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荧光实验影响因素及其排除办法

在测量溶液的荧光强度时,通常应注意溶剂的散射光(瑞利散射和拉曼散射)、胶粒的散射光(丁铎尔效应)以及容器表面的散射光的影响问题。上述几种散射光除拉曼散射外均具有与激发光相同的波长。拉曼散射光的波长与激发波长不同,通常要比激发波长稍长一些,且随激发波长的改变而改变,但与激发波长维持一定的频率差。散射光的干扰常是提高荧光灵敏度的主要限制因素,因而实际工作中要注意加以克服。选择适当的激发波长和测定波长,可以大大降低或排除散射光的影响。在测量微弱的荧光强度时,常要加大狭缝宽度以获得足够的荧光强度测量值,但狭缝加大后散射光的影响也将加大,因而实际测定时应选择合适的狭缝宽度。通过空白测定,亦可对散射光的影响进行校正。 下面分别介绍各种环境因素对荧光光谱和荧光强度的影响及其相应的解决办法。 虽然物质产生荧光的能力主要取决于其分子结构,然而环境因素尤其是介质对分子荧光可能产生强烈的影响。了解和利用......阅读全文

空白试验值偏高,可能是这些原因

  当空白试验值偏高时,影响因素有很多,例如:试验用水、试剂、量器和容器的沾污、测量仪器的性能及试验环境的状态等,需要具体案例具体分析。   空白试验测得的结果称为空白试验值。在进行样品分析时所得的值减去空白试验值得到的才是最终分析结果。空白试验值反应了测试仪器的噪声、试剂中的杂质、环

拉曼问题汇总:拉曼光谱百问解答总结!

拉曼光谱(Raman Spectra),是一种散射光谱。拉曼光谱分析法是基于印度科学家C.V.拉曼(Raman)所发现的拉曼散射效应,对与入射光频率不同的散射光谱进行分析以得到分子振动、转动方面信息,并应用于分子结构研究的一种分析方法。今天分享一些问答集锦,希望对你有帮助。一、测试了一些样品,得到的

原子吸收光谱仪实验室200问答

   原子吸收光谱仪是分析化学领域中一种极其重要的分析方法,但是很多用户在使用过程中经常会遇到这样或者那样的问题,比如标准曲线的线性不好、数据不稳定、空白值较高、漂移很大等问题。  本文是原子吸收光谱仪在使用过程中经常遇到的200个问题及解决方案,这是广大原子吸收光谱仪一线用户的

原子荧光检测中的试剂影响及解决办法

原子荧光检测中的试剂影响及解决办法:1 介质的影响依据原子荧光光度计工作原理,氢化物反应是在酸性介质中发生的,当酸的纯度较低时,空白值会偏高且极不稳定。多数情况下某些介质只影响一种元素而不影响其它元素的检测。故障表现为测定某种元素前,试剂空白测试时,经常出现荧光强度在1000~8000范围

关于拉曼光谱的83个问答总结(上)

  一、测试了一些样品,得到的是Ramanshift,但是文献是wavenumber,不知道它们之间的转换公式是怎么样的?激光波长632.8nm。  1. 两者是一回事。ramanshift即为拉曼位移或拉曼频移,频率的增加或减小常用波数差表示,拉曼光谱仪得到的谱图横坐标就是波数

色谱柱相关的100个问题

  色谱柱可分为填充柱和开管柱两大类。多为金属或玻璃制作。有直管形、盘管形、U形管等形状。液相色谱通常均采用填充柱。色谱柱的分离效果取决于所选择的固定相,以及色谱柱的制备和操作条件。  1、网上对柱子是否可以反冲一直有争论,那什么样的柱子可以反冲,什么不可以。反冲后是正者用,还是反着用。具体到各型号

活体生物发光成像技术的最新进展

活体动物体内光学成像(Optical in vivo Imaging)主要采用生物发光(bioluminescence)与荧光(fluorescence)两种技术。生物发光是用荧光素酶(Luciferase)基因标记细胞或DNA,而荧光技术则采用荧光报告基团(GFP、RFP, Cyt及dyes等)进

FCM对外周白细胞的免疫荧光分析

外周血是临床检验中的重要标本。FCM分析外周白细胞的主要目的是了解各种白细胞的数目与分群情况。这些数字的变化与临床的某些疾病有一定的关系。近年来,由于多种识别白细胞膜表面抗原的单克隆抗体的发现,以及对这些单克隆抗体的直接或间接荧光标记物的出现,使得利用FCM的荧光组织化学分析获得被测细胞的多指标的更

FCM对外周白细胞的免疫荧光分析

外周血是临床检验中的重要标本。FCM分析外周白细胞的主要目的是了解各种白细胞的数目与分群情况。这些数字的变化与临床的某些疾病有一定的关系。近年来,由于多种识别白细胞膜表面抗原的单克隆抗体的发现,以及对这些单克隆抗体的直接或间接荧光标记物的出现,使得利用FCM的荧光组织化学分析获得被测细胞的多指标的更

盘绕螺旋结构的设计和优化技巧实验

虽然表观上简单,盘绕螺旋(coiled coil ) 模体是高度专一的,并在理解三级结构及其形成方面具有重要意义。最常观察到的盘绕螺旋形态——平行二聚态,其一般的结构类型仍有待全面的描述。尽管如此,其结构已呈现出在某些特定位置需要某些特定类型氨基酸的严格规则。本实验来源「现代蛋白质工程实验指南」〔德

盘绕螺旋结构的设计和优化技巧实验

盘绕螺旋结构的设计和优化技巧             实验步骤 本节讨论盘

必收藏丨超全面拉曼光谱、红外光谱、XPS的原理及应用干货

  拉曼光谱的原理及应用  拉曼光谱由于近几年来以下几项技术的集中发展而有了更广泛的应用。这些技术是:CCD检测系统在近红外区域的高灵敏性,体积小而功率大的二极管激光器,与激发激光及信号过滤整合的光纤探头。这些产品连同高口径短焦距的分光光度计,提供了低荧光本底而高质量的拉曼光谱以及体积小、容易使用的

流式细胞术荧光那些事儿

自上世纪70年代问世以来,流式细胞术(FCM)在基础科研和临床诊断和治疗上得到了越来越广泛的应用。但是,做FCM往往会遇到荧光信号太弱的情况。好不容易搞了一管细胞去做流式,却做不出荧光信号。真的是急死个人。其实,毛博也是到米国做博士猴以后才开始做流式的。时间不算长。但是做得非常非常多。每天都要做好几

核酸抽提经验及原理

1、核酸抽提原理 简单地讲,核酸抽提包含样品的裂解和纯化两大步骤。裂解是使样品中的核酸游离在裂解体系中的过程,纯化则是使核酸与裂解体系中的其它成分,如蛋白质、盐及其它杂质彻底分离的过程。 经典的裂解液几乎都含有去污剂 (如 SDS、Triton X-100、NP-40、Tween 20 等

原子吸收光谱仪实验室200问答

  八十一、我使用的仪器是美析的AA-1800配置标准溶0.5ug/ml,1.0,1.5,2.0,ph值在1-1.7之间,用的硝酸,一次蒸馏水,可是吸收度总是上不去,相邻的吸收度才0.015左右,数据间隔太小了,使用的普线是2138,狭缝为0.4,请问怎样调整才能提高吸

Real time PCR试剂质量的评价

临床使用PCR定量检测核酸,由于手工操作多、影响因素多,质量控制比较困难,在增强操作能力和仪器设备的基础上,选择好的PCR试剂是保证检测质量非常重要的关键。一、通过实时荧光PCR扩增曲线评价【扩增曲线图解读】实时荧光PCR由于每个循环要监测荧光信号值,因此都有拟合好的扩增曲线,通过扩增曲线可以很直观

二维凝胶的定量分析实验

仪器、耗材开放源代码软件实验步骤3.1 实验设计1. 平行设计不同凝胶之间部分蛋白质点的量变是不可控的。重复样品之间或从蛋白质样品制备到二维凝胶染色的任何步骤的生物学差异,都是这些不可控变化的原因。已经表明,批次效应(即不同系列同时运行电泳和染色的二维凝胶的变化)对二维电泳的结果影响很大,因此在实验

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仪器、耗材开放源代码软件                                       &nbs

实时定量PCR应用中的优化方案(二)

实践中的问题实时定量PCR已广泛地运用于分子生物学的各个领域,就目前的应用情况来看,虽然取得了很好的效果,但是其在方法学上的选择、敏感性问题、重复性问题等都一直是争论不休的,本文将就这些问题做出探讨。1. 方法的选择:研究者在实验中往往想要得到目的基因的绝对量,因为绝对定量对目的基因的表达差异有直接

荧光原位杂交技术检测植物基因组中整合的转基因片段...

实验材料核苷酸                                         &n

荧光原位杂交技术检测植物基因组中整合转基因片段实验

实验材料核苷酸试剂、试剂盒冰水8-羟基喹啉秋水仙素固定剂酶解缓冲液仪器、耗材载玻片玻璃盖玻片解剖针及镊子实验步骤原位杂交的基本操作方法(图 14 .2 ) 演化自 Southern 杂交:标底是玻片上的染色体和细胞核,探针是带标记的待测 DNA 序列 [ 本书中即是转基因和对照,图 14.3(a)

干细胞实验技术入门

《Science》刚刚公布的十大科学突破中,占据首位就是细胞重新编程技术(iPS,induced pluripotent stem cells),这一才初初“面世”一年的干细胞 技术引发了生命科学研究领域的极大震动,引用《科学》杂志负责新闻的副主编Robert Coontz的话就是“这项研

CD34阳性细胞计数-2

其他研究组也对影响计数结果的因素进行了广泛的检查,如通过提供统一试剂或发行标准分析方案来进行。尽管这些研究减少了一些检测差异,但要进一步地提高实验的精确性需对各个检测中心进行全面的培训并发展标准的计数方案。此项工作由Nordic Myeloma研究组广泛开展,他们组织了两个协作组来制定计数标准方案并

QPCR常见问题及其分析

一般来讲,进行real-time qPCR MasterMix都是2×的浓缩液,只需要加入模板和引物就可以。由于real-time qPCR灵敏度高,所以每个样品至少要做3个平行孔,以防在后面的数据分析中,由于Ct相差较多或者SD太大,无法进行统计分析。通常来讲,反应体系的引物终浓度为10

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一般来讲,进行real-time qPCR MasterMix都是2×的浓缩液,只需要加入模板和引物就可以。由于real-time qPCR灵敏度高,所以每个样品至少要做3个平行孔,以防在后面的数据分析中,由于Ct相差较多或者SD太大,无法进行统计分析。通常来讲,反应体系的引物终浓度为10

检测器噪音与基线噪音如何造成的

  首先说一说示差检测器,此物全称示差折光检测器,洋名Refractive Index Detector,简称RID,它的工作原理,就是检测折光率的变化,所以,更有逻辑的名字应该叫做“示折光差检测器”...既然是这样,大家应该可以理解这个检测器的工作原理了,流动相的携带样品,当样品经过检测器的时候,

QPCR常见问题及其分析

一般来讲,进行real-time qPCR MasterMix都是2×的浓缩液,只需要加入模板和引物就可以。由于real-time qPCR灵敏度高,所以每个样品至少要做3个平行孔,以防在后面的数据分析中,由于Ct相差较多或者SD太大,无法进行统计分析。通常来讲,反应体系的引物终浓度为100-400

“荧光”也能测血糖!

  随着患病率逐年攀升,糖尿病在世界各地正成为日益严重的公共健康问题。但是,目前通常使用的血糖测量仪仍有诸多不便的地方。例如,血糖试纸需要在封闭干燥的环境下储存,取出来后在5分钟内用完,否则会因试纸受潮而影响测量准确性。与此同时,还需要刺手指取血,“测一次疼一次”也会让不少人对血糖检测望而却步。  

PCR简介及污染的处理 高速离心机

何谓PCR,简单的说,PCR就是利用DNA聚合酶对特定基因做体外或试管内 In Vitro 的大量合成。基本上它是利用DNA聚合酶进行专一性的连锁复制.目前常用的技术,可以将一段基因复制为原来的一百亿至一千亿倍。 PCR的要素基本的PCR须具备1.要被复制的DNA模板 Template 2

PCR简介及污染的处理

PCR技术简介  前言 一滴残留在裙子上的精液使得美国总统Bill Clinton不得不坦承他与白宫实习生有不正当的关系。因为他知道现在的生物科技就连一个精子也能被用来做为证据。这种将极微量的生物标本化为可供鉴定的现代技术正是PCR(Polymerase chain reacti