血清IgG的分离制备—盐析法
原理IgG是免疫球蛋白(Immunoglobulin,简称IgG)的主要成分之一,分子量约为15万~16万,沉降生活费数约为7s。IgG是动物和人体血浆的重要成分之一。血浆蛋白质的成分多达70余种,要从血浆中分离出IgG,首先要进行尽可能除去其他蛋白质成分的粗分离程序,使IgG在样品中比例大为增高,然后再纯化而获得IgG。盐析法是粗分离蛋白质的重要方法之一。许多蛋白质在纯水或低盐溶液中溶解度较低,若稍加一些无机盐则溶解度增加,这种现象称为“盐溶”(Salting in)。而当盐浓度继续增加到某一浓度时,蛋白质又变得不深而自动析出,这种现象称为“盐析‘(Salting out)。这些现象的原理大致是由于蛋白质是亲水胶体,带有羧基解离的负电荷或氨基解离的正电荷,其极性基团使分子间相互排斥,同时与水分子形成水膜,这些因素保证蛋白质形成溶于水的溶胶状态。当加入少量盐时,增多了蛋白质分子上的极性基团,因而增大了蛋白质在水中溶解度,......阅读全文
血清IgG的分离制备—盐析法
原理IgG是免疫球蛋白(Immunoglobulin,简称IgG)的主要成分之一,分子量约为15万~16万,沉降生活费数约为7s。IgG是动物和人体血浆的重要成分之一。血浆蛋白质的成分多达70余种,要从血浆中分离出IgG,首先要进行尽可能除去其他蛋白质成分的粗分离程序,使IgG在样品中比例大为增高,
血清免疫球蛋白(Immunoglobulin,IgG)的分离制备—盐析法
(一)原理IgG是免疫球蛋白(Immunoglobulin,简称IgG)的主要成分之一,分子量约为15万~16万,沉降生活费数约为7s。IgG是动物和人体血浆的重要成分之一。血浆蛋白质的成分多达70余种,要从血浆中分离出IgG,首先要进行尽可能除去其他蛋白质成分的粗分离程序,使IgG在样品中比例大为
盐析法是粗分离IgG的重要方法之一
盐析法是粗分离IgG的重要方法原理IgG是免疫球蛋白(Immunoglobulin,简称IgG)的主要成分,分子量约为15万~16万,沉降生活费数约为7s。IgG是动物和人体血浆的重要成分。血浆蛋白质的成分多达70余种,要从血浆中分离出IgG,首先要进行尽可能除去其他蛋白质成分的粗分离程序,使IgG
牛血清igg含量
每个批次的牛血清白蛋白的IgG含量不高于0.05 mg/g。igg指IgG抗体。IgG抗体是血清中主要的抗体成分,每个批次的牛血清白蛋白的IgG含量不高于0.05 mg/g,病原体特异性IgG抗体是人体的免疫细胞针对病原体所产生的一种蛋白质。
血清白蛋白和球蛋白的分析测定-盐析法
【目的与原理]】掌握血清白蛋白和球蛋白测定的原理和方法,并用盐析法测定水产动物血清中白蛋白和球蛋白的含量。血清中含有多种不同成分的蛋白质,主要为白蛋白和球蛋白。用盐析法沉淀血清中球蛋白,用双缩脲法测定上清液中白蛋白,同时测定血清总蛋白。血清球蛋白的量从两者的差值求得。【[试剂与器材】试剂: 1、
辛酸硫酸铵法从人血清中纯化IgG
一、实验目的1、初步掌握从血清中提取纯化IgG的方法步骤。2、了解辛酸-硫酸铵法纯化IgG 的原理。二、实验原理辛酸-硫酸铵法分两步进行。第一步用辛酸沉淀杂蛋白,辛酸为短链脂肪酸,在酸性条件下可沉淀血清或腹水中的白蛋白或其他非Ig蛋白质;第二步利用硫酸铵盐析将Ig沉淀下来,操作步骤如图3-10所示。
血清IgG、IgA、IgM测定
IgG有四个亚型,在血清中含量最高,以IgG1含量最多。IgG是血液和细胞外液中的主要抗体,也是机体再次免疫应答的主要抗体,大多数抗感染抗体与自身抗体都为IgG类。 IgA分为血清型和分泌型,血清型以单体存在,分泌型由J链连接的二聚体,参与黏膜局部免疫,存在于胃肠道和支气管分泌液、初乳、唾液和
盐析法(salting-out-method)分析测定血清白蛋白和球蛋白
[目的与原理]掌握血清白蛋白和球蛋白测定的原理和方法,并用盐析法测定水产动物血清中白蛋白和球蛋白的含量。血清中含有多种不同成分的蛋白质,主要为白蛋白和球蛋白。用盐析法沉淀血清中球蛋白,用双缩脲法测定上清液中白蛋白,同时测定血清总蛋白。血清球蛋白的量从两者的差值求得。[试剂与器材]试剂:1、球蛋白沉淀
盐析纸色谱法
盐析纸色谱法 salting-out paper chromatography 是用于蛋白质类分离的一种纸色谱法。在水流动相中加入盐类或有机溶剂如乙醇、丙酮等,使组分的溶解度减小,被纸吸附的作用加强,从而使各蛋白质组分的移动距离有较大差别,从而达到较好的分离。
抗体的纯化:盐析法
精制抗体的方法很多。一般采用综合技术,避免蛋白变性。如分离IgG时,多结合使用盐析法与离子交换法,以求纯化。提取IgM的方法也很多,如应用凝胶过滤与制备电泳法,或离子交换与凝胶过滤等。一、原理蛋白质在水溶液中的溶解度是由蛋白质周围亲水基团与水形成水化膜的程度,以及蛋白质分子带有电荷的情况决定的。当用
抗体的纯化:盐析法
精制抗体的方法很多。一般采用综合技术,避免蛋白变性。如分离IgG时,多结合使用盐析法与离子交换法,以求纯化。提取IgM的方法也很多,如应用凝胶过滤与制备电泳法,或离子交换与凝胶过滤等。 一、原理 蛋白质在水溶液中的溶解度是由蛋白质周围亲水基团与水形成水化膜的程度,以及蛋白质分子带有电荷的情况决定的。
特异性IgG抗体技术都有什么?
1.盐析法 多采用硫酸铵盐析法或硫酸钠盐析法。 2.凝胶过滤法 蛋白质分子量不同,通过凝胶介质时的洗脱速度不同。血清蛋白的分级分离常用该法。按分子大小可分为3组:第1组:IgM和一些脂蛋白;第2组:IgG和较少量的IgA、IgD、IgE等;第3组:白蛋白、血清黏蛋白、转铁蛋白等。该法过滤条
生物样品分离技术盐析法
盐析法利用不同蛋白质在高浓度的盐溶液中溶解度不同程度的降低来沉淀除去蛋白质。在低盐浓度下,蛋白质溶解度随着盐浓度的升高而增加,称为盐溶作用。当盐浓度不断升高时,不同蛋白质的溶解度又以不同程度下降,并先后析出沉淀,称为盐析作用。这是由蛋白质分子内及分子间电荷的极性基团的静电引力造成的。由于水中加入了少
盐析法的原理是什么
盐析法的原理是将硫酸铵、硫化钠或氯化钠等加入蛋白质溶液,使蛋白质表面电荷被中和以及水化膜被破坏,导致蛋白质在水溶液中的稳定性因素去除而沉淀。蛋白质在水溶液中的溶解度取决于蛋白质分子表面离子周围的水分子数目,亦即主要是由蛋白质分子外周亲水基团与水形成水化膜的程度以及蛋白质分子带有电荷的情况决定的。蛋白
IgG4血清学检测
IgG4相关疾病是近年来认识的一种新型自身免疫病,以血清IgG4水平显著增高、受累组织纤维化、血栓闭塞性脉管炎、IgG4 阳性浆细胞浸润为主要特点,可累及全身多个器官或组织。该病临床谱广泛,包括米库利兹病、自身免疫性胰腺炎、腹膜后纤维化、自身免疫性胆管炎、间质性肺炎、眶周炎性假瘤等。IgG4相关疾病
血清检查IGG和IGM的区别
IgG抗体是抗体中分子量最小的一种,可通过胎盘输给胎儿,保护了婴儿最初六个月内免受感染。该抗体产生晚,维持时间长,消失慢,浓度高。血中检测到可作为远期感染指标。IgM抗体是抗体中分子量最大的一种,不能通过胎盘输给胎儿。抗体产生最早,一经感染,快速产生,在感染初期抗感染起作用。但维持时间短,消失快。当
单向免疫扩散实验——人群血清IgG-正常值测定示例法
单项免疫扩散实验可以用于:检测正常人群或患者血清中 IgG、IgA 及IgM 的水平。实验方法原理在含有特异抗体的琼脂板中打孔,并在孔中加入定量的抗原,当抗原向周围扩散后与琼脂中抗体相结合,即形成白色沉淀环,其直径或面积与抗原浓度呈正相关。同时用标准抗原或国际参考蛋白制成标准曲线,即可用以定量检测未
IgG抗体的粗提法提取球蛋白的介绍
大多用硫酸铵盐析法或硫酸钠盐析法。硫酸铵盐析须经过多次沉淀,第一次用40%饱和度,第二次用35%饱和度,第三次用33%饱和度,经三次提取后的γ球蛋白基本是IgG成分。硫酸钠法更简便,用20%即可将γ球蛋白沉淀出来。经盐析后的γ球蛋白虽大多属于IgG,但还有5%其他区带蛋白,如γ区的杂蛋白。又因I
IgG抗体的粗提法提取球蛋白
大多用硫酸铵盐析法或硫酸钠盐析法。硫酸铵盐析须经过多次沉淀,第一次用40%饱和度,第二次用35%饱和度,第三次用33%饱和度,经三次提取后的γ球蛋白基本是IgG成分。硫酸钠法更简便,用20%即可将γ球蛋白沉淀出来。经盐析后的γ球蛋白虽大多属于IgG,但还有5%其他区带蛋白,如γ区的杂蛋白。又因I
DEAE—离子交换剂纯化血清IgG
(一)原理离子交换是指液相中的离子与固定相上可解离基团的可逆交换反应。利用这个反应先将要分离的混合物在一定pH的溶液中解离,而后流经固定相,使之与固定相上的可解离基团进行离子交换,吸附于固定相上,凡不能进行交换吸附的成分,则流出层析柱外。再根据交换吸附于固定相上的各组分解离度的差别,运用不同的pH值
血清免疫球蛋白G(IgG)参数
免疫比浊法、单向免疫扩散法 脐带7.6~17g/L(760~1700mg/dl)。 新生儿7~14.8g/L(700~1480mg/dl)。 0.5~6个月3~10g/L(300~1000mg/dl)。 6个月~2岁5~12g/L(500~1200mg/dl)。 2~6岁5~13g/L
DEAE—离子交换剂纯化血清IgG
实验概要本文介绍了DEAE—离子交换剂纯化血清IgG的原理及操作步骤等。实验原理离子交换是指液相中的离子与固定相上可解离基团的可逆交换反应。利用这个反应先将要分离的混合物在一定pH的溶液中解离,而后流经固定相,使之与固定相上的可解离基团进行离子交换,吸附于固定相上,凡不能进行交换吸附的成分,则流出层
蛋白质沉淀方法盐析法
在蛋白质溶液中加入大量的中性盐以破坏蛋白质的胶体稳定性而使其析出,这种方法称为盐析。常用的中性盐有硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等。各种蛋白质盐析时所需的盐浓度及pH不同,故可用于对混和蛋白质组分的分离。例如用半饱和的硫酸铵来沉淀出血清中的球蛋白,饱和硫酸铵可以使血清中的白蛋白、球蛋白都沉淀出来,盐析沉
关于果胶的盐析法的介绍
多价金属盐沉淀法,目前在生产上广泛采用。具体方法是:在果胶液中加入一定量的MgCl2、CuCl2或AlCl3然后用氨等调节pH,使之形成碱式金属盐,此碱式金属盐与果胶形成络合物沉淀出来,然后再经过脱盐漂洗和干燥得到果胶成品。具体流程是:橘皮残渣-复水-灭酶-漂洗-沥干-加酸萃取-过滤-加盐沉析-
盐析法提取果胶的方法介绍
多价金属盐沉淀法,目前在生产上广泛采用。具体方法是:在果胶液中加入一定量的MgCl2、CuCl2或AlCl3然后用氨等调节pH,使之形成碱式金属盐,此碱式金属盐与果胶形成络合物沉淀出来,然后再经过脱盐漂洗和干燥得到果胶成品。具体流程是:橘皮残渣-复水-灭酶-漂洗-沥干-加酸萃取-过滤-加盐沉析-抽滤
蛋白质盐析法的原理
蛋白质颗粒表面带有很多极性基团,如-NH+、-COO-、-CONH2、-OH、-SH等,和水有高度亲和性,当蛋白质与水相遇时,蛋白质吸水,在蛋白质颗粒外面形成一层密度较厚的水膜(水化层)。水膜的存在使蛋白质颗粒之间不会碰撞,因此蛋白质在水溶液中比较稳定而不易沉淀,是一种比较稳定的亲水胶体。蛋白质能形
辛酸-硫酸铵法(bitterammonium-sulfate-law)从人血清中纯化IgG
一、实验目的初步掌握从血清中提取纯化IgG的方法步骤。2. 了解辛酸-硫酸铵法纯化IgG 的原理。二、实验原理辛酸—硫酸铵法分两步进行。第一步用辛酸沉淀杂蛋白,辛酸为短链脂肪酸,在酸性条件下可沉淀血清或腹水中的白蛋白或其他非Ig 蛋白质;第二步利用硫酸铵盐析将Ig 沉淀下来,操作步骤如图3-10所示
大鼠IgG定量EIA检测法
大鼠IgG定量EIA试剂盒使用说明 原理本实验采用双抗体夹心 ELISA法。用抗大鼠IgG单抗包被于酶标板上,标准品和样品中的 IgG与单抗结合,加入酶标抗体,形成免疫复合物连接在板上,加入酶底物TMB,出现蓝色,加终止液硫酸,颜色变黄,在450nm处测OD值,IgG浓度与OD值成正比,可通过绘制标
关于抗原抗体反应的抗血清的纯化与保存
(1)采血:加强免疫的动物2—3次后,可通过耳静脉或眼球(小鼠)采血,进行抗血清效价测定。当效价达到理想的高度后,可以采血。采血方式可以从心脏直接取血,也可通过动脉放血。待血液凝固后用针筒或吸管吸取血清。 (2)抗血清的纯化与保存:除抗体外血清中含有多种其他蛋白成分。为了避免这些蛋白质干扰抗体
抗血清的纯化与保存
(1)采血:加强免疫的动物2—3次后,可通过耳静脉或眼球(小鼠)采血,进行抗血清效价测定。当效价达到理想的高度后,可以采血。采血方式可以从心脏直接取血,也可通过动脉放血。待血液凝固后用针筒或吸管吸取血清。 (2)抗血清的纯化与保存:除抗体外血清中含有多种其他蛋白成分。为了避免这些蛋白质干扰抗体