循环肿瘤DNA片段更短小有助开发液体活检新技术
根据一项发表在国际学术期刊Plos Genetics上的最新研究，循环肿瘤DNA与正常游离DNA在长度上存在差别，据此或可利用病人血液帮助开发检测肿瘤DNA的液体活检新技术。 液体活检技术可以从血液中发现和诊断癌症，还可以帮助监测癌症复发，评估治疗效果，但是这项技术仍然存在监测灵敏度的问题，大大限制了该技术的发展。美国犹他大学和华盛顿大学的研究人员发现，相比于正常细胞的DNA片段，来源于肿瘤细胞的循环DNA长度更短。 文章作者Hunter Underhill表示：“根据不同来源的循环DNA片段长度不同，可以检测到实体瘤的存在。” 研究人员在多形性成胶质细胞瘤小鼠模型中发现了上述现象。在研究中他们将人的多形性成胶质细胞瘤干细胞样系导入小鼠脑部，随后在血液中检测到了人类ctDNA，他们对比了人类肿瘤来源ctDNA和小鼠正常游离DNA的差别，发现人类ctDNA的长度一般为134个碱基，而小鼠正常游离DNA长度一般为167个碱......阅读全文
大片段DNA测序(>50KB)
大片段DNA的测序: 通过鸟枪法 (Shot Gun Sequencing) 测序 鸟枪法测序的操作方法1. 用限制酶切下目的片段的大片段Insert DNA, 并用Agarose凝胶电泳进行回收。2. 对回收的大片段DNA用物理方法 (如超声波等) 进行切断处理，然后用T4 DNA Polymer
染色体DNA的片段化
实验概要琼脂糖(agarose)或聚丙烯酰胺(PAGE)电泳是分离、鉴定和纯化DNA的标准方法。琼脂糖凝胶的分辨率比聚丙烯酰胺电泳低，但分离范围广，可以分离200 bp一50 kb的DNA。细胞凋亡时染色体从核小体间断裂形成大小为180-200bp整数倍的片段，在琼脂糖凝胶中电泳后可呈现出规
长片段DNA如何设计测序引物
如果是测序引物的话，因为目前的测序技术一端只能到800bp左右，所以一对引物差不多能测1.5kb左右的片段，超出这个范围测出来的也不太可信了。所以如果你的目的片段在这个范围内，设计1对引物就行了，如果超出这个范围，比如说有6k左右，那就要设计四对引物，设计方法跟常规的一样，只是把握这个间隔就好了。1
两个DNA经过30次PCR循环能获得多少个特定区间片段
实际上来讲，是肯定不会有2的31次方或者2的30次方，要少很多。理论上来讲，出题人自以为2的31次方减4是正确答案，他是这样认为的：原模板有2个双链DNA分子，所以第1轮就生成总共4个DNA双链分子，也就是2的2次方，以此类推，30轮就是2的31次方个双链DNA分子。但题目问的是特定区间片段，就应该
DNA片段的亚克隆实验——凝胶块中DNA连接
实验材料DNA试剂、试剂盒TAE琼脂糖仪器、耗材电泳仪离心机实验步骤1. 重复基本方案中的步骤1~5。 2. 在高质量的低融点胶中分离久DNA（0.7%，TAE缓冲液），切下体积尽可能小的所需DNA条带（20~50 μl ）至小离心管中。3. 在70℃融化低融点胶10 min 以上，每个连接反
深圳罗湖首次截获人体组织DNA片段
深圳市出入境检验检疫局罗湖局日前在一名旅客携带入境行李中截获人体组织DNA片段，这是罗湖口岸首次截获该类物品。 据相关工作人员介绍，当日在该旅客行李中发现一批离心管样品，共36支。经查，该批样品为人体组织DNA片段，用离心管装载并包裹于牛皮纸盒中放置于填充干冰的保温箱内，离心管及纸盒外无任何标
DNA片段的回收实验——树脂回收法
目的DNA片段的回收技术是重组DNA中的关键技术，回收是指从电泳介质中纯化出目的片断。实验方法原理本方法特别适合于PCR片段的回收，具有纯度高、操作简洁等特点，经此方法回收的片段可有效的用于重组载体构建。通过15分钟的纯化过程，PCR产物即能被有效地从含引物二聚体、非特异性扩增引物片断等混合物中分离
PCR扩增样本DNA的HLA基因片段
一、PCR扩增体系1. 1.0uM 引物2. 300ng待测样本基因组DNA3. 2.0U Taq多聚酶4. 200uM 各种dNTP5. 用1 X PCR缓冲液（10mM Tris-HCl，pH8.3，50mM KCl，1.5mM MgCl2，0.01%明胶）调至总体积100ul，并用50ul矿物
分子克隆化DNA片段的制备介绍
常用以下方法获得DNA片段： ①用限制性核酸内切酶将高分子量DNA切成一定大小的DNA片段； ②用物理方法(如超声波)取得DNA随机片段； ③在已知蛋白质的氨基酸顺序情况下，用人工方法合成对应的基因片段； ④从mRNA反转录产生cDNA。
体外连接DNA片段的方式有哪些？
第一种方法是，用DNA连接酶连接具有互补粘性末端的DNA片段;第二种方法是，用T4DNA连接酶直接将平末端的DNA片段连接起来，或是用末端脱氧核苷酸转移酶给具平末端的DNA片段加上poly(dA)-poly(dT)尾巴之后，再用DNA连接酶将它们连接起来;第三种方法是，先在DNA片段末端加上化学合成
体外连接DNA片段的具体方式介绍
平末端DNA片段的连接常用的平末端DNA片段连接法，主要有同聚物加尾法、衔接物连接法及接头连接法。同聚物加尾法这种方法的核心部分是，利用末端脱氧核苷酸转移酶转移核苷酸的特殊功能。末端脱氧核苷酸转移酶是从动物组织中分离出来的一种异常的DNA聚合酶，它能够将核苷酸(通过脱氧核苷三磷酸前体)加到DNA分子
DNA片段的回收实验——微量柱法
实验材料DNA片段试剂、试剂盒纯化试剂盒异丙醇仪器、耗材离心机电泳仪电泳槽取液器微量真空装置抽滤装置实验步骤1. 紫外灯下从胶上切下目的片段，放入一Epphendof管中。2. 离心管在－20℃冷却5~10分钟。3. 将微量柱下套上一Epphendof管，将冷却的胶条装进微量柱中，4℃12 0
如何提高DNA片段的转化率
一、克隆分析原理克隆分析用于将DNA片段从一个载体（质粒、黏粒或噬菌体）转移到另一个载体上。它们通常用于构建表达系统，或是将DNA片段转移到特殊的载体上以制备杂交探针或是制备测序用的单链模板。典型的载体含有三个必要的元件：一个抗生素抗性标记、一个复制起点（以便选择转化了的大肠杆菌宿主）以及一个或多个
体外连接DNA片段的具体方式介绍
平末端DNA片段的连接常用的平末端DNA片段连接法，主要有同聚物加尾法、衔接物连接法及接头连接法。同聚物加尾法这种方法的核心部分是，利用末端脱氧核苷酸转移酶转移核苷酸的特殊功能。末端脱氧核苷酸转移酶是从动物组织中分离出来的一种异常的DNA聚合酶，它能够将核苷酸(通过脱氧核苷三磷酸前体)加到DNA分子
循环肿瘤细胞的作用
恶性肿瘤都会通过血液传播转移到身体的其他器官，而肿瘤转移是导致肿瘤患者死亡的主要原因。肿瘤细胞侵入到原发肿瘤细胞的周围组织中，进入血液和淋巴管系统，形成循环肿瘤细胞CTC，并转运到远端组织，再渗出，适应新的微环境，最终“播种”、“增殖”、“定植”、形成转移灶。因此早期发现血液中的CTC，对于患者
循环肿瘤细胞及检测
循环肿瘤细胞是从机体实体肿瘤上脱落，然后进入血液循环的的一种特异性细胞。通过检测循环肿瘤细胞的数量可轻而易举的评估疾病的进程和治疗效果。Cell Search系统能自动检测和计数循环肿瘤细胞，它成为了新一类的诊断工具的标准。系统的特异性、灵敏度和可重复性确保了它能在首次治疗周期对循环肿瘤细胞进行系列
循环肿瘤细胞的介绍
CTC（循环肿瘤细胞，Circulating Tumor Cell）是存在于外周血中的各类肿瘤细胞的统称。CTC检测通过捕捉检测外周血中痕量存在的CTC，监测CTC类型和数量变化的趋势，以便实时监测肿瘤动态、评估治疗效果，实现实时个体治疗。[1] 循环肿瘤细胞（CTC，Circulating
循环肿瘤细胞的分选
循环肿瘤细胞（CTC）：根据肿瘤细胞转移的途径，在血液或淋巴管中循环的游离肿瘤细胞被定义为循环肿瘤细胞，被认为是癌症转移的一个重要因素。体外早期诊断化疗药物的快速评估个体化治疗，包括临床筛药、耐药性检测评估预后及存活时间肿瘤复发的监测肿瘤新药物的开发鉴于CTC的含量非常少，一般在10 ml血液中只有
循环肿瘤细胞检测原理
CanpatrolCTC检测抽取5-10ml静脉血用于检测。采血后运用RNA原位杂交和纳米过滤技术有机结合的原理富集血液中的CTC，进行CTC计数、分型甚至基因检测。
循环肿瘤细胞的定义
1869年，澳大利亚籍医生Ashworth首次提出循环肿瘤细胞（Circulating Tumor Cell，简称CTC）的概念。1976年Nowell将CTC的定义修正为：来源于原发肿瘤或转移肿瘤，获得脱离基底膜的能力并入侵通过组织基质进入血管的肿瘤细胞。目前CTC是指存在于外周血中的各类肿瘤
DNA酶解及DNA片段琼脂糖凝胶电泳
【目的要求】1.掌握限制性核酸内切酶概念、特点及作用原理，DNA酶解技术的应用2.掌握琼脂糖凝胶电泳分离DNA片段原理及其操作3.熟悉电泳基本原理及其影响因素【教学内容】1．限制性核酸内切酶概念、特点及作用原理，DNA酶解技术的应用2．DNA片段琼脂糖凝胶电泳3．电泳概念、分类、应用、基本原理及其影
循环肿瘤细胞检测有助早期发现肿瘤转移
本报讯 1896年，澳大利亚学者Ashworth在一例转移性肿瘤患者血液中首次观察到从实体肿瘤中脱离并进入血液循环的肿瘤细胞，并率先提出了循环肿瘤细胞(CTC)的概念。近年来世界各国研究人员围绕CTC在乳腺癌、结直肠癌等肿瘤中的应用价值开展了多项探索研究。美国乔治敦大学医院教授Minetta
循环肿瘤细胞的检测——肿瘤患者的福音
循环肿瘤细胞是从机体实体肿瘤上脱落，然后进入血液循环的一种特异性细胞。通过检测循环肿瘤细胞的数量可轻而易举的评估疾病的进程和治疗效果。Cell Search系统能自动检测和计数循环肿瘤细胞，它成为了新一类的诊断工具的标准。系统的特异性、灵敏度和可重复性确保了它能在首次治疗周期对循环肿瘤细胞进行系列检
新型DNA测序算法让“重复片段”不再神秘
美国华盛顿大学的一个研究小组称，他们使用了一种被称为“mrFAST”的新型DNA测序算法，可对基因的重复片段进行精确统计并对其作用作出初步判断。相关研究发表在8月30日出版的《自然·遗传学》杂志上。 据了解，截至2003年底，绝大部分的人类基因组已获得测定。但基因组中仍有许多的区域未获得测
“垃圾DNA”片段是如何开启或关闭基因？
普林斯顿大学的研究人员近日捕捉到一段视频，显示曾被认为是“垃圾DNA”的片段如何开启或关闭基因。这段视频和成果于周一发表在《Nature Genetics》上。 在人类基因组中，未编码基因的DNA片段占90%以上。过去，它们被认为是“垃圾DNA”，但是后续的研究证实，这些片段包含了开启或关闭基
脉冲场凝胶中浓缩DNA片段的回收
实验方法原理 低熔点琼脂糖切片中的 DNA 首先通过电泳浓缩进入高百分比琼脂糖凝胶中，然后用琼脂糖酶处理而分离。最终 DNA 制备通过微透析纯化。这种方法在把分离的 DNA 注入小鼠受精卵（Schedl et al. 1993) 或转染鼠
DNA片段探针的应用实验——甲酰胺法
所谓探针，一般是指用来检测某一特定核苷酸序列或基因序列的DNA片段或RNA片段。但要使探针DNA片段能实际应用，必须使DNA或RNA分子带上可识别的信号标志，以便跟踪观察探针与其同源的核苷酸序列发生杂交反应的位置，被探测DNA或RNA片段上的大小、杂交信号的强弱等。目前应用最多的是核素标记方法或非核
分子克隆化DNA片段与载体连接介绍
DNA分子与载体分子连接是克隆过程中的重要环节之一，方法有： ①粘性末端连接，DNA片段两端的互补碱基顺序称之为粘性末端，用同一种限制性内切酶消化DNA可产生相同的粘性末端。在连接酶的作用下可恢复原样，有些限制性内切酶虽然识别不同顺序，却能产生相同末端。 ②平头末端连接，用物理方法制备的DN
DNA片段的亚克隆实验——基本方案
所谓亚克隆就是对已经获得的目的DNA片段进行重新克隆，其目的在于对目的DNA进行进一步分析，或者进行重组改造等。亚克隆的基本过程包括：(1)目的DNA片段和载体的制备；(2)目的DNA片段和载体的连接；(3)连接产物的转化；(4)重组子筛选。实验材料DNA试剂、试剂盒CIPdNTPDNA聚合酶T4聚
脉冲场凝胶中浓缩DNA片段的回收
实验方法原理 低熔点琼脂糖切片中的 DNA 首先通过电泳浓缩进入高百分比琼脂糖凝胶中，然后用琼脂糖酶处理而分离。最终 DNA 制备通过微透析纯化。这种方法在把分离的 DNA 注入小鼠受精卵（Schedl et al. 1993) 或转染鼠胚胎干细胞（Choi et al. 1993) 时是非