关于亚硫酸氢盐测序的基本介绍

亚硫酸氢盐测序(bisulfite sequencing)是2018年公布的生物物理学名词,出自《生物物理学名词》第二版。 检测细胞或组织中全部染色体DNA上甲基化情况的技术。基于亚硫酸氢盐能使DNA中未发生甲基化的胞嘧啶脱氨基转变成尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶保持不变,行PCR扩增所需片段,则尿嘧啶全部转化成胸腺嘧啶,然后对PCR产物进行高通量测序。通过分析不同样品之间的甲基化差异,可研究DNA甲基化水平对基因表达的调控。......阅读全文

关于亚硫酸氢盐测序的基本介绍

  亚硫酸氢盐测序(bisulfite sequencing)是2018年公布的生物物理学名词,出自《生物物理学名词》第二版。  检测细胞或组织中全部染色体DNA上甲基化情况的技术。基于亚硫酸氢盐能使DNA中未发生甲基化的胞嘧啶脱氨基转变成尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶保持不变,行PCR扩增所需片段,则尿

亚硫酸盐或亚硫酸氢盐的一般鉴别实验

(1)鉴别方法①取供试品,加盐酸,即发生二氧化硫的气体,有刺激性特殊臭味,并能使硝酸亚汞试液湿润的滤纸显黑色。②取供试品溶液,滴加碘试液,碘的颜色即消退。(2)反应原理①在酸性溶液中,亚硫酸盐或亚硫酸氢盐生成SO2,可将硝酸亚还原,析出金属汞而显黑色。若为硫代硫酸盐,遇酸也可分解放出SO2而显相同反

亚硫酸氢盐修饰后测序法甲基化检测

第一部分 基因组DNA的提取这一步没有悬念,完全可以购买供细胞或组织使用的DNA提取试剂盒,如果实验室条件成熟,自己配试剂提取完全可以。DNA比较稳定,只要在操作中不要使用暴力,提出的基因组DNA应该是完整的。此步重点在于DNA的纯度,即减少或避免RNA、蛋白的污染很重要。因此在提取过程中需使用蛋白

亚硫酸氢盐修饰后测序法检测甲基化

DNA甲基化             实验方法原理 重亚硫酸盐使DNA中未发生甲基化的胞嘧啶脱氨基转变成尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶保持不变,用PCR扩增(引物设计时尽量避免有CpG,以

亚硫酸氢盐修饰后测序法检测甲基化

实验方法原理重亚硫酸盐使DNA中未发生甲基化的胞嘧啶脱氨基转变成尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶保持不变,用PCR扩增(引物设计时尽量避免有CpG,以免受甲基化因素的影响)所需片段,则尿嘧啶全部转化成胸腺嘧啶。最后对PCR产物进行测序,并且与未经处理的序列比较,判断是否CpG位点的甲基化状态。实验材料DNA

亚硫酸盐或亚硫酸氢盐鉴别实验

(1) 取供试品,加盐酸,即发生二氧化硫的气体,有刺激性特臭,并能使硝酸亚汞试液湿润的滤纸显黑色。(2) 取供试品溶液,滴加碘试液,碘的颜色即消退。 亚锡盐 取供试品的水溶液1滴,点于磷钼酸铵试纸上,试纸应显蓝色。 托烷生物碱类 取供试品约10mg,加发烟硝酸5滴,置水浴上蒸干,得黄色的残渣,放

亚硫酸氢盐修饰后测序法检测甲基化

实验材料 DNA试剂、试剂盒 NaOH苯二酚(氢醌)亚硫酸氢钠石蜡油仪器、耗材 离心管恒温水浴锅铝箔纸实验步骤 1.将约2ugDNA于1.5mlEP管中使用DDW稀释至50ul; 2.加5.5ul新鲜配制的3M NaOH;  3. 42℃水浴30min; 水浴期间配制: 4.10mM对苯二酚(氢醌)

亚硫酸氢盐测序法检测DNA的甲基化

亚硫酸氢盐测序法(Bisulfite sequencing PCR,BSP)用亚硫酸氢盐处理基因组DNA,则未发生甲基化的胞嘧啶被转化为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不变。随后设计BSP引物进行PCR,在扩增过程中尿嘧啶全部转化为胸腺嘧啶,最后对PCR产物进行测序就可以判断CpG位点是否发生甲基化称为BS

亚硫酸氢盐测序法检测甲基化的介绍

  用亚硫酸氢盐处理基因组DNA,则未发生甲基化的胞嘧啶被转化为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不变。随后设计BSP引物进行PCR,在扩增过程中尿嘧啶全部转化为胸腺嘧啶,最后对PCR产物进行测序就可以判断CpG位点是否发生甲基化称为BSP-直接测序方法。将PCR产物克隆至载体后进行测序,可以提高测序成功率,

关于甲基化的亚硫酸氢盐测序法介绍

  用亚硫酸氢盐处理基因组DNA,则未发生甲基化的胞嘧啶被转化为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不变。随后设计BSP引物进行PCR,在扩增过程中尿嘧啶全部转化为胸腺嘧啶,最后对PCR产物进行测序就可以判断CpG位点是否发生甲基化称为BSP-直接测序方法。将PCR产物克隆至载体后进行测序,可以提高测序成功率,

DNA甲基化检测的序曲——亚硫酸氢盐转化

检测DNA甲基化的方法有很多种,在众多方法中,研究人员常常会使用到一项技术,那就是亚硫酸氢盐转化。DNA的亚硫酸氢盐处理将未甲基化的胞嘧啶转化成尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶保持不变。随后用测序、定量PCR和芯片等分析来比较处理和未处理DNA的序列,就能确定哪些碱基是甲基化的。尽管在理论上很简单,但亚硫酸

甲基化检测方法(亚硫酸氢盐修饰后测序法)

甲基化是目前的研究热点,就我所做的一点工作并其中一点心得,与大家分享。希望能够对大家有所帮助。 第一部分 基因组DNA的提取。 这一步没有悬念,完全可以购买供细胞或组织使用的DNA提取试剂盒,如果实验室条件成熟,自己配试剂提取完全可以。DNA比较稳定,只要在操作中不要使用暴力,提出的基因组DNA应

快速可靠的甲基化分析,无需亚硫酸氢盐转化

  在甲基化分析中,亚硫酸氢盐转化通常是必经之路。它将未甲基化的胞嘧啶转化成尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶保持不变,之后再结合PCR、测序等技术分析甲基化状态。听上去似乎很简单,但要想获得漂亮的结果,却并非那么容易。转化效率如何?回收率如何?这都是需要考量和优化的因素。   最近,QIAGEN

叶绿体亚分级实验——叶绿体亚分级

实验材料叶绿体试剂、试剂盒裂解缓冲液仪器、耗材微量离心管小型离心机实验步骤1. 将含 1 mg 叶绿素的叶绿体悬液吸至一微量离心管中。2. 在小型离心机中 14000 r/min 离心 30 秒钟,弃去上清。3. 加 1 ml 裂解缓冲液,振荡,冰浴 5 分钟。裂解缓冲液:10 mmol/L HEP

甲基化检测方法(亚硫酸氢盐修饰后测序法)1

第一部分 基因组DNA的提取。这一步没有悬念,完全可以购买供细胞或组织使用的DNA提取试剂盒,如果实验室条件成熟,自己配试剂提取完全可以。DNA比较稳定,只要在操作中不要使用暴力,提出的基因组DNA应该是完整的。此步重点在于DNA的纯度,即减少或避免RNA、蛋白的污染很重要。因此在提取过程中需使用蛋

甲基化检测方法(亚硫酸氢盐修饰后测序法)2

此步细节:1:在使用注射器时,一定要用力均匀且轻,如使用暴力,会将小柱内的薄膜挤破,失去作用。2:乙酸铵、糖原不需新鲜配制,糖原配好后放在-20度保存,乙酸铵室温即可,因为这样浓度的乙酸铵非常难溶,一旦放在4度,取出用时也会有很多溶质析出。3:异丙醇、70%乙醇都不需要新鲜配制,但如果用量大,现场配

甲基化检测方法(亚硫酸氢盐修饰后测序法)(2)

第三部分 修饰后DNA纯化回收EP管如无特别说明均为高压蒸汽灭菌的。1. 将移液器枪头伸入石蜡油层下,先轻轻加压使其中一小段石蜡油排出,然后吸取混合液至一洁净1.5mlEP管中。2:以下使用Promega Wizard Cleanup DNA纯化回收系统(Promega,A7280)1)70℃水浴预

亚德里亚霉素的使用注意事项

  1、阿霉素在动物中有致癌作用,在人体也有潜在的致突变和致癌作用。阿霉素对动物生殖功能有明显影响,但在人类,其抑制作用较大白鼠实验大为减轻。  2、阿霉素的肾排泄虽较少,但在用药后1~2日内可出现红色尿,一般都在2日后消失。肾功能不全者用阿霉素后要警惕高尿酸血症的出现;痛风患者,如应用阿霉素,别嘌

特异性检测溶酶体亚硫酸氢盐新武器:新款智能荧光探针

  文章提出了一种新的基于逻辑与的荧光探针(NY-Lyso),它由吗啉基、半花菁苷和1,8-萘二甲酰亚胺显色团组成,用于特异性检测溶酶体中的亚硫酸氢盐。该智能探针由两个功能部件组成:NY-Lyso探针上的吗啉基对细胞内溶酶体(pH 4.5-5.5)和其他细胞器之间的pH差异产生敏感反应,噻吩和花菁之

什么是亚甲蓝,亚甲蓝和亚甲基蓝有什么区别

1.亚甲蓝和新亚甲蓝化学结构不一样,是两种不同的物质。2.新亚甲蓝主要用于网织红细胞(不成熟红细胞)染色,有毒。3.亚甲蓝虽然也可以对网织红细胞染色(RNA),但更是一种药物,能治疗高铁血红蛋白血症。

注射用亚锡亚甲基二膦酸盐

性状本品为白色冻干粉末。在水中易溶鉴别(1)取含量测定项下炽灼后的稀释液,加钼酸铵试液,即显黄色(2)取本品1瓶,加氯化钠注射液0.5ml,溶解后,取溶液1滴,点于磷钼酸铵试纸上,应显蓝色。检查溶液的澄清度与颜色取本品1瓶,加氯化钠注射液5m1使溶解,溶液应澄清无色。酸度取溶液的澄清度与颜色项下的溶

亚硫酸氢盐修饰后测序法检测甲基化——DNA甲基化

亚硫酸氢盐修饰后测序法主要可用来检测甲基化。基化实验方法原理重亚硫酸盐使DNA中未发生甲基化的胞嘧啶脱氨基转变成尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶保持不变,用PCR扩增(引物设计时尽量避免有CpG,以免受甲基化因素的影响)所需片段,则尿嘧啶全部转化成胸腺嘧啶。最后对PCR产物进行测序,并且与未经处理的序列比较

张亚平率团访问秘鲁、哥伦比亚和巴西

  应秘鲁国立圣马库斯大学、哥伦比亚科学院及巴西科学院等机构的邀请,中国科学院副院长张亚平于9月19日至29日率团访问秘鲁、哥伦比亚和巴西。  访秘期间,张亚平一行访问了秘鲁国立圣马库斯大学,与该校代校长伊丽莎白共同签署《中国科学院与秘鲁国立圣马库斯大学合作谅解备忘录》,并见证了中科院华南植物园与秘

注射用亚锡亚甲基二膦酸盐介绍

性状本品为白色冻干粉末。在水中易溶鉴别(1)取含量测定项下炽灼后的稀释液,加钼酸铵试液,即显黄色(2)取本品1瓶,加氯化钠注射液0.5ml,溶解后,取溶液1滴,点于磷钼酸铵试纸上,应显蓝色。检查溶液的澄清度与颜色取本品1瓶,加氯化钠注射液5m1使溶解,溶液应澄清无色。酸度取溶液的澄清度与颜色项下的溶

叶绿体亚分级实验

实验材料 叶绿体试剂、试剂盒 裂解缓冲液仪器、耗材 微量离心管小型离心机实验步骤 1. 将含 1 mg 叶绿素的叶绿体悬液吸至一微量离心管中。2. 在小型离心机中 14000 r/min 离心 30 秒钟,弃去上清。3. 加 1 ml 裂解缓冲液,振荡,冰浴 5 分钟。裂解缓冲液:10 mmol/L

叶绿体亚分级实验

            实验材料 叶绿体 试剂、试剂盒 裂解缓冲液 仪器、耗材

亚慢性毒性实验

亚慢性毒性 (subchronic toxicity) 是指实验动物连续多日接触较大剂量的外来化合物所出现的中毒效应,所谓较大剂量,是指小于急性 LD50的剂量。亚慢性毒忙试验的目的,主要是探讨亚慢性毒性的阈剂量或阈浓度和在亚慢性试验期间未观察到毒效应的剂量水平 (no-observed level

叶绿体亚分级实验

叶绿体亚分级实验材料叶绿体                                                          试剂、试剂盒裂解缓冲液                                                          仪器、耗材微量离心管

亚克隆技术

一、目的与原理限制性内切酶是一类能识别双链DNA分子中特异核苷酸序列的DNA水解酶,该类酶是体外剪切基因片段的重要工具。实验主要通过EcoR Ⅰ,Hind Ⅲ两种限制性内切酶对λ DNA的单切酶、双切酶及部分酶切的操作,掌握内切酶的实验操作技术。二、材料与试剂1.材料:λDNA2.仪器:离心机,恒温

亚家族的定义

中文名称亚家族英文名称subfamily定  义基因或蛋白质家族中具有序列相似性较高的一组基因或蛋白质。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),总论(二级学科)