盐析法(saltingoutmethod)纯化免疫球蛋白

(一) 原理 蛋白质在水溶液中的溶解度是由蛋白质周围亲水基团与水形成水化膜的程度,以及蛋白质分子带有电荷的情况决定的。当用中性盐加入蛋白质溶液,中性盐对水分子的亲和力大于蛋白质,于是蛋白质分子周围的水化膜层减弱乃至消失。同时,中性盐加入蛋白质溶液后,由于离子强度发生改变,蛋白质表面电荷大量被中和,更加导致蛋白溶解度降低,使蛋白质分子之间聚集而沉淀。 (二) 主要材料 1. 试剂: (1) 正常人混合血清;灭菌生理盐水。 (2) 饱和硫酸铵溶液的配制: 称 (NH4)2SO4(AR)400~425克,以50~80℃之蒸馏水500ml溶解,搅拌20分钟,趁热过滤。冷却后以浓氨水(15N NH4OH)调 PH至7.4。配制好的饱和硫酸铵,瓶底应有结晶析出。 (3) 萘氏试剂配制: 称HgI11.5克,KI8克,加蒸馏水至 50ml,搅拌溶解后,再加入20%NaOH 50ml。 ......阅读全文

免疫球蛋白纯化技术——盐析法纯化免疫球蛋白

在大多数情况下,免疫血清、杂交瘤细胞培养上清以及腹水中的抗体需经纯化后再用于各种免疫学检测中去。免疫球蛋白常用的纯化方法有盐析法、凝胶过滤、离子交换层析、亲和层析以及高效液相色谱等方法。(来源:医学基础免疫学实验指导,主编金伯泉李恩善,第1 版,北京:世界图书出版社,1990)实验方法原理蛋白质在水

盐析法(salting-out-method)纯化免疫球蛋白

    (一) 原理  蛋白质在水溶液中的溶解度是由蛋白质周围亲水基团与水形成水化膜的程度,以及蛋白质分子带有电荷的情况决定的。当用中性盐加入蛋白质溶液,中性盐对水分子的亲和力大于蛋白质,于是蛋白质分子周围的水化膜层减弱乃至消失。同时,中性盐加入蛋白质溶液后,由于离子强度发生改变,蛋白质表面电荷大量

血清免疫球蛋白(Immunoglobulin,IgG)的分离制备—盐析法

(一)原理IgG是免疫球蛋白(Immunoglobulin,简称IgG)的主要成分之一,分子量约为15万~16万,沉降生活费数约为7s。IgG是动物和人体血浆的重要成分之一。血浆蛋白质的成分多达70余种,要从血浆中分离出IgG,首先要进行尽可能除去其他蛋白质成分的粗分离程序,使IgG在样品中比例大为

盐析纸色谱法

盐析纸色谱法 salting-out paper chromatography 是用于蛋白质类分离的一种纸色谱法。在水流动相中加入盐类或有机溶剂如乙醇、丙酮等,使组分的溶解度减小,被纸吸附的作用加强,从而使各蛋白质组分的移动距离有较大差别,从而达到较好的分离。

抗体的纯化:盐析法

精制抗体的方法很多。一般采用综合技术,避免蛋白变性。如分离IgG时,多结合使用盐析法与离子交换法,以求纯化。提取IgM的方法也很多,如应用凝胶过滤与制备电泳法,或离子交换与凝胶过滤等。一、原理蛋白质在水溶液中的溶解度是由蛋白质周围亲水基团与水形成水化膜的程度,以及蛋白质分子带有电荷的情况决定的。当用

抗体的纯化:盐析法

精制抗体的方法很多。一般采用综合技术,避免蛋白变性。如分离IgG时,多结合使用盐析法与离子交换法,以求纯化。提取IgM的方法也很多,如应用凝胶过滤与制备电泳法,或离子交换与凝胶过滤等。 一、原理 蛋白质在水溶液中的溶解度是由蛋白质周围亲水基团与水形成水化膜的程度,以及蛋白质分子带有电荷的情况决定的。

盐析法的原理是什么

盐析法的原理是将硫酸铵、硫化钠或氯化钠等加入蛋白质溶液,使蛋白质表面电荷被中和以及水化膜被破坏,导致蛋白质在水溶液中的稳定性因素去除而沉淀。蛋白质在水溶液中的溶解度取决于蛋白质分子表面离子周围的水分子数目,亦即主要是由蛋白质分子外周亲水基团与水形成水化膜的程度以及蛋白质分子带有电荷的情况决定的。蛋白

生物样品分离技术盐析法

盐析法利用不同蛋白质在高浓度的盐溶液中溶解度不同程度的降低来沉淀除去蛋白质。在低盐浓度下,蛋白质溶解度随着盐浓度的升高而增加,称为盐溶作用。当盐浓度不断升高时,不同蛋白质的溶解度又以不同程度下降,并先后析出沉淀,称为盐析作用。这是由蛋白质分子内及分子间电荷的极性基团的静电引力造成的。由于水中加入了少

盐析法提取果胶的方法介绍

多价金属盐沉淀法,目前在生产上广泛采用。具体方法是:在果胶液中加入一定量的MgCl2、CuCl2或AlCl3然后用氨等调节pH,使之形成碱式金属盐,此碱式金属盐与果胶形成络合物沉淀出来,然后再经过脱盐漂洗和干燥得到果胶成品。具体流程是:橘皮残渣-复水-灭酶-漂洗-沥干-加酸萃取-过滤-加盐沉析-抽滤

关于果胶的盐析法的介绍

  多价金属盐沉淀法,目前在生产上广泛采用。具体方法是:在果胶液中加入一定量的MgCl2、CuCl2或AlCl3然后用氨等调节pH,使之形成碱式金属盐,此碱式金属盐与果胶形成络合物沉淀出来,然后再经过脱盐漂洗和干燥得到果胶成品。具体流程是:橘皮残渣-复水-灭酶-漂洗-沥干-加酸萃取-过滤-加盐沉析-

血清IgG的分离制备—盐析法

原理IgG是免疫球蛋白(Immunoglobulin,简称IgG)的主要成分之一,分子量约为15万~16万,沉降生活费数约为7s。IgG是动物和人体血浆的重要成分之一。血浆蛋白质的成分多达70余种,要从血浆中分离出IgG,首先要进行尽可能除去其他蛋白质成分的粗分离程序,使IgG在样品中比例大为增高,

蛋白质盐析法的原理

蛋白质颗粒表面带有很多极性基团,如-NH+、-COO-、-CONH2、-OH、-SH等,和水有高度亲和性,当蛋白质与水相遇时,蛋白质吸水,在蛋白质颗粒外面形成一层密度较厚的水膜(水化层)。水膜的存在使蛋白质颗粒之间不会碰撞,因此蛋白质在水溶液中比较稳定而不易沉淀,是一种比较稳定的亲水胶体。蛋白质能形

蛋白质沉淀方法盐析法

  在蛋白质溶液中加入大量的中性盐以破坏蛋白质的胶体稳定性而使其析出,这种方法称为盐析。常用的中性盐有硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等。各种蛋白质盐析时所需的盐浓度及pH不同,故可用于对混和蛋白质组分的分离。例如用半饱和的硫酸铵来沉淀出血清中的球蛋白,饱和硫酸铵可以使血清中的白蛋白、球蛋白都沉淀出来,盐析沉

食品样品预处理传统方法盐析法

向溶液中加入某种无机盐,使溶质在原溶剂中的溶解度大大降低而从溶液中沉淀析出。这种方法叫作盐析。如在蛋白质溶液中,加入大量的盐类,特别是加入重金属盐,使蛋白质从溶液中沉淀出来。在进行盐析工作时,应注意溶液中所要加入的物质的选择,它不会破坏溶液中所要析出的物质,否则达不到盐析提取的目的。

蛋白质盐析分离法介绍

摘要 : 盐析的发生是由于盐浓度增大到一定数值时使水活性降低,导致蛋白质分子表面电荷逐渐被中和,水化膜逐渐被破坏,引起蛋白质分子之间相互聚集并从溶液中析出,最后经离心机分离后获得沉淀物和上清液。一、蛋白质盐析分离的原理:蛋白质在稀盐溶液中溶解度会随着盐浓度的增大而上升(盐溶),当盐浓度增大到一定数值

蛋白质的盐析分离法

一、蛋白质盐析分离的原理:蛋白质在稀盐溶液中溶解度会随着盐浓度的增大而上升(盐溶),当盐浓度增大到一定数值时,其溶解度又逐渐下降直至蛋白质析出。盐析的发生是由于盐浓度增大到一定数值时使水活性降低,导致蛋白质分子表面电荷逐渐被中和,水化膜逐渐被破坏,引起蛋白质分子之间相互聚集并从溶液中析出,最后经离心

蛋白质的盐析分离法

一、蛋白质盐析分离的原理:蛋白质在稀盐溶液中溶解度会随着盐浓度的增大而上升(盐溶),当盐浓度增大到一定数值时,其溶解度又逐渐下降直至蛋白质析出。盐析的发生是由于盐浓度增大到一定数值时使水活性降低,导致蛋白质分子表面电荷逐渐被中和,水化膜逐渐被破坏,引起蛋白质分子之间相互聚集并从溶液中析出,zui后经

盐析法沉淀蛋白质的原理

1 中性盐沉淀(盐析法) 在溶液中加入中性盐使生物大分子沉淀析出的过程称为“盐析”。除了蛋白质和酶以外,多肽、多糖和核酸等都可以用盐析法进行沉淀分离。 盐析法应用最广的还是在蛋白质领域,已有八十多年的历史,其突出的优点是: ①成本低,不需要特别昂贵的设备。 ②操作简单、安全。 ③对许多生物

盐析法沉淀蛋白质的原理

盐析法沉淀蛋白质的原理是:降低蛋白质的电常数,调节蛋白质溶液的等电点,与蛋白结合形成不溶性盐,使蛋白质溶液呈电中性,破坏了水化膜,从而会使得蛋白质凝聚,最终从溶液中析出。蛋白质在水溶液中的溶解度是由蛋白质周围亲水基团与水形成水化膜的程度,以及蛋白质分子带有电荷的情况决定的。当用中性盐加入蛋白质溶液,

冻干机冻干蛋白质及盐析法

在冷冻干燥过程中 ,加热温度高、升温速率快将使干燥时间缩短 ,但同时过高的加热温度和过快的升温速率将导致蛋白质失去活性。以玻璃态存在的保护剂呈现出复杂的特性 ,当低于解链温度时 ,玻璃态物质具有粘度大和易脆的特点。当温度超过解链温度 ,玻璃态物质变软 ,随着干燥的进行 ,不断变型以至形成坍塌而失去活

盐析法得到的蛋白质如何脱盐

常用的是凝胶过滤层析脱盐,利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用,根据被分离物质的分子大小不同来进行分离。蛋白质溶液中盐分子和蛋白质分子大小相差较大,盐分子较小,会随着层析流动相进入孔径较小的固定相,在层析中迁移速率小,而蛋白质分子尺寸较大,不能随流动相进入固定相,迁移速率大,首先从层析术中流出,实现脱

盐析法得到的蛋白质如何脱盐

常用的是凝胶过滤层析脱盐,利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用,根据被分离物质的分子大小不同来进行分离。蛋白质溶液中盐分子和蛋白质分子大小相差较大,盐分子较小,会随着层析流动相进入孔径较小的固定相,在层析中迁移速率小,而蛋白质分子尺寸较大,不能随流动相进入固定相,迁移速率大,首先从层析术中流出,实现脱

盐析法得到的蛋白质如何脱盐

常用的是凝胶过滤层析脱盐,利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用,根据被分离物质的分子大小不同来进行分离。蛋白质溶液中盐分子和蛋白质分子大小相差较大,盐分子较小,会随着层析流动相进入孔径较小的固定相,在层析中迁移速率小,而蛋白质分子尺寸较大,不能随流动相进入固定相,迁移速率大,首先从层析术中流出,实现脱

盐析法是粗分离IgG的重要方法之一

盐析法是粗分离IgG的重要方法原理IgG是免疫球蛋白(Immunoglobulin,简称IgG)的主要成分,分子量约为15万~16万,沉降生活费数约为7s。IgG是动物和人体血浆的重要成分。血浆蛋白质的成分多达70余种,要从血浆中分离出IgG,首先要进行尽可能除去其他蛋白质成分的粗分离程序,使IgG

连续提取免疫球蛋白法-(immunoglobulin)

(一)试剂及配制1.饱和硫酸铵液2.各种磷酸盐缓冲液⑴ 0.2mol/L原液⑶ 0.005Mol/L pH8.0 PB 液取0.10Mol/L pH8.0 PB液100ml,加H2O至2 000ml⑷0.025 Mol/L pH8.0 PB 液取0.10Mol/L pH8.0 PB液500ml,加水

盐析的原理

破坏了蛋白质在水中稳定存在的二个因素,从而使蛋白质发生沉淀 。 1、破坏了水化层 在高浓度的中性盐溶液中,由于盐离子亲水性比蛋白质强,与蛋白质胶粒争夺与水结合,破坏了蛋白质的水化层。  在高浓度的中性盐溶液中,由于蛋白质和盐离子对溶液中水分子都有吸引力,产生与水化合现象,但它们之间有竞争作用,当大量

盐析是什么

盐析是指在蛋白质水溶液中加入中性盐,随着盐浓度增大而使蛋白质沉淀出来的现象。中性盐是强电解质,溶解度又大,在蛋白质溶液中,一方面与蛋白质争夺水分子,破坏蛋白质胶体颗粒表面的水膜;另一方面又大量中和蛋白质颗粒上的电荷,从而使水中蛋白质颗粒积聚而沉淀析出。

盐析的定义

向某些蛋白质溶液中加入某些无机盐溶液后,可以降低蛋白质的溶解度,使蛋白质凝聚而从溶液中析出,这种作用叫作盐析,是物理变化,可复原。向某些蛋白质溶液中加入某些重金属盐,可以使蛋白质性质发生改变而凝聚,进而从溶液中析出,这种作用叫作变性,性质改变,是化学反应,无法复原。把动物脂肪或植物油与氢氧化钠按一定

盐析的定义

向某些蛋白质溶液中加入某些无机盐溶液后,可以降低蛋白质的溶解度,使蛋白质凝聚而从溶液中析出,这种作用叫作盐析,是物理变化,可复原。向某些蛋白质溶液中加入某些重金属盐,可以使蛋白质性质发生改变而凝聚,进而从溶液中析出,这种作用叫作变性,性质改变,是化学反应,无法复原。把动物脂肪或植物油与氢氧化钠按一定

盐析的定义

  向某些蛋白质溶液中加入某些无机盐溶液后,可以降低蛋白质的溶解度,使蛋白质凝聚而从溶液中析出,这种作用叫作盐析,是物理变化,可复原。向某些蛋白质溶液中加入某些重金属盐,可以使蛋白质性质发生改变而凝聚,进而从溶液中析出,这种作用叫作变性,性质改变,是化学反应,无法复原。  把动物脂肪或植物油与氢氧化