利用“无创”技术检测活细胞中荧光蛋白表达(三)
细胞混合结果在本次实验中,我们在一个96孔板里混合了多种细胞,保证每个孔大约50,000个细胞。因此,如果是1:1混合,那么每种细胞会有25,000个。如果是1:1:1混合,那么每种细胞将有16,700个。实验板分别用480/510nm(AsGFP和ZsGreen的优化结果)和550/588nm(DsRed设置)的激发和发射来检测。观察到的RFU值与预测值接近。结果总结如下。结果显示,AsGFP和ZsGreen可以和DsRed一起检测,反之亦然。(见图表4)结论Molecular Devices公司的荧光功能微孔板读板机可以检测完整贴壁细胞中的荧光蛋白。波长扫描可调的功能可以优化每一种独特荧光染料的波长结果。底读模式提供最佳检测灵敏度,顶读模式也可以提供可利用的数据,尤其是对含有ZsGreen和DsRed的细胞系。顶读模式检测DsRed细胞系时,可以通过替换无色培养基来达到优化实验结果的目的。......阅读全文
利用“无创”技术检测活细胞中荧光蛋白表达(三)
细胞混合结果在本次实验中,我们在一个96孔板里混合了多种细胞,保证每个孔大约50,000个细胞。因此,如果是1:1混合,那么每种细胞会有25,000个。如果是1:1:1混合,那么每种细胞将有16,700个。实验板分别用480/510nm(AsGFP和ZsGreen的优化结果)和550/588nm(D
利用“无创”技术检测活细胞中荧光蛋白表达(二)
结果波长优化用GeminiEM对DsRed进行波长扫描,以此举例如何进行波长优化。为了检测最大激发波长,我们首先固定发射波长为600nm,然后对发射波长进行扫描。扫描结果显示最大激发波长为556nm(图1)。同样为了检测最大发射波长,我们固定激发波长为535nm,然后扫描发射波长,从而得到584nm
利用“无创”技术检测活细胞中荧光蛋白表达(一)
简介在过去的五年中,荧光蛋白在监测体内生物学研究中,起到越来越重要的作用。源于维多利亚多管发光水母中的绿色荧光蛋白(GFP)是最早被我们应用的荧光蛋白,但是随着时间的推移,现在我们可以使用的荧光蛋白种类也越加丰富,包括加强型的变异GFP蛋白、从其他种类水母中发现的荧光蛋白和珊瑚礁蛋白。它们都可以在众
酶标仪利用”无创”技术检测活细胞荧光蛋白(三)
在本次实验中,ZsGreen和DsRed细胞系在底读模式都有着相似的检测限,而且两者都比AcGFP细胞系的检测下限低3到4倍。本次实验一共重复了三次,但是DsRed实验结果并不是每次都能表现的足够好。在一次实验中,它的检测下限近似于AcGFP,但是在另一次实验中,它的检测下限又会很高。我们将这些区别
酶标仪利用”无创”技术检测活细胞荧光蛋白
在过去的五年中,荧光蛋白在监测体内生物学研究中,起到越来越重要的作用。源于维多利亚多管发光水母中的绿色荧光蛋白(GFP)是zui早被我们应 用的荧光蛋白,但是随着时间的推移,现在我们可以使用的荧光蛋白种类也越加丰富,包括加强型的变异GFP蛋白、从其他种类水母中发现的荧光蛋白和珊瑚礁蛋 白。它们都可以
酶标仪利用”无创”技术检测活细胞荧光蛋白(二)
下一步就是要结合信号/背景优化结果确定最佳激发和发射波长。因为初步检测结果的斯托克顿位移偏小(22nm),显然是要通过降低激发波长和增大发射波长来扩大两者之间的差异,其次还需要找到合适的发射光阻隔滤片优化最佳灵敏度。最终,我们使用5 5 0nm的激发波长来激发, 同时使用570nm的发射光阻
酶标仪利用”无创”技术检测活细胞荧光蛋白(一)
简介在过去的五年中,荧光蛋白在监测体内生物学研究中,起到越来越重要的作用。源于维多利亚多管发光水母中的绿色荧光蛋白(GFP)是最早被我们应用的荧光蛋白,但是随着时间的推移,现在我们可以使用的荧光蛋白种类也越加丰富,包括加强型的变异GFP蛋白、从其他种类水母中发现的荧光蛋白和珊瑚礁蛋白。它们都可以在众
无细胞蛋白表达技术介绍
无细胞蛋白表达技术是指用含有蛋白合成必需的组分(核糖体,转运RNA,氨酰合成酶,启动/延伸/终止因子,三磷酸鸟苷,ATP,Mg2+和K+)的细胞裂解物在体外进行蛋白合成。与传统的基于细菌或真核细胞的蛋白表达系统相比较,无细胞蛋白表达系统具有独特的优势,包括节约时间、提高具有功能的、可溶的、全长蛋白的
NanoString技术检测微创穿刺样品蛋白表达
NanoString技术由于其高灵敏度,高重复性并且检测过程中不需要进行反转录和扩增,一经推出便受到了广泛的关注和认可。现在这项技术广泛的应用在基因表达(mRNA),小RNA(miRNA),拷贝数变异(CNV),长链非编码RNA(lncRNA)等方面的检测,但是这些检测的对象都是核酸,对于细胞蛋白的
利用石墨烯无创检测癌症
不同的细胞与石墨烯之间有着不同的相互作用。正常细胞和癌症细胞分别与石墨烯发生相互作用,通过拉曼成像技术,可以分辨两种细胞的不同活性。(图片来源:UIC/Vikas Berry) 有什么是石墨烯办不到的?检测癌症?不,石墨烯现在可以用于检测癌症了。 伊利诺伊大学芝加哥分校(University
无细胞表达系统——难度蛋白表达的福音
1964年有两个人开创了体外蛋白表达的先河,这两个人的名字大家必定不会陌生—马太和尼伦伯格。因为他们的创新思维让人类破译了编码氨基酸的64种翻译密码子。从此,体外蛋白表达开始为科学界所关注,不过彼时这个系统蛋白表达量低、持续时间短、稳定性差,使其未能得到进一步发展。 到80年代中期Sp
无细胞表达系统——难度蛋白表达的福音
1964年有两个人开创了体外蛋白表达的先河,这两个人的名字大家必定不会陌生—马太和尼伦伯格。因为他们的创新思维让人类破译了编码氨基酸的64种翻译密码子。从此,体外蛋白表达开始为科学界所关注,不过彼时这个系统蛋白表达量低、持续时间短、稳定性差,使其未能得到进一步发展。到80年代中期Spirin等对其进
肿瘤无创诊断技术在癌症检测中应用
肿瘤无创诊断技术即液体活检(liquid biopsies)的出现,标志着人类在攻克肿瘤的道路上又前进了一大步。2015年液体活检技术被MIT科技综述杂志(MIT Technology Review)评为年度十大突破技术之一;2017年6月,世界经济论坛与《科学美国人》杂志的专家委员会联合选出的
肿瘤无创诊断技术在癌症检测中应用
肿瘤无创诊断技术即液体活检(liquid biopsies)的出现,标志着人类在攻克肿瘤的道路上又前进了一大步。2015年液体活检技术被MIT科技综述杂志(MIT Technology Review)评为年度十大突破技术之一;2017年6月,世界经济论坛与《科学美国人》杂志的专家委员会联合选出的2
无细胞蛋白表达系统的选择
图1. 与细胞内蛋白表达相比,无细胞蛋白表达系统能够显著地节约时间。 与基于细胞的蛋白表达系统相比较,无细胞蛋白表达系统具有独特的优势,包括节约时间、提高具有功能的、可溶的、全长蛋白的总体产量。本文介绍了根据模板类型、期望产率以及下游实验等因素来选择无细胞蛋白表达系统的标准。
无创血糖检测技术面世
糖尿病的发病率逐渐增加,中国糖尿病的患者数量早就超过1亿人,对糖尿病患者来说,测定血糖是一个必须经常进行的检测,而常规的血糖检测方法必须采集血液,采血一般通过手指针刺或静脉穿刺,毕竟会给患者带来一定伤害。另外常规血糖检测难以进行实时分析,这给通过药物控制血糖带来一定局限。那么有没有办法采用更简单
三医院试点“无创DNA检测”
抽取母体少量血浆,就能检测出胎儿是否存在三种染色体异常,判断胎儿是否智力发育迟缓、四肢是否畸形。 2月4日,记者从安医大一附院获悉,在近日经国家卫计委审批获准开展高通量基因测序产前筛查与诊断(即俗称的“无创DNA”检测)临床试点的109家医疗机构,我省有3家医院“榜上有名”。 “高通量基因测序
无创血糖检测技术面世(图)
糖尿病的发病率逐渐增加,中国糖尿病的患者数量早就超过1亿人,对糖尿病患者来说,测定血糖是一个必须经常进行的检测,而常规的血糖检测方法必须采集血液,采血一般通过手指针刺或静脉穿刺,毕竟会给患者带来一定伤害。另外常规血糖检测难以进行实时分析,这给通过药物控制血糖带来一定局限。那么有没有办法采用更简单的方
-无创性肺癌检测技术即将登陆中国
最新一项研究成果可以帮助医生从患者的唾液中检测肺癌的生物标志物,从而方便早期诊断。 这项无害的技术能够从唾液中检测肿瘤特异性DNA,相比传统的诊断手段,该方法能够大幅缩短等待结果的时间,以及降低成本与提高便利程度。 在2016年美国科学促进会年会上,来自加州洛杉矶分校的牙科学院副院长Davi
高通量测序技术在无创产前检测中的应用
染色体非整倍体是胎儿出生缺陷最常见病因之一,其中以21-三体综合征、18-三体综合征最为常见,占所有足月妊娠的0.2%~0.3%。对先天性遗传病进行产前筛查和产前诊断是优生优育的重要保证。自1970年以来,针对上述胎儿染色体疾病的产前筛查和产前诊断已逐渐应用到临床上,并在降低出生缺陷方面得到了良好的
无创产前检测
无创产前检测(NIPT)越来越受到大家的重视,检验科在无创产前检测方面的工作也越来越多。什么是无创产前检测?1997 年香港中文大学的卢煜明(Dennis L)教授发现在母体外周血浆中存在胎儿游离 DNA。这种胎儿游离 DNA 来自于胎盘滋养层细胞,在怀孕后 5 周就可检测到,怀孕 10 周
U糖停售无创血糖检测设备-无创检测难过审批
近日,伴随着声势浩大的新闻发布会上市的,号称“中国首台无创血糖检测”,并希望以此为基础建设第三方数据开放平台及智能硬件生态链的无创血糖检测设备——U糖被暂缓销售,其主要原因为U糖无创血糖检测设备仍未获医疗注册许可,且获批难度很大,因此暂缓上市。 据U糖官网显示,就在首批设备预定时间即将终止的时
无创DNA检测的“创口”:真能保证“无创”吗
近日,一篇《华大癌变》的文章在微信朋友圈流传,让无创DNA产前检测技术(NIPT)再次进入公众视野。低风险、高筛查率,这项让医疗机构、商业公司乃至患者“推崇”的新技术,却依然无法避免唐氏综合征患儿的诞生。 由此,曾经“包打天下”的产前检测技术遭到质疑:“无创”的DNA检测真的能保证“无创”吗?
利用鼻子来急救,无创更安全
一项新的研究结果显示,现如今越来越多的美国急救室选择利用鼻子来急救,或将取代普通打针或者静脉注射。日前,来自美国洛约拉大学健康系统的研究人员发表报告称,利用鼻子来急救不仅简单,快速而且还是无创的。 在急救过程中,医生或者护士只需要把雾化器连接到患者的鼻孔中,接着,他们通过推动活塞使雾化药物进入
利用合成的细菌无创地从尿液中检测到糖尿病和癌症
研究人员设计出了分别能在尿中无创检测糖尿病和癌症的细菌。由两个独立的小组所进行的这些研究为在诊所中用人工合成细菌作为诊断工具打下了基础。合成生物学在设计活细胞来发挥特殊功用上已经取得了进展;这些特殊功用包括从生产或输送药物至在体内探查疾病及在环境中探查毒素。细胞(通常是细菌)能以目前诊断装置所不
4大基因测序技术在无创性产前检测中的应用
近年来,通过高通量测序技术检测孕妇外周血中游离胎儿DNA(cfDNA)筛查胎儿染色体多倍体异常的无创性产前检测( noninvasive prenatal testing, NIPT)技术正越来越多地用于临床,其具有安全性、高效性及准确率高的特点,正在给产前诊断技术带来革命性的变化。NIPT技术
详解无创产前检测
无创产前检测(NIPT)越来越受到大家的重视,检验科在无创产前检测方面的工作也越来越多。什么是无创产前检测?1997 年香港中文大学的卢煜明(Dennis L)教授发现在母体外周血浆中存在胎儿游离 DNA。这种胎儿游离 DNA 来自于胎盘滋养层细胞,在怀孕后 5 周就可检测到,怀孕 10 周
研究人员实现利用外泌体无创检测干细胞移植有效性
马里兰大学医学院(UMSOM)、宾夕法尼亚大学(University of Pennsylvania)和埃默里大学(Emory University)的研究人员在Science Translational Medicine上发表了题为“Circulating exosomes derived f
研究人员实现利用外泌体无创检测干细胞移植有效性
2019年5月22日,马里兰大学医学院(UMSOM)、宾夕法尼亚大学(University of Pennsylvania)和埃默里大学(Emory University)的研究人员于Science Translational Medicine发表了题为“Circulating exosomes
无创产前基因检测实用问答无创产前基因检测实用问答
Q:我一定要做无创产前基因检测吗?A:没有人强迫你做任何事情,也没有人能够预测谁的孩子会患有唐氏综合征。无创产前基因检测可能是目前针对正常孕妇预防唐氏综合征最有效的手段。如果你没有羊水染色体检测的指征,建议你在怀孕期间接受无创产前基因检测。Q:无创产前基因检测能预防什么病?A:无创产前基因检测针对的