛选活化T淋巴细胞（二）
流式细胞术表型分析策略，用于鉴定正常人外周血中活化的T细胞。 1.单重态细胞2.白细胞3.淋巴细胞4.CD3 + T淋巴细胞5.CD4 +与CD8 + T淋巴细胞 下中部：活化的CD8 +细胞毒性T淋巴细胞 右下：循环的滤泡辅助性T淋巴细胞右上：激活的CD4 +辅助/诱导T淋巴细胞 COVID-19
蓝色链霉菌中筛选出活性基因簇
荷兰格罗宁根大学的研究人员利用基因挖掘法从蓝色链霉菌中发现了一组活性基因簇，通过该基因簇可制造出无耐药性的新型抗生素，该研究有望为链霉菌的药用开发提供一条新思路。相关研究发表在最新一期《微生物学》杂志上。 链霉菌是生活在土壤中的一种常见细菌，其家族包含多种细菌。不同于其他细
蛋白质芯片对于基因表达的筛选的应用
从人胎儿脑的cDNA文库中选出92个克隆的粗提物制成蛋白质芯片，用特异性的抗体对其也进行检测，结果的准确率在87%以上，而用传统的原位滤膜技术准确率只达到63%。与原位滤膜相比，用蛋白质芯片技术在同样面积上可容纳更多的克隆，灵敏度可达到pg级。
试管婴儿孕前基因筛选首次扩至癌症
9月24日，我国生殖工程创始人之一、中南大学教授、中信湘雅生殖与遗传专科医院院长卢光琇在长沙宣布，她所在的研究团队运用最新的胚胎植入前遗传学诊断（PGD）技术，对一个家族性致癌基因在后代中的传递进行了排除，通过该技术诞生的国内首例“无癌宝宝”目前已满半岁，随访显示宝宝身体指标一切正常。据悉，这是
蛋白质芯片技术应用与基因表达的筛选
基因表达的筛选AngelikaL．等人从人胎儿脑的cDNA文库中选出92个克隆的粗提物制成蛋白质芯片，用特异性的抗体对其也进行检测，结果的准确率在87%以上，而用传统的原位滤膜技术准确率只达到63%。与原位滤膜相比，用蛋白质芯片技术在同样面积上可容纳更多的克隆，灵敏度可达到pg级。
基因的转移与重组体的筛选和鉴定5
（二）目的克隆的鉴定经过初步筛选获得的阳性克隆，下一步必须对带有目的序列的克隆做进一步筛选和鉴定。鉴定一般有几种常用方法：（1）分子杂交；（2）免疫学检测；（3）DNA测序；（4）蛋白质活性筛选；（5）基因互补实验。1. 分子杂交核酸分子杂交有多种方法：原位杂交、点杂交及Southern杂交等。原理
基因芯片技术的应用药物筛选和新药开发
由于所有药物(或兽药)都是直接或间接地通过修饰、改变人类(或相关动物)基因的表达及表达产物的功能而生效,而芯片技术具有高通量、大规模、平行性地分析基因表达或蛋白质状况(蛋白质芯片)的能力,在药物筛选方面具有巨大的优势。用芯片作大规模的筛选研究可以省略大量的动物试验甚至临床,缩短药物筛选所用时间,提高
药物作用靶点筛选与基因敲除技术的关系
2018年一对双胞胎婴儿的CCR5基因敲除的事件在社会上引起了轩然大波，抛开这次事件而言，作为一项生物研究技术，基因敲除在药物研发领域应用也很广泛，今天我们来看一下它在药物作用靶点筛选上的作用吧！ 通过药物作用的靶点来设计开发创新药物是目前创新药制剂开发的一条重要线索，每年都会有作用于新靶
STEME实现植物基因的定向进化和功能筛选
遗传与变异是物种进化的基础。通过物理、化学方法(如辐射诱变、EMS诱变)产生全基因组的随机突变已经成为农作物育种的常规手段，但其中具有新型农艺性状突变体的筛选较为费时、费力。定向进化(Directed Evolution)则通过创制目标基因的突变文库，在施加一定选择压力下能够快速获得目的突变体。
药物作用靶点筛选与基因敲除技术的关系
2018年一对双胞胎婴儿的CCR5基因敲除的事件在社会上引起了轩然大波，抛开这次事件而言，作为一项生物研究技术，基因敲除在药物研发领域应用也很广泛，今天我们来看一下它在药物作用靶点筛选上的作用吧！ 通过药物作用的靶点来设计开发创新药物是目前创新药制剂开发的一条重要线索，每年都会有作用于新靶
基因的转移与重组体的筛选和鉴定2
二、重组DNA分子转入真核细胞1. 根癌农杆菌Ti质粒介导法农杆菌介导的Ti质粒载体转化法是目前研究最多、机制最清楚、技术方法最成熟的基因转化途径。迄今为止约8096的转基因植株都是利用农杆菌介导转化系统获得的。农杆菌是一类土壤习居菌，革兰氏染色呈阴性，能感染双子叶植物和裸子植物，而对绝大多数单子叶
基因的转移与重组体的筛选和鉴定1
第一节 转化基因片段在体外只是一段核酸分子，是化学物质，无法表现出遗传物质的生命活性。只有当其存在于活细胞后，生命的特征才能充分展示出来。在分子克隆实践中，在体外操作的核酸分子只有进入细胞以后才能达到克隆的目的。一、重组DNA分子转入原核生物细胞1. 重组质粒DNA分子转化大肠杆菌转化（transf
基因组文库和cDNA文库的构建及筛选
刘芝华 中国医学科学院肿瘤研究所 分子肿瘤学国家重点实验室 概念： 基因组文库是含有某种生物体全部基因的随机片段的重组DNA克隆群体；cDNA文库是指含有所有重组cDNA的克隆群体。 基因组文库：来源于基因组DNA，反映基因组的全部信息，用于基因组物理图谱的构建，基因组序列分析，基因在染色体上
基因的转移与重组体的筛选和鉴定4
（3）插入表达筛选法与插入失活相反，插入表达法是外源目的基因插入特定载体后，能激活用于筛选操作的标记基因的表达，由此进行转化子的筛选。设计载体时，在筛选标记基因前面连接一段具有抑制作用的负调控序列，插入外源DNA将使该负调控序列失活，其下游的筛选标记基因才能表达。例如质粒pTR262有一个负调控的c