上海生科院揭示玉米种子储存蛋白表达调控的分子机理
4月21日，The Plant Cell 杂志在线发表了中国科学院上海生命科学研究院植物生理生态研究所巫永睿研究组题为Transcriptional Regulation of Zein Gene Expression in Maize through the Additive and Synergistic Action of opaque2, Prolamine-Box Binding Factor, and O2 Heterodimerizing Proteins 的研究论文。该研究论文报道了玉米籽粒中表达量最高的种子储存蛋白——醇溶蛋白表达调控的最新研究进展。 玉米作为全世界第一大作物，其种子含有约10%的蛋白质，其中60%以上为醇溶蛋白，通称为zein。虽然Zein的高水平表达对籽粒胚乳硬度起关键性作用，但是它们几乎不含必须氨基酸——赖氨酸和色氨酸。因此，普通玉米的营养品质很差。Zein作为一类只在玉米胚乳灌浆期......阅读全文
上海生科院揭示玉米种子储存蛋白表达调控的分子机理
4月21日，The Plant Cell 杂志在线发表了中国科学院上海生命科学研究院植物生理生态研究所巫永睿研究组题为Transcriptional Regulation of Zein Gene Expression in Maize through the Additive and Syne
谷丙转氨酶分子机理
分子机理：在肝细胞中，GPT把丙氨酸的氨基转移给a-酮戊二酸，把酮戊二酸的羰基转移给丙氨酸，这样丙氨酸成为丙酮酸，a--酮戊二酸成为谷氨酸。
科学家发现细菌基因表达常规机理
美国纽约大学兰贡（Langone）医学中心的科学家发现和阐述了细菌体内控制转录延伸（transcription elongation）的常规机理。在4月23日出版的《科学》杂志上，他们表示，该机理依赖游离核糖体和核糖核酸聚合酶（RNAP）之间的协同作用，因为这种协同作用使得转录率对应于转
科学家发现细菌基因表达常规机理
美国纽约大学兰贡（Langone）医学中心的科学家发现和阐述了细菌体内控制转录延伸（transcription elongation）的常规机理。在4月23日出版的《科学》杂志上，他们表示，该机理依赖游离核糖体和核糖核酸聚合酶（RNAP）之间的协同作用，因为这种协同作用使得转录率对应于
谷丙转氨酶的分子机理
分子机理：在肝细胞中，GPT把丙氨酸的氨基转移给a-酮戊二酸，把酮戊二酸的羰基转移给丙氨酸，这样丙氨酸成为丙酮酸，a--酮戊二酸成为谷氨酸。
分子克隆蛋白表达实验指南（十二）
– Note: The yield of fusion protein can be estimated by measuring the absorbance at 280 nm. The GST affinity tag can be approximated by 1 A280 Å 0.5
分子克隆蛋白表达实验指南（十八）
15％胶 水1.11.872.33.43.854.65.76.99.211.5 30％聚丙烯酰胺混合液2.54.2557.58.751012.5152025 1.5M Tris(pH=8.8)1.32.212.53.84.5556.37.
分子克隆蛋白表达实验指南（三）
若有非特异性条带，可进行Touchdown PCR，提高引物的特异性。 PCR反应条件： 1 94C 5min 2 94C 45s 3 65C 45s 退火温度视
分子克隆蛋白表达实验指南（二）
取DEPC水时切记带上手套 Genequant使用方法： 开机－set-up－enter(只更改DNA/RNA，看光波是否为320nm)－set-ref(此时插入空白对照)－样品 1．使用前将比色皿中水吸出，用1ml蒸馏水重新洗涤再将比色皿中的水吸尽（先用1ml枪吸，后用100ul枪吸）
分子克隆蛋白表达实验指南（七）
目的基因表达 14．快速诱导表达 快速诱导目的是为检测该重组质粒在BL21中是否能被诱导表达重组蛋白，并确定在不同IPTG浓度蛋白诱导效率的差异。 5． 挑单克隆菌落于7ml含有相应抗生素LB培养液的50ml培养管中，37C振荡培养过夜（8-16h）。 6． 37C，1mM
分子克隆蛋白表达实验指南（十）
13．连接产物转化DH5α（预开42C水浴） 与T载体转化相同，先转化DH5α，筛选及扩增目的重组质粒 转化DH5α后挑6～8个菌落验证，验证项目： 1． 目的基因引物PCR验证 2． 表达载体引物PCR验证 3． Step2中PCR产物胶回收后，以胶回收为模板、
分子克隆蛋白表达实验指南（一）
目的基因克隆包括保存用全长基因(gene for saving, GS)和表达用全长基因(gene for expression, GE)两部分。 这两部分所克隆的基因都是全长片段，但克隆的策略及目的不同。直接用精确克隆(及引物从基因CDS两端开始)很难找到高效价的引物，且cDNA中目的基
分子克隆蛋白表达实验指南（九）
SDS-PAGE胶样品排列： MUIBS1S1P1BS2S2P2UIT1T2T3T4 M：marker；上样10ul UI：未诱导对照；10ul BS：超声前样品；10ul S：超声后上清； 10ul P：超声后沉淀； 10ul T：诱导后每隔1h样品，1
分子克隆蛋白表达实验指南（十七）
Buffers for His purification in denatured conditions: 配制时加终体积50％的水，之后定容至所需体积。先配pH 8.0的buffer(调pH需要较多NaOH)，再统一配bufferC，D，E，分别调pH Buffer B (200ml
分子克隆蛋白表达实验指南（四）
7. PCR产物与TA载体连接 pGEM-T vector is T-tailed at the insert site. To improve the ligation efficiency, it is recommended PCR product be A-tailed. +A s
分子克隆蛋白表达实验指南（六）
10. 测序 突变后氨基酸序列没有变化仍可用于表达。测序报告中blast时若有‘－’符号，则人工对照测序图谱。 测序验证后没有突变或者同义突变的重组质粒必须小抽，50ul，conc300ug/ml备份。测序文件应妥善保存，蛋白表达完成后一并提交存档。 获得GS后，即可构建含GE的重组T载体，用
分子克隆蛋白表达实验指南（五）
8. TA质粒转化菌落的验证 与表达载体的验证不同，转化TA质粒时不用双酶切验证。只需用目的基因引物和TA载体引物PCR验证即可。TA载体引物PCR片段比插入片段大约长150bp。 目的基因退火温度与之前胶回收时温度相同，TA退火温度60C即可，但可在55～70之间变动，不会影响结果。 挑取至
分子克隆蛋白表达实验指南（十六）
Amp(50mg/ml) 溶解1g Amp于足量的水中，最后定容至20ml。分装成小份于-20℃贮存。常以20～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基，1:1000比例稀释 Kan(50mg/ml) 溶解1g Kan于足量的水中，最后定容至20ml
分子克隆蛋白表达实验指南（十四）
RbCl制备感受态细胞 需准备的灭菌器具和培养液： SOB，Buffer 1，Buffer 2，3×200ml广口瓶，1.5ml EP管，1×500ml离心瓶（按200ml摇菌量计算），2×50ml离心管，2×移液管（用于加Buffer 1），液氮，冰 离心管，EP管，移液管使用前均需要放
分子克隆蛋白表达实验指南（十五）
LB固体培养基 Tryptone 1g Yeast Extract 0.5g NaCl 1g Agar 1.5g 加蒸馏水至总体
分子克隆蛋白表达实验指南（十一）
SDS-PAGE胶样品排列： MarkerUII 37CUI’I’ Marker：低分子量蛋白marker，上样10ul UI：未诱导菌液，上样10ul。任取37C和20C中一个 I：诱导后对照，上样10ul UI’, I’代表G
分子克隆蛋白表达实验指南（八）
15. 小量蛋白诱导表达 该步骤的目的是检测蛋白是否在上清存在表达。低温时蛋白易于表达于上清，因此小量蛋白诱导表达以20或30C为培养温度。 1. 挑一单克隆的菌落于5ml含有相应的抗生素的LB培养液中，37℃振荡培养过夜（8-16h）。 2. 过夜培养液加入三瓶50ml含
分子克隆蛋白表达实验指南（十九）
Desired pH Volume of 1M K2HPO4 (mL)Volume of 1M KH2PO4 (mL) 5.8 8.591.5 6.0 13.286.8 6.2 19.280.8
分子克隆蛋白表达实验指南（十三）
7． 电泳结束后，按比例从胶上割下相应约1cm条带（当按比例的条带割下后可相应的向两边再割一点，但是电透析时中间和两边的胶必须分开透析），用镊子或尺子将胶碾碎成2mm见方的小块。 8． 将碎块小心加入电透析tube中，200V，120～150min。 9． 移出放电透析tube的架子，
JCB：胚胎损伤修复的分子机理
延时摄影就好像一部科幻电影一样，可以帮助揭示果蝇胚胎的伤口如何自我愈合，但是观察到的图像并不是真的，因此研究者就提出问题，是否这种方式可以改善人类机体的伤口愈合呢？近日，一篇发表在国际杂志Journal of Cell Biology上的研究论文中，来自多伦多大学等处的科学家们通过研究揭开了细胞
基因组印迹的分子机理
从目前研究结果来看，基因印迹的发生主要有以下两种机理： 一方面，研究发现，基因组印迹的分子机理与印迹基因DNA中胞嘧啶甲基化尤其是CpG岛的甲基化密切相关，胞嘧啶甲基化是DNA的一种共价修饰。另外还有特殊的染色质结构和反义转录产物等可能都是基因印迹产生和维持的重要因素。 基因印迹中，卵子和精
双分子消除反应的反应机理
以卤代烷烃为例卤代烷在发生E2反应时，碱首先进攻β-氢，并逐渐与之结合，β-碳原子与氢原子之间的共价键部分断裂；与此同时，中心碳原子与卤素之间的共价键也部分断裂，卤素X带着一对电子逐渐离开中心碳原子。在此期间电子云也重新分配，α-碳原子与β-碳原子间的π键已部分形成，经过如下所示过渡态后，反应继续进
单分子消除反应的反应机理
第一步是底物分子的离去基团离去，生成中间体碳正离子，这一步较慢；第二步是溶剂分子夺取碳正离子β-氢，生成烯烃。由于反应的速率控制步骤只与一个底物分子有关，是单分子过程，在反应动力学上是一级反应。 例子：单分子消除反应
DNA修复机制的分子机理
当DNA双链发生断裂时，细胞启动DNA破坏反应（DNA-damage response, DDR）。DDR的一个重要方面是被破坏的DNA位点的信号的反馈和修复因子的聚集。这项研究表明，在高等的真核生物中，DDR机制中向双链破坏位点不断的积聚作用依赖于组蛋白变体（histone varia
籼稻粳稻杂种不育分子机理阐明
一般来说，水稻品种间亲缘关系越远，杂交优势越明显。据预测，如果籼稻和粳稻亚种间能育成超级杂交稻，可以比现有杂交水稻增产15%以上，因此，如何利用亚种间的超强优势一直受到育种家的关注。 7月26日，中国工程院院士万建民领衔、中国农业科学院和南京农业大学的科研团队联合攻关的一项研究，系统鉴定了引起