CRISPR／Cas9蛋白切割DNA过程中的调控和校验机制
清华大学生命科学学院陈春来研究组在《Cell Reports》杂志发表了研究论文，题目为“The Conformational Dynamics of Cas9 Governing DNA Cleavage Are Revealed by Single-Molecule FRET”（利用单分子FRET揭示Cas9在DNA切割过程中的动态构象）。该论文展示了Cas9可以自发地在三种主要构象中转换，揭示了Cas9蛋白与PAM远端DNA/RNA双链相互作用可长程别构调控Cas9切割结构域的局部构象，这是Cas9切割靶标DNA之前的最后校验步骤。最后，该文提出了优化和设计高保真Cas9的新思路，即通过突变Cas9蛋白以影响这种长程别构调控机制，可提高Cas9的识别特异性。 CIRSPR/Cas9是一种可以由一条单链sgRNA（single guide RNA）指导的利用Cas9核酸酶对靶向DNA进行特异性识别和切割的技术。由于其可......阅读全文
CRISPR/Cas9蛋白切割DNA过程中的调控和校验机制
清华大学生命科学学院陈春来研究组在《Cell Reports》杂志发表了研究论文，题目为“The Conformational Dynamics of Cas9 Governing DNA Cleavage Are Revealed by Single-Molecule FRET”（利用单分子F
蛋白互作研究技术：「FRET」VS「Duolink PLA」
荧光能量共振转移 （FRET）检测活体中生物大分子纳米级距离和纳米级距离变化的有力工具，广泛应用于生物大分子相互作用分析、细胞生理研究、免疫分析等。原理当供体荧光分子的发射光谱与受体荧光分子的吸收光谱重叠，并且两个分子的距离在 10nm 范围以内时，就会发生一种非放射性的能量转移，即 FRET 现象
清华大学Nature子刊：利用Cas9实现基因克隆
来自清华大学、中科院微生物研究所的研究人员报告称，他们开发出了一种新技术，通过Cas9辅助靶向染色体片段（CATCH），可一步靶向克隆出大基因簇。这一重要的研究成果发布在9月1日的《自然通讯》（Nature Communications）杂志上。 清华大学的朱听（Ting Zhu）研究员、特
清华大学Nature子刊：将Cas9应用于分子克隆
在4月21日的《自然实验手册》（Nature Protocols）杂志上，清华大学的朱听（Ting Zhu）研究员与博士生姜文君（Wenjun Jiang）撰文，详细介绍了利用一种叫做Cas9辅助靶向染色体片段（CATCH）的方法，靶向分离及克隆100kb微生物基因组序列的优化实验方案。 朱听
FLIM-FRET应用浅析
FRET 技术（Fluorescence Resonance Energy Transfer）能够在突破传统光学分辨率极限的条件下研究蛋白互作、构象变化（
荧光共振能量转移（FRET）
一、活细胞研究遇到的问题：蛋白质或其他分子在活细胞内互相结合的时间和地点是了解它们功能的关键问题。要回答这一问题，需将蛋白质标上不同的荧光团。但是，光学显微镜的分辨率将蛋白质检测精度限制在大约0.2μm左右。要研究蛋白质成分的相互物理作用，需要高的分辨率。二、什么是FRET？FRET就是采用非放射方
清华大学PNAS发表蛋白转运新成果
ABC（ATP结合盒）转运蛋白是一个古老而庞大的蛋白家族，包括一百多种膜转运蛋白。这种转运蛋白广泛存在于细菌、植物和哺乳动物的各种细胞中，主要功能是利用水解ATP的能量来驱动物质跨膜运输。ABC转运蛋白参与了多种物质的转运，底物可以是离子、单糖、氨基酸、磷脂、肽、多糖和蛋白质。大部分ABC蛋白由
方案8 用 FRET 法分析体内蛋白质的相互作用实验
实验材料a-GFP 抗体编码 CFP 和 YFP 的 DNA酵母细胞株系试剂、试剂盒分子生物学试剂合成的完全液体培养基酵母操作试剂编码目标内源蛋白的 DNA 片段仪器、耗材滤光镜装置图像分析软件显微镜设备分子生物学和酵母操作用的标准设备实验步骤一、实验设计因为体内 FRET 实验的复杂性，要获得有效
多肽FRET荧光标记技术
荧光标记所依赖的化合物称为荧光物质。荧光物质是指具有共轭双键体系化学结构的化合物，受到紫外光或蓝紫光照射时，可激发成为激发态，当从激发态恢复基态时，发出荧光。荧光标记技术指利用荧光物质共价结合或物理吸附在所要研究分子的某个基团上，利用它的荧光特性来提供被研究对象的信息。荧光标记的无放射物污染，操作简
CRISPR/Cas9抗体—CRISPR/Cas9研究
能够方便而精确的对DNA和核苷酸序列进行编辑，是科研工作者们长期以来的梦想。CRISPR/Cas9系统的诞生和成熟标志这这一梦想逐渐变为现实。CRISPR/Cas9系统，作为第三代基因编辑技术，它的本质其实是细菌中一种对付诸如病毒等外来DNA的防御系统。此系统的工作原理是 成簇的、规律间隔的短回