新方法可在大量细胞内自动测定基因表达
《自然—方法学》报道了一种可在数千个人体细胞中自动测量基因表达的方法。该方法使单分子荧光原位杂交技术（smFISH）成倍放大，并能确定细胞内RNA转录发生的位置，为了解RNA转录的生物功能提供了重要线索 通过将目标与荧光探针相结合，smFISH可用于检测细胞内的特定RNA序列，但要将每个RNA分子对应的“点”成像，需要设置更高的成像放大率和精确度。Lucas Pelkmans等人采用了更明亮的探针，让其可以对更多细胞进行快速、强大的低放大倍数成像，精确定量低水平表达以及查询较短的RNA转录。他们使用的软件能够自动勾画出细胞和细胞核，对“点”计数以定量表达并全面记录细胞内转录发生的位置。与那些通过高通量RNA测序技术获得的结果相比，此次人体细胞研究的结果展现出了高度可重复的表达水平。 通过利用数据发现与细胞功能有关的基因的方式，研究人员展现出了测定大量细胞内转录表达和转录发生位置的重要性。......阅读全文
概述胞质杂种和重建细胞的基因表达
为了更直接地研究核、质相互作用对细胞核基因表达变化的作用，运用了“细胞质杂交”（cybridization）和细胞重建（细胞核移植）技术。胞质杂种是由一个无核细胞或去核细胞与一个完整细胞融合而成的，开始时这个混合细胞质内只含有一个细胞核。细胞核的遗传标记（如抗溴脱氧尿苷）和线粒体标记（如抗氯霉素
蜕皮激素调控诱导细胞基因表达实验
下面的方案是从蜕皮激素诱导的哺乳动物表达系统（Invitrogen 公司）附带的方案修改而来。Stratagene 公司也出售相似的系统。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W.拉塞尔。实验材料带有荧光素酶报道基因并受蜕皮激素诱导表达的质粒带有感兴趣的基因并
质粒转染细胞之后多久测外源性mrna表达
不整合入基因组中，可以整合到细胞基因组上进行表达，比如腺病毒类的表达载体；有些质粒上有整合的序列。一般的表达质粒上后面有自带的polyA序列，所以产生的mRNA是带polyA尾巴的质粒转染细胞后是整合到基因组中还是游离存在这要看你用的是哪一种质粒载体，有些质粒就在细胞中进行表达
亚细胞定位的GFP融合蛋白表达法
GFP是绿色荧光蛋白，在扫描共聚焦显微镜的激光照射下会发出绿色荧光，从而可以精确地定位蛋白质的位置。绿色萤光蛋白（GFP）是一个由约238个氨基酸组成的蛋白质，从蓝光到紫外线都能使其激发，发出绿色荧光。通过基因工程技术，绿色萤光蛋白(GFP)基因能转进不同物种的基因组，在后代中持续表达，并且能根
Nature突破守则：干细胞基因表达新规则
十年前，基因的表达看上去是那么的简单：基因被开启或被关闭，不能同时开启又关闭。之后时间到了2006年，一个重磅级的发现指出，在小鼠胚胎干细胞中的发育调控基因可以即激活基因，又抑制基因，这样的基因被称为“二价标记基因(bivalently marked genes)”，在发育和分化过程中可以有
做免疫荧光如何看蛋白是在细胞核表达还是胞浆表达
复染细胞核，常规用过的是DAPI进行细胞核复染（蓝色）。目的是为了鉴别目的蛋白的位置是胞核表达，还是胞质表达或胞膜表达。一般来讲，如果是胞核表达，会和蓝色的细胞核颜色重叠；胞质或胞膜表达则不会重合，单独看目的蛋白的表达，会看到有个黑色的空洞的，尤其细胞图像更为明显。从楼主的图片看，貌似是在胞核表达（
科学家成功实现活细胞转录组测序
原文地址：http://news.sciencenet.cn/htmlnews/2022/8/484542.shtm 活细胞测序记录细胞的变化示意图 来源：Duygu Koldere Vilain 在我们呱呱坠地之前，受精卵是如何发育成复杂个体的？为何正常的细胞会慢慢变成癌细胞？ 细胞
高通量单细胞转录组测序发展与展望
单细胞转录组测序技术这几年的发展之快，运用之广已众所周知。为更好的在国内推广该技术，也为更好的将该技术运用到广大科研工作者的实际工作中，上海生物芯片有限公司生物信息团队通过对该技术的整理和归纳，在《生命科学》杂志上发表了名为“高通量单细胞转录组测序发展与展望”综述文章，希望能进一步提升科研工作者对该
单细胞转录组制备仪的技术指标
将 C1 应用于单细胞 mRNA 测序，可以从多个细胞个 体平行处理多达 96 个 cDNA 文库，在任何 Illumina 测序仪上对 mRNA表达进行相对定量。此系统的主要特征包括： 高通量 -可对 96 个单细胞进行大规模平行、连贯的制备， 引入条形码序列标记（Barcode），可将测序
反转录病毒产毒细胞系建立实验
建立一个能产生高水平的反转录病毒构建体的细胞系是一个长期的过程。首先，必须将反转录病毒构建体稳定地导入一种适当的包装细胞系中。当产生了稳定的细胞系后，必须对之进行鉴定，从中选出能产生具有正确结构的高滴度的病毒的细胞系。实验材料包装细胞系试剂、试剂盒HEPESCaCl2甘油DMSO仪器、耗材培养皿培养
3月单细胞转录组重要研究文献汇总
1.单细胞测序用于生殖领域研究持续火热 精子生成过程是一个复杂又具有严格分化过程的生理过程，继18年10月份《Cell Research》上的成年人睾丸转录组图谱研究[1]和19年2月份《Cell Reports》上新生与成年人睾丸细胞单细胞水平鉴定分类[2]的步伐，本月在《Nature
Science：构建出真涡虫细胞类型转录组图谱
真涡虫是一类相对简单的动物，具有不同寻常的生物学特征：成年真涡虫维持着其他有机体仅在胚胎中短暂存在的发育信息和祖细胞（progenitor cell）。真涡虫获得人们的大量研究，部分原因在于它们具有再生丢失的或受损的身体部位的独特能力。图片来自Christopher Fincher/Whiteh
反转录病毒产毒细胞系建立实验
反转录病毒载体导入包装细胞系 测定病毒滴度 培养细胞的Xgal染色 实验材料 包装细胞系
3月单细胞转录组重要研究文献汇总
1.单细胞测序用于生殖领域研究持续火热 精子生成过程是一个复杂又具有严格分化过程的生理过程，继18年10月份《Cell Research》上的成年人睾丸转录组图谱研究[1]和19年2月份《Cell Reports》上新生与成年人睾丸细胞单细胞水平鉴定分类[2]的步伐，本月在《Nature
反转录病毒产毒细胞系建立实验
实验材料 包装细胞系试剂、试剂盒 HEPESCaCl2甘油DMSO仪器、耗材 培养皿培养板离心机实验步骤 1. 在转染前1天，在10 cm 培养皿中接种包装细胞，接种密度大约相当于10%~20%片的细胞数。2. 将10 μg 含有药物抗性基因的反转录病毒质粒DNA加入0.5 ml HeBS。再加
关于基因转录的转录因子介绍
转录因子(transcription factor)是起调控作用的反式作用因子。转录因子是转录起始过程中RNA聚合酶所需的辅助因子。真核生物基因在无转录因子时处于不表达状态，RNA聚合酶自身无法启动基因转录，只有当转录因子(蛋白质)结合在其识别的DNA序列上后，基因才开始表达。转录因子的结合位点
RNA的转录和逆转录
转录是以DNA为模板合成RNA的过程，经过转录DNA分子中的贮存信息传递到RNA分子中，再由mRNA做为模板合成蛋白质分子。逆转录也是从RNA的一个特定位置开始的，以RNA分子中的一条链为模板，在逆转录酶的作用下，以四种脱氧核苷酸为原料，合成方向仍是5'→3'，完成cDNA的合成。大
RNA复制、转录与逆转录
转录是以DNA为模板合成RNA的过程，经过转录DNA分子中的贮存信息传递到RNA分子中，再由mRNA做为模板合成蛋白质分子。逆转录也是从RNA的一个特定位置开始的，以RNA分子中的一条链为模板，在逆转录酶的作用下，以四种脱氧核苷酸为原料，合成方向仍是5'→3'，完成cDNA的合成。大
转录图谱的转录图谱的意义
在于它能有效地反应在正常或受控条件中表达的全基因的时空图。通过这张图可以了解某一基因在不同时间不同组织、不同水平的表达；也可以了解一种组织中不同时间、不同基因中不同水平的表达，还可以了解某一特定时间、不同组织中的不同基因不同水平的表达。人类基因组是一个国际合作项目：表征人类基因组，选择的模式生物的D
实用技巧二——单细胞转录组高级分析之细胞谱系分析
基于单细胞转录组数据的细胞轨迹分析常见形式有细胞变化轨迹分析和细胞谱系分析，在上一篇中，我们详细介绍了常规拟时间序列分析的相关内容（具体内容查看链接）。在这里，我们主要就细胞谱系分析进行介绍和解读。 细胞谱系分析，最简明的理解就是细胞领域的进化树，通常指的是某类祖源细胞，在特定条件下，有多
实用技巧二——单细胞转录组高级分析之细胞谱系分析
基于单细胞转录组数据的细胞轨迹分析常见形式有细胞变化轨迹分析和细胞谱系分析，在上一篇中，我们详细介绍了常规拟时间序列分析的相关内容（具体内容查看链接）。在这里，我们主要就细胞谱系分析进行介绍和解读。 细胞谱系分析，最简明的理解就是细胞领域的进化树，通常指的是某类祖源细胞，在特定条件下，有多
利用单细胞空间转录组揭示猕猴大脑皮层的细胞类型
阐明大脑皮层的细胞类型组成对于理解大脑结构和功能至关重要。中国科学院脑智卓越中心利用单细胞空间转录组揭示猕猴皮层的细胞类型。该研究成果于近日发表在《Cell》杂志上，题为：Single-cell spatial transcriptome reveals cell-type organizati
人类干细胞分化得到的胰岛细胞功能、代谢及转录组情况
移植来自人类多能干细胞的胰岛细胞是一种潜在的糖尿病治疗方法。现阶段尽管在诱导干细胞分化的胰岛细胞（SC-islets）取得了进展，但对其功能特性尚未进行深入研究。芬兰赫尔辛基大学研究团队对干细胞分化得到的胰岛细胞从功能、代谢和转录情况等多个方面进行了全面评估。该研究成果于近日发表在《Nature
做免疫荧光怎么看蛋白是在细胞核表达还是胞浆表达
做免疫荧光怎么看蛋白是在细胞核表达还是胞浆表达免疫组化和免疫荧光都是蛋白定位的检测（也就是确定蛋白是表达在细胞核/浆/膜）。免疫组织化学又称免疫细胞化学，是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项新技术。它把免疫反应的特异
关于转移基因表达和细胞集落形成的介绍
①瞬时表达：在转染后48～60h收获细胞，进行RNA或DNA杂交分析。新合成的蛋白质可以用放射免疫测定Western印迹，体内代谢标记－免疫沉淀或者细胞提取液中酶活性的测定等方法来进行分析，如果测定中有重复品或者转染细胞要经过多种不同条件或在一段时间历程以内取不同时间进行处理，就要避免皿与培养皿
检测肝癌细胞基因表达的实验方法！
检测肝癌细胞基因表达的实验方法！ 材料与方法 ⒈材料 人肝癌细胞系HepG2由中国医科大学科学实验中心保存。DMEM培养基和胎牛血清购自BioInd公司。细胞转染试剂Lipofectamine 3000和Trizol购自Invitrogen公司。BDNF AS质粒、BDN
外源基因在真核细胞中的表达系统
1. 真核生物表达的优越性和必要性① 真核生物具有转录后加工系统，可识别并删除基因中的内含子，剪切加工为成熟mRNA.②具备完善的翻译后加工系统，可进行糖基化、乙酰化等修饰，使蛋白形成正确的天然构型，因而真核生物表达系统产生的蛋白更接近天然状态，有利于其功能、生物活性的研究。③某些真核细胞可将基因表
婴儿鼻、肺细胞的RNA表达模式显著相似
根据罗切斯特大学医学中心(URMC)最新的研究发现婴儿鼻细胞与肺部细胞非常类似,这一发现可使呼吸道合胞体病毒(RSV)和其他婴儿肺部疾病的诊断更精确。 患呼吸道疾病的婴儿十分脆弱，因此试图获取肺部样本是不安全的，该研究发表在科学报告上，为多年来受到挑战的医生提供了一条潜在诊断途径。然而，鼻细
某些癌症的肿瘤干细胞表达CD326
Micromet公司是一家致力于研发新的ZL性抗体为基础的肿瘤、炎症、自身免疫病药品的生物技术公司。他们最近宣布，在《美国国家科学院新进展》杂志上发表的一项研究结果支持一些其它研究结果，即Micromet公司新药物MT201和MT110针对的靶分子CD326，可能是一个很好的根除所谓肿瘤干细胞的靶位
《Science》文章倾覆“细胞分裂”基因表达理论
在细胞分裂之前，染色体闲散地分布在细胞核内。细胞分裂期间，染色体则开始缩短变粗，通过压缩，此时的染色体比之前致密数千倍。因此，人们长期以来一直认为分裂期基因是“沉默的”，不会被转录成蛋白质或调控分子。但是，这就留下一个问题：细胞分裂结束后，基因们又是如何被重新激活的？ “我们解答这个问题的目标