哪些原因会导致液相色谱峰分离度差,峰分不开?

在液相色谱分析中,我们经常会遇到两个化合物无法得到基线分离或分离度差。液相色谱中流动相条件,色谱柱选择以及系统硬件的设置都会影响分离度。我们可以从以下几个方面考虑: 1.流动相 a. 流动相中有机溶剂的类型和比例,会影响色谱分离的选择性。对于反相色谱模式,常用的有机溶剂有甲醇、乙腈和四氢呋喃。我们可以通过改变流动相中的有机相种类或调整其比例,来改变选择性和分离度。 b.流动相的pH值和缓冲盐的添加也会影响分离度。对于中性的化合物,无论是极性还是非极性的,流动相pH值的改变不会对其选择性有太大的影响;对于可解离的化合物,pH的改变会产生较大的影响。对于酸性化合物,比如苯甲酸,其pKa为4.2,当流动相pH值大于5.7(pKa+1.5),则苯甲酸以离子型态存在,则与反相固定相之间的作用较弱,保留时间较短,当流动相pH值小于2.7 (pKa−1.5),则苯甲酸以分子形态存在,则与反相固定相之间有更强的保留作用,保留时间更长。......阅读全文

色谱柱的流动相

1、在进行样品检测前,至少使用20倍柱体积流动相使色谱柱充分平衡。流动相一定要使用色谱级别的溶剂。如使用水相的缓冲液应当天配制以保持新鲜避免细菌产生。2、流动相使用前需用微孔滤膜过滤,消除流动相中颗粒对色谱系统和色谱柱的损坏。缓冲液与其他流动相混合后应重新过滤避免溶解度变化造成产生新的沉淀。不应使用

流动相色谱柱怎么使用?

1、在进行样品检测前,至少使用20倍柱体积流动相使色谱柱充分平衡。流动相一定要使用色谱级别的溶剂。如使用水相的缓冲液应当天配制以保持新鲜避免细菌产生。2、流动相使用前需用微孔滤膜过滤,消除流动相中颗粒对色谱系统和色谱柱的损坏。缓冲液与其他流动相混合后应重新过滤避免溶解度变化造成产生新的沉淀。不应使用

制备色谱分离纯化之流动相选择

制备色谱的目的,是从混合物中得到高纯单组份,和分析色谱不同,在选用流动相时,还要考虑后续溶剂去除等分离操作(旋蒸、冻干等方法)。一般来说,不宜采用高毒性溶剂,对多元溶剂要尽可能的少用,另溶剂的纯度也要考虑在其中。这里小编介绍下制备色谱做分离纯化的流动相选择。 一般常用的正相,反相流动相  制备色谱纯

流动相极性对液相色谱分离的影响

这个是根据药典上面的注释来的,具体影响只能说是,对填料的吸附能力有所控制,有很多样品在正向的时候分离效果好,有的则是相反的,这个是不一定的,具体的影响很小,只是针对于有没有利于分离的效果

液相色谱柱流动相的流速的选择

  因柱效是柱中流动相线性流速的函数,使用不同的流速可得到不同的柱效。对于一根特定的色谱柱,要追求最佳柱效,最好使用最佳流速。对内径为4.6mm的色谱柱,流速一般选择1mL/min,对于内径为4.0mm柱,流速0.8mL/min为佳。当选用最佳流速时,分析时间可能延长。可采用改变流动相的洗涤强度的方

液相色谱柱分离机理

液相色谱柱分离机理

色谱分离试验时色谱柱中的流动相会排干吗

  不少做色谱分离试验的人遇到过这样的情形:不慎未及时补充流动相,泵将溶剂瓶中的流动相吸干了,HPLC系统由此而停止工作了。如此情况是否会损坏色谱柱?泵是否已将色谱柱中所有流动相都排干了?色谱柱还能使用吗?事实上,如果泵将溶剂瓶中的流动相吸干,并不会造成色谱柱的损坏。即使泵中充满了空气,泵也不会将空

高效液相色谱色谱柱的填料和流动相的组分

  应按各品种项下的规定,常用的色谱柱填料有硅胶和化学键合硅胶。后者以十八烷基硅烷键合硅胶最为常用辛基键合硅胶次之,氰基或氨基键合硅胶也有使用;离子交换填料用于离子交换色谱;凝胶或玻璃微球等,用于分子排阻色谱等。注样量一般为数微升。除另有规定外,柱温为室温,检测器为紫外吸收检测器。  在用紫外吸收检

wook500液相色谱柱流动相的配制

液相色谱柱一般的液相色谱柱由柱管、柱头螺母、死堵、筛板、还有里面的填料组成。在液相系统中起着分离的作用,是液相色谱系统的核心部件之一。柱管材质有玻璃、不锈钢、铝铜、peek以及内衬光滑的聚合材料的其他材质。一般细粒度的填料采用匀浆填充法装柱,先将填料调成匀浆,在高压泵作用下,快速将其压入装有洗脱液的

wook500液相色谱柱流动相的配制

  wook500液相色谱柱一般的液相色谱柱由柱管、柱头螺母、死堵、筛板、还有里面的填料组成。在液相系统中起着分离的作用,是液相色谱系统的核心部件之一。柱管材质有玻璃、不锈钢、铝铜、peek以及内衬光滑的聚合材料的其他材质。一般细粒度的填料采用匀浆填充法装柱,先将填料调成匀浆,在高压泵作用下,快速将

液相色谱柱流动相的使用注意事项

  (1)由于甲醇廉价,对于反相柱推荐使用甲醇体系(必须使用乙腈的场合除外)。  (2)对于正相柱推荐使用沸程为30-60 ℃的石油醚或提纯后的己烷作流动相,没有提纯的己烷不得使用。用水最好使用超纯水(电阻率大于18兆欧),去离子水及双蒸水中含有酚类杂质,有可能影响分析结果。  (3)含水流动相最好

色谱柱、气相色谱、液相色谱等各种色谱的分离原理

色谱最大的特点是能将一个复杂的混合物中的各组分彼此分离开,还能检测出来这些组分是什么。  我们从茨维特的试验可以看出,碳酸钙装在玻璃管中固定不动,称为固定相。石油醚不断流过固定相(碳酸钙),所以流动的石油醚为流动相。要完成色谱分离最起码的条件要有固定相和流动相参与。色谱的分离过程就是利用相对静止的固

色谱柱、气相色谱、液相色谱等各种色谱的分离原理

  色谱最大的特点是能将一个复杂的混合物中的各组分彼此分离开,还能检测出来这些组分是什么。   我们从茨维特的试验可以看出,碳酸钙装在玻璃管中固定不动,称为固定相。石油醚不断流过固定相(碳酸钙),所以流动的石油醚为流动相。要完成色谱分离最起码的条件要有固定相和流动相参与。色谱的分离过程就是利用相对

色谱柱、气相色谱、液相色谱等各种色谱的分离原理

  色谱最大的特点是能将一个复杂的混合物中的各组分彼此分离开,还能检测出来这些组分是什么。   我们从茨维特的试验可以看出,碳酸钙装在玻璃管中固定不动,称为固定相。石油醚不断流过固定相(碳酸钙),所以流动的石油醚为流动相。要完成色谱分离最起码的条件要有固定相和流动相参与。色谱的分离过程就是利用相对

常用液相色谱柱按照分离模式

色谱柱常用液相色谱柱按照分离模式大致可以分为吸附、分配、键合相、离子交换、疏水作用、体积排阻(凝胶)、亲和及手性等类型,表给出了不同类型色谱柱的分离原理及应用情况。

液相色谱柱分离效果的好坏

液相色谱柱具有高表面覆盖率和完全封尾的特点,提高了我们色谱柱的稳定性,适合pH值1.5~10.0很宽范围内的色谱分析。我们对的基质上进行的键合反应进行了特别的优化。独特的双封尾技术使我们的色谱柱对中性、极性、酸性和碱性以及螯合化合物的分析具有最优的分离效率。    液相色谱柱采用高纯硅胶为基质,键合

液相色谱柱分离效果的好坏

 液相色谱柱具有高表面覆盖率和完全封尾的特点,提高了我们色谱柱的稳定性,适合pH值1.5~10.0很宽范围内的色谱分析。我们对的基质上进行的键合反应进行了特别的优化。独特的双封尾技术使我们的色谱柱对中性、极性、酸性和碱性以及螯合化合物的分析具有zui优的分离效率。    液相色谱柱采用高纯硅胶为基质

高效液相色谱色谱柱的填料和流动相的组分介绍

  应按各品种项下的规定,常用的色谱柱填料有硅胶和化学键合硅胶。后者以十八烷基硅烷键合硅胶最为常用辛基键合硅胶次之,氰基或氨基键合硅胶也有使用;离子交换填料用于离子交换色谱;凝胶或玻璃微球等,用于分子排阻色谱等。注样量一般为数微升。除另有规定外,柱温为室温,检测器为紫外吸收检测器。  在用紫外吸收检

流动相pH小于2,注意色谱柱选择哦!

例如中性化合物在反相色谱系统的保留与流动相pH无关;酸性化合物在pH 趋于酸性(pH变小,尤其低于化合物的pka 值)时会因状态趋于中性而增加保留;而碱性化合物在流动相pH 趋于碱性(pH 变大,尤其高于化合物的pka 值)时会因状态趋于中性而增加保留。 但是各位小伙伴知道吗,如果调节流动相的pH过

柱色谱分离

所用色谱管为内径均匀、下端缩口的硬质玻璃管,下端用棉花或玻璃纤维塞住,管内装有吸附剂。色谱柱的大小,吸附剂的品种和用量,以及洗脱时的流速,均按各单体中的规定。吸附剂的颗粒应尽可能保持大小均匀,以保证良好的分离效果,除另有规定外通常多采用直径为0.07-0.15mm的颗粒。吸附剂的活性或吸附力对分离效

高效液相色谱柱分离效果的好坏

 高效液相色谱柱具有高表面覆盖率和完全封尾的特点,提高了我们色谱柱的稳定性,适合pH值1.5~10.0很宽范围内的色谱分析。我们对的基质上进行的键合反应进行了特别的优化。独特的双封尾技术使我们的色谱柱对中性、极性、酸性和碱性以及螯合化合物的分析具有zui优的分离效率。    高效液相色谱柱采用高

液相系统分离的“心脏”——色谱柱!

人们乐于把色谱柱比作液相系统的心脏,因为分析物的保留与分离,就发生在色谱柱上。今天,我们就来聊聊它,来聊聊“色谱心脏”的耐受性、选择性和效率问题:耐受性:我的小心脏要受不了了心脏是坚韧又娇嫩的器官,它的持续跳动确保生命,而它的任何病症都会影响人体的状态甚至生存。色谱柱也是如此,它的状态直接决定液相分

液相色谱柱的流动相配制要求有哪些?

液相色谱柱是样品组分在柱填料和流动相之间的质量交换,以达到分离的目的,因此流动相需要具备以下特性:1、液相色谱柱的流动相对于样品具有一定的溶解能力,确保样品组分不会在色谱柱中沉淀(或长时间保留在色谱柱中)。2、液相色谱柱的流动相和样品之间不发生化学反应。3、为了获得良好的分离效果,流动相的粘度应尽可

流动相跑空了,色谱柱内会不会进去气泡

只能说有可能,具体有没有气泡得具体看情况。如果柱子进了气泡,一来可能压力会升高,二来可能压力会忽上忽下,第三可能会出现诡峰。跑空了确实对仪器影响很大,可能堵住单向阀、可能堵住泵,可能堵住柱子,也可能堵住检测器。再运行的时候要先排气,把泵前的液体都排掉,然后观察压力,如果有明显的压力升高找出具体堵住的

流动相跑空了,色谱柱内会不会进去气泡

只能说有可能,具体有没有气泡得具体看情况。如果柱子进了气泡,一来可能压力会升高,二来可能压力会忽上忽下,第三可能会出现诡峰。跑空了确实对仪器影响很大,可能堵住单向阀、可能堵住泵,可能堵住柱子,也可能堵住检测器。再运行的时候要先排气,把泵前的液体都排掉,然后观察压力,如果有明显的压力升高找出具体堵住的

液相色谱柱的流动相配制要求有哪些?

液相色谱柱是样品组分在柱填料和流动相之间的质量交换,以达到分离的目的,因此流动相需要具备以下特性:1、液相色谱柱的流动相对于样品具有一定的溶解能力,确保样品组分不会在色谱柱中沉淀(或长时间保留在色谱柱中)。2、液相色谱柱的流动相和样品之间不发生化学反应。3、为了获得良好的分离效果,流动相的粘度应尽可

用过流动相三乙胺的色谱柱如何清洗

可以加大水相的比例冲洗啊,水相90%都可以的。我也用过三乙胺的流动相

流动相跑空了,色谱柱内会不会进去气泡

只能说有可能,具体有没有气泡得具体看情况。如果柱子进了气泡,一来可能压力会升高,二来可能压力会忽上忽下,第三可能会出现诡峰。跑空了确实对仪器影响很大,可能堵住单向阀、可能堵住泵,可能堵住柱子,也可能堵住检测器。再运行的时候要先排气,把泵前的液体都排掉,然后观察压力,如果有明显的压力升高找出具体堵住的

流动相跑空了,色谱柱内会不会进去气泡

只能说有可能,具体有没有气泡得具体看情况。如果柱子进了气泡,一来可能压力会升高,二来可能压力会忽上忽下,第三可能会出现诡峰。跑空了确实对仪器影响很大,可能堵住单向阀、可能堵住泵,可能堵住柱子,也可能堵住检测器。再运行的时候要先排气,把泵前的液体都排掉,然后观察压力,如果有明显的压力升高找出具体堵住的

怎样选择液相色谱柱保护柱不会影响分离分析?

 液相色谱柱通常在选择保护柱之前首先要考虑样品是否清洁,对于大部分分析工作来说,一支25px长的保护柱便能够提供充分的保护作用。但是,如果样品较脏,或工作中发现经常要更换25px的保护柱,那么就应该选用50px或75px的保护柱。保护柱越长自然所装的色谱填料就越多,则其保护性能越好,当然随着保护柱长