中科院生物物理所:从结构上揭示Cas13a切割RNA机制

CRISPR/Cas系统是目前发现存在于大多数细菌与所有的古菌中的一种免疫系统,被用来识别和摧毁抗噬菌体和其他病原体入侵的防御系统。在CRISPR/Cas系统中,CRISPR是规律间隔性成簇短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats)的简称,涉及细菌基因组中的独特DNA区域,也是储存病毒DNA片段从而允许细胞能够识别任何试图再次感染它的病毒的地方,CRISPR经转录产生的RNA序列(被称作crRNA)识别入侵性病毒的遗传物质。Cas是CRISPR相关蛋白(CRISPR-associated proteins, Cas)的简称,Cas蛋白像一把分子剪刀那样切割细菌基因组上的靶DNA。 目前已在细菌中发现三类CRISPR/Cas系统,I型和III型系统需要众多蛋白的参与。II型系统就简单得多了,一个Cas9核酸酶利用向导RNA(gRNA)就......阅读全文

反义技术——RNA干扰(RNA-interference,RNAi)

最近由于RNA干扰(RNA interference,RNAi)的发现使反义领域的研究增多。这种自然发生的现象最早是在秀丽线虫中发现的(1),是序列特异性地使转录后的基因沉默的有力机制。由于最近两年在RNAi领域取得的进步,已经有许多这方面的综述发表(2-4)。RNA干扰是由长的双链 RNA

RNA干扰相关知识RNARISC

RNA-induced silencing complex(RISC):一种RNA-蛋白质复合物,通过与目标mRNA完全或者部分的互补配对来实施切割或者翻译抑制功能。SiRNA组装siRISC,miRNA组装miRISC。RISCs(无论siRISC还是miRISC)包括两种类型:切割型和不切割型。

2017年5月CRISPR/Cas亮点盘点

  基因组编辑技术CRISPR/Cas9被《科学》杂志列为2013年年度十大科技进展之一,受到人们的高度重视。CRISPR是规律间隔性成簇短回文重复序列的简称,Cas是CRISPR相关蛋白的简称。CRISPR/Cas最初是在细菌体内发现的,是细菌用来识别和摧毁抗噬菌体和其他病原体入侵的防御系统。  

曾经被全球唾弃的韩春雨,默默地发明了RNA成像系统

  近日,韩春雨在预印本网站BioRxiv发表了一篇关于基因编辑的新论文:Background free tracking of single RNA in living cells using catalytically inactive CasE.该研究开发了一种新型的活细胞RNA追踪成像工具—

RNA-剪接

中文名称RNA 剪接英文名称RNA splicing定  义在真核细胞核中从RNA初始转录物切除内含子,连接外显子形成成熟的mRNA的过程。应用学科细胞生物学(一级学科),细胞遗传(二级学科)

RNA-Electrophoresis

Electrophoresis through agarose or polyacrylamide gels is the standard way to separate, identify and purify nucleic acid fragments. The location of th

RNA电泳

RNA Gel (Crawford Lab)Gel Electrophoresis of RNA (Beverly Faulkner-Jones)great tips on RNA gel electrophoresis.Northern Gel and  TransferUsing glyoxal

RNA-电泳

①电泳RNA 所用器械如制胶的模具、梳子、电泳槽等用肥皂粉洗干净后用双蒸水冲洗二遍后在室温晾干备用。②用新的1XTBE 配制1. 2 %琼脂糖凝胶,倒胶时溴化乙锭(E直接加入凝胶中。③制备好的琼脂糖凝胶板放入电泳槽后再加入经高压灭菌过的1XTBE ,液面只能刚好同胶面平齐,缓冲液不要淹过胶面。④点样

RNA电泳

·         RNA Gel (Crawford Lab)·         Gel Electrophoresis of RNA (Beverly Faulkner-Jones)great tips on RNA gel electrophoresis. ·         Northern

RNA提取

RNA提取(主要内容如下)Tips for Handing RNA Total RNA IsolationmRNA IsolationrRNA IsolationOthersQ & A posted in the Method Forum  Basic Procedures for Handing

Quantitating-RNA

RNA quantitation is an important and necessary step prior to most RNA analysis methods. Here we discuss three common methods used to quantitate RNA an

指导RNA

中文名称指导RNA英文名称guide RNA;gRNA定  义一种小分子RNA,约含60~80个核苷酸,在RNA编辑中起模板作用。其功能是提供核苷酸插入或删除的信息。由小环DNA及大环DNA编码的指导RNA均带有编辑区的序列信息,可介导编辑过程。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),基因表达与调

RNA标记

RNA labeling (Amersham Pharmacia)For the generation of radiolabelled, single stranded RNA for use as hybridization probes  32P-pCp 3' End-labeling

RNA标记

RNA标记是将标记物(如放射性同位素、荧光素或酶)共价地连接到RNA,通过检测标记物,进而实现对RNA鉴别和检测的目的。RNA标记在分子探针领域应用广泛,在疾病诊断方面也很有前景。 理想的RNA标记方法应符合以下要求: 1.  操作简单,灵敏度高 2.  不影响碱基配对的特异性 3.  不影响RN

RNA降解

新鲜细胞:如果试剂没有问题,且外源性污染也可以排除,那么降解几乎都来自裂解液的用量不足。如  果将裂解液直接加入培养皿中裂解细胞,一定要使裂解液能覆盖住细胞。 2. 新鲜组织:某些富含内源核酸酶的样品(如肝脏,胸腺等),即使使用电动匀浆器匀浆也不能避免RNA的降解。更可靠的方法是:在液氮条件下将组织

Nature子刊:-CRISPR/Cas系统的多功能“RNA剪刀”

  天然的CRISPR/Cas系统广泛存在于细菌和古细菌,它是微生物的免疫系统,帮助细菌抵御病毒入侵。成簇的规律间隔的短回文重复序列(Clustered Regularly Interspersed Short Palindromic Repeats,CRISPR)-衍生RNAs(crRNAs)对C

关于小干扰RNA的RNA激活介绍

  已经发现dsRNA还可以激活基因表达,这种机制被称为“小RNA诱导的基因激活”或RNAa。已经显示靶向基因启动子的dsRNA诱导相关基因的有效转录激活。使用合成的dsRNA在人细胞中证明RNAa,称为“小活化RNA”(saRNA)。尚不清楚RNAa是否在其他生物体中是保守的。

RNA干扰相关知识Small-interfering-RNA(siRNA)

Small interfering RNA(siRNA):是一种小RNA分子(~21-25核苷酸),由Dicer(RNAase Ⅲ家族中对双链RNA具有特异性的酶)加工而成。SiRNA是siRISC的主要成员,激发与之互补的目标mRNA的沉默。

CRISPR/Cas9:基因编辑的历史与发展

CRISPR/Cas系统是细菌和古菌特有的一种天然防御系统,用于抵抗病毒或外源性质粒的侵害。当外源基因入侵时,该防御系统的 CRISPR 序列会表达与入侵基因组序列相识别的 RNA,然后 CRISPR 相关酶(Cas)在序列识别处切割外源基因组DNA,从而达到防御目的。根据Cas蛋白的特点,可将CR

Science聚焦:球形RNA让RNA疗法重获新生

  几十年来,RNA疗法在治疗遗传疾病的道路上走得并不顺遂。不过,随着新型RNA(球形核酸SNA)在人体试验中取得成功,这一领域似乎焕发出新的活力。Science网站特别撰文介绍了这项重要突破。  RNA疗法一般是用反义RNA破坏疾病相关蛋白的生产。在美国化学学会(ACS)上周的一次会议上,研究人员

纯化RNA实验——从组织中纯化总RNA

实验材料组织试剂、试剂盒RNA 抽提缓冲液氯仿实验步骤1. 从动物取下组织,直接进行第 2 步或在液氮中快速冷冻新鲜解剖的组织。冷冻后的组织可以贮存在 -70℃。2. 组织(0.05~0.3 g)在 2.0 ml RNA 抽提缓冲液中匀浆。3. 每管加 200 μl 氯仿,混合均匀,冰浴 15 分钟

什么是RNA?RNA的作用是什么?

核糖核酸(缩写为RNA,即Ribonucleic Acid),存在于生物细胞以及部分病毒、类病毒中的遗传信息载体。RNA由核糖核苷酸经磷酸二酯键缩合而成长链状分子。一个核糖核苷酸分子由磷酸,核糖和碱基构成。RNA的碱基主要有4种,即A(腺嘌呤)、G(鸟嘌呤)、C(胞嘧啶)、U(尿嘧啶),其中,U(尿

RNA干扰(RNA-interference,RNAi)基础知识(2)

1RNA i的发现RNA i是在研究秀丽新小杆线虫(C. elegans)反义RNA (antisenseRNA )的过程中发现的,由dsRNA 介导的同源RNA 降解过程。1995年,Guo等发现注射正义RNA (senseRNA )和反义RNA 均能有效并特异性地抑制秀丽新小杆线虫par

RNA干扰(RNA-interference,RNAi)基础知识(1)

Rnai最近由于RNA 干扰(RNA interference,RNA i)的发现使反义领域的研究增多。这种自然发生的现象最早是在秀丽线虫中发现的(1),是序列特异性地使转录后的基因沉默的有力机制。由于最近两年在 RNA i领域取得的进步,已经有许多这方面的综述发表(2-4)。RNA 干扰是

什么叫做外源性RNA和内源性RNA

核糖核酸(缩写为RNA,即RibonucleicAcid),存在于生物细胞以及部分病毒、类病毒中的遗传信息载体。RNA由核糖核苷酸经磷酸二酯键缩合而成长链状分子。一个核糖核苷酸分子由磷酸,核糖和碱基构成。RNA的碱基主要有4种,即A腺嘌呤、G鸟嘌呤、C胞嘧啶、U尿嘧啶,其中,U(尿嘧啶)取代了DNA

RNA干扰(RNA-interference,RNAi)基础知识(3)

SiRNASmall interfering RNA (siRNA):是一种小RNA分子(~21-25核苷酸),由Dicer(RNAase Ⅲ家族中对双链RNA具有特异性的酶)加工而成。SiRNA是siRISC的主要成员,激发与之互补的目标mRNA的沉默。ShRNAshRNA 短发夹RNAshRNA

Science:重大进展!揭示功能多样化的V型CRISPRCas系统

  古生菌和细菌的CRISPR/Cas系统保护它们的宿主免受噬菌体和其他的可移动遗传元件的影响。根据最新的分类标准,CRISPR/Cas系统可分为两大类:第1类CRISPR/Cas系统和第2类CRISPR/Cas系统。  第1类CRISPR/Cas系统分为I型CRISPR/Cas系统(标签基因为Ca

生物物理所在IIIE型CRISPRCas系统研究方面取得进展

  CRISPR-Cas系统广泛存在于细菌、古菌和某些细菌的病毒中(bacteriophage),可以特异性识别并降解外源入侵的基因。根据CRISPR-Cas系统干扰机制的不同,这些系统被分为两类,即Class1和Class2。Class1由多个蛋白构成效应复合物(包括I、III和IV型),Clas

RNA提取原理

RNA抽取一般使用Trizol法抽提:Trizol是一种总RNA抽提试剂,内含异硫氰酸胍等物质,能迅速裂解细胞,抑制细胞释放出的核酸酶活性。目前常用Trizol法进行提取组织或细胞中的RNA。Trizol作用原理:在匀质化或溶解样品中,Trizol试剂可保持RNA的完整性,同时能破坏细胞及溶解细胞成

RNA加工修饰

中文名RNA加工修饰所属领域生物学定义RNA加工修饰,主要加工方式是切断和碱基修饰,真核生物tRNA前体一般无生物学特性,需要进行加工修饰。