基于iTRAQ技术鉴定梭子蟹中与生长相关的差异表达蛋白
梭子蟹广泛分布在韩国，日本，中国和东南亚的沿海水域。这种物种栖息在河口和沿海水域。 在中国，它是一种主要的食用蟹种和重要的渔业资源，也是中国重要的养殖物种。目前关于梭子蟹的研究已经很广泛，但关于其遗传背景信息的研究亟待深入。目前为止，关于梭子蟹蛋白质组学的研究比较少。 在这项研究中，中国水产科学院李健课题组利用iTRAQ蛋白质组定量分析技术对梭子蟹中与生长相关的蛋白质组进行了分析与鉴定，以了解其分子机制。从梭子蟹五种组织：眼眶、鳃、心脏、肝胰腺和肌肉中分离总蛋白，利用iTRAQ技术对每个组织中等量蛋白质进行蛋白质组分析。基于液相色谱与串联质谱法和de novo测序数据，总共鉴定了961个蛋白质。以1.2倍的表达变化作为生理学显着的基准，发现了30个与梭子蟹生长相关的差异表达蛋白（DEP），这些蛋白质大部分是表达上调的，包括参与代谢、免疫反应、DNA重复和蛋白质合成等相关的蛋白质，表明能源守恒是应对生长的重要战略。使用iTR......阅读全文
蛋白质组学几种定量方法的案例解读（一）
一、Label-free定量Label-free定量，顾名思义就是不需要对比较样本做特定标记处理，只需要比较特定肽段/蛋白在不同样品间的色谱质谱响应信号便可得到样品间蛋白表达量的变化，通常用于分析大规模蛋白鉴定和定量时所产生的质谱数据。Label-free技术又可分为基于谱图数（Spectra Co
利用“无创”技术检测活细胞中荧光蛋白表达（二）
结果波长优化用GeminiEM对DsRed进行波长扫描，以此举例如何进行波长优化。为了检测最大激发波长，我们首先固定发射波长为600nm，然后对发射波长进行扫描。扫描结果显示最大激发波长为556nm(图1)。同样为了检测最大发射波长，我们固定激发波长为535nm，然后扫描发射波长，从而得到584nm
利用“无创”技术检测活细胞中荧光蛋白表达（一）
简介在过去的五年中，荧光蛋白在监测体内生物学研究中，起到越来越重要的作用。源于维多利亚多管发光水母中的绿色荧光蛋白(GFP)是最早被我们应用的荧光蛋白，但是随着时间的推移，现在我们可以使用的荧光蛋白种类也越加丰富，包括加强型的变异GFP蛋白、从其他种类水母中发现的荧光蛋白和珊瑚礁蛋白。它们都可以在众
利用“无创”技术检测活细胞中荧光蛋白表达（三）
细胞混合结果在本次实验中，我们在一个96孔板里混合了多种细胞，保证每个孔大约50,000个细胞。因此，如果是1:1混合，那么每种细胞会有25,000个。如果是1:1:1混合，那么每种细胞将有16,700个。实验板分别用480/510nm(AsGFP和ZsGreen的优化结果)和550/588nm(D
为什么通过elisa、WB能检测到的蛋白在itraq实验中没有检测..
为什么通过elisa、WB能检测到的蛋白在itraq实验中没有检测到？人血浆中的蛋白是有上万种的，而一般质谱只能检测到五六百种，也就是说只占了其中的百分之几，这是普遍现象，说明咱们的方法是不存在问题的；其次，ELISA/WB与质谱相对来说灵敏度不一样，前者具有放大效应，因为其间会用到相应的抗体，所以
蛋白质组学的临床科研解决方案心血管篇
根据世界卫生组织发布的数据，心血管疾病一直是人类健康的“第一杀手”，但是相比于各种恶性肿瘤，这个“杀手”在科研领域却低调很多。究其原因，没有细胞模型，动物模型并不能完美的模拟心血管疾病发生发展的过程等等，都导致了心血管疾病的基础科研相对薄弱。但是对于临床医生，除去关心机制，我们更应该通过科研去解
蛋白质组学的临床科研解决方案心血管篇
根据世界卫生组织发布的数据，心血管疾病一直是人类健康的“第一杀手”，但是相比于各种恶性肿瘤，这个“杀手”在科研领域却低调很多。究其原因，没有细胞模型，动物模型并不能完美的模拟心血管疾病发生发展的过程等等，都导致了心血管疾病的基础科研相对薄弱。但是对于临床医生，除去关心机制，我们更应该通过科研去解
蛋白质组学的临床科研解决方案心血管篇
根据世界卫生组织发布的数据，心血管疾病一直是人类健康的“第一杀手”，但是相比于各种恶性肿瘤，这个“杀手”在科研领域却低调很多。究其原因，没有细胞模型，动物模型并不能完美的模拟心血管疾病发生发展的过程等等，都导致了心血管疾病的基础科研相对薄弱。但是对于临床医生，除去关心机制，我们更应该通过科研去解决临
李兰娟院士新成果：唾液乳杆菌LI01的胆汁应激反应
最近发现几种唾液乳杆菌菌株，表现出良好的益生菌性质，如抗菌活性，炎症调节，甚至是肿瘤性病变减少等。从健康人体内分离的唾液乳杆菌LI01已经在预防和治疗肝衰竭中表现出了益生菌性质。对胆汁的耐受对于乳杆菌在胃肠道中的存活和发挥其益处至关重要。 在这项研究中，浙江大学附属第一医院的李兰娟院士所在课题
蛋白质组学之逆袭：深度注释基因组（三）
人类尚未充分认识复杂的癌症基因组是如何转化为导致复发和死亡的驱动生物学的，将蛋白质组学与基因组学结合在一起能够让我们获得对癌症的新认识，同时提供一种有价值的资源以便科学界能够用来提出关于这些疾病的新假设，以及治疗它的手段。蛋白质基因组学终有一天会被证明是一种强大的临床工具，使得人类能够横跨癌症基因组
蛋白表达为什么加了诱导剂反而表达量变少
温度太高。诱导大肠杆菌细胞的外膜发生有限的渗漏，温度太高会导致加了诱导剂反而表达量变少，从而使细胞内的蛋白向胞外培养基中分泌。
蛋白原核表达没有表达可以延长诱导时间吗
检测原核表达蛋白不需要将菌体超声波破碎的如果是仅仅检测原核蛋白是否有表达，可以直接将菌体重悬于蒸馏水中，并使用SDS-PAGE的方法检测。如果需要检测原核蛋白是否有可溶表达，则需要将菌体超声波破碎之后再检测是否有可溶表达。所以检测原核表达蛋白不需要将菌体超声波破碎的
杆状病毒系统蛋白质表达实验——小规模表达
实验方法原理分析方案依赖于表达蛋白的天然特性。实验材料草地夜蛾（Sf9）细胞高滴度的重组杆状病毒储液试剂、试剂盒PBS1×SDS样品缓冲液仪器、耗材含 10% 胎牛血清（FBS）的TNM-FH昆虫培养基60 mm 组织培养皿27℃ 培养箱（湿度可选）15 ml 聚丙烯离心管带有 GH-3.7 水平转
组蛋白修饰分工调控基因表达水平和基因表达噪音
基因表达过程依赖于转录因子、染色质调控因子和染色质等生物大分子在布朗运动过程中的随机碰撞，因此，即使是基因型和分化类型完全相同的细胞在相同环境下也存在基因表达的差异，被称为基因表达噪音。研究基因表达噪音，对研究干细胞增殖分化、个体发育、病原菌的抗药性以及农作物的稳产有着重要的意义，而其在人类早期
蛋白表达－蛋白在破碎后沉淀－怎么办
细胞破碎液离心之后目的蛋白条带更明显细胞破碎后，用缓冲液提取蛋白质，用什么方法能得到蛋蛋白质分离纯化的一般程序可分为以下几个步骤：（一）材料的预处理及细胞破碎分离提纯某一种蛋白质时，首先要把蛋白质从组织或细胞中释放出来并保持原来的天然状态，不丧失活性。所以要采用适当的方法将组织和细胞破碎。常用的破碎
蛋白质的短暂表达实验
实验材料 载体试剂、试剂盒 牛血清DMEM葡聚糖PBSDMSOEDTA仪器、耗材 培养皿培养箱相差显微镜离心机实验步骤1. 将目的基因亚克隆至合适的载体中得到所需的重组DNA，用小量法（5 ml 培养物）或用CsCl/溴化乙锭离心法纯化重组DNA。2. 将在DMEM-10 CS中生长汇片的COS
蛋白质的短暂表达实验
基本方案 实验材料 载体 试剂、试剂盒
分子克隆蛋白表达实验指南（十二）
– Note: The yield of fusion protein can be estimated by measuring the absorbance at 280 nm. The GST affinity tag can be approximated by 1 A280 Å 0.5
蛋白质的短暂表达实验
基本方案 实验材料 载体 试剂、试剂盒
从包涵体中纯化表达蛋白
实验材料 表达靶蛋白的大肠杆菌细胞试剂、试剂盒 细胞裂解缓冲液 I细胞裂解缓冲液Ⅱ脱氧胆酸浓盐酸包涵体溶解缓冲液 I包涵体溶解缓冲液ⅡKOHPMSFSDS 凝胶加样缓冲液含尿素的 Tris-ClDNaseI溶菌酶SDS-聚丙烯酰胺凝胶仪器、耗材 Sorvall GSA 转头或相当的转头pH 试纸磨光
Northwestern筛选蛋白表达文库实验
实验方法原理 Northwestern 筛选蛋白表达文库的方法是通过构建 IPTG 可诱导的融合蛋白表达文库（融合蛋白的 N 端由载体序列编码，C 端由克隆到载体的 cDNA 文库编码），进而诱导融合蛋白表达，并将蛋白质固定于硝酸纤维素滤
Northwestern筛选蛋白表达文库实验
Northwestern 筛选蛋白表达文库的方法是通过构建 IPTG 可诱导的融合蛋白表达文库（融合蛋白的 N 端由载体序列编码，C 端由克隆到载体的 cDNA 文库编码），进而诱导融合蛋白表达，并将蛋白质固定于硝酸纤维素滤膜上，以标记的 RNA 探针进行筛选，最终获取能与靶 RNA 分子特异性结合
有关融合蛋白表达载体的克隆
在构建融含蛋白表达载体时除了要注意插入片段的方向、读码框架与载体保持一致外，注意以下问题可能会减少一些不必要的麻烦，当外源片的插入载体起始密码的后面，另一个基因的前面时，注意检查插入后基因的两端是否引入了新的终止密码，特别是用到Klenow mung bean 核酸酶，T4 Polymerase
分子克隆蛋白表达实验指南（十四）
RbCl制备感受态细胞 需准备的灭菌器具和培养液： SOB，Buffer 1，Buffer 2，3×200ml广口瓶，1.5ml EP管，1×500ml离心瓶（按200ml摇菌量计算），2×50ml离心管，2×移液管（用于加Buffer 1），液氮，冰 离心管，EP管，移液管使用前均需要放
分子克隆蛋白表达实验指南（十五）
LB固体培养基 Tryptone 1g Yeast Extract 0.5g NaCl 1g Agar 1.5g 加蒸馏水至总体
异源蛋白表达的基本介绍
随着人类基因组计划的完成，蛋白表达技术已渗透到生命科学研究的各个领域。越来越多的基因被发现，其中多数基因功能不明，利用蛋白表达系统表达目的基因是研究基因功能及其相互作用的重要手段。根据不同的表达要求，如表达量高低、目标蛋白的活性和表达产物的纯化方法，可选用适当的表达系统及相应的表达策略。
LSCM表达荧光蛋白的组织
表达荧光蛋白的组织经冷冻切片制样后，可直接封片，观察并扫描图像，也可配合使用其它荧光染料进行免疫荧光抗体标记和核染色。同时表达GFP 和 RFP 荧光蛋白的组织切片，如还需作免疫荧光抗体标记，应选择可以被 633 nm 和 405 nm 波长激光器激发的荧光染料，如 CY5、Alexa fluor
分子克隆蛋白表达实验指南（十八）
15％胶 水1.11.872.33.43.854.65.76.99.211.5 30％聚丙烯酰胺混合液2.54.2557.58.751012.5152025 1.5M Tris(pH=8.8)1.32.212.53.84.5556.37.
包涵体表达蛋白的纯化方法
Joseph SambrookPeter Maccallum Cancer Institute and The University of Melbourne, AustraliaDavid W. RussellUniversity of Texas Southwestern Medical Cen
从包涵体中纯化表达蛋白
实验方法原理蛋白质在大肠杆菌中的高水平表达，常常导致形成相差显微镜下可见的细胞质颗粒或包涵体。这些由表达蛋白聚集成的包涵体很容易与可溶性蛋白和膜结合蛋白分离。高水平表达外源蛋白的细菌经离心浓缩后，可通过机械法、超声处理法或溶菌酶加去污剂的方法进行裂解。包涵体经离心沉淀后，可用Triton X-100