荧光实验影响因素及其排除办法
在测量溶液的荧光强度时，通常应注意溶剂的散射光（瑞利散射和拉曼散射）、胶粒的散射光（丁铎尔效应）以及容器表面的散射光的影响问题。上述几种散射光除拉曼散射外均具有与激发光相同的波长。拉曼散射光的波长与激发波长不同，通常要比激发波长稍长一些，且随激发波长的改变而改变，但与激发波长维持一定的频率差。散射光的干扰常是提高荧光灵敏度的主要限制因素，因而实际工作中要注意加以克服。选择适当的激发波长和测定波长，可以大大降低或排除散射光的影响。在测量微弱的荧光强度时，常要加大狭缝宽度以获得足够的荧光强度测量值，但狭缝加大后散射光的影响也将加大，因而实际测定时应选择合适的狭缝宽度。通过空白测定，亦可对散射光的影响进行校正。 下面分别介绍各种环境因素对荧光光谱和荧光强度的影响及其相应的解决办法。 虽然物质产生荧光的能力主要取决于其分子结构，然而环境因素尤其是介质对分子荧光可能产生强烈的影响。了解和利用......阅读全文
荧光染料增殖实验
CFSE检测法CFSE是一种可穿透细胞膜的荧光染料，具有细胞膜通透性，能够自由进入细胞；当CFSE扩散穿过细胞膜，会与细胞内源酯酶产生水解反应而被激发，发出绿色荧光，这些带荧光的CFSE会进一步与细胞骨架蛋白结合，形成稳定的胞内荧光蛋白。每当细胞进行分裂增殖，胞内荧光蛋白会被平均分配到下一代细胞中，
病毒免疫荧光实验_荧光抗体染色
实验材料细胞小玻片标本试剂、试剂盒荧光抗体实验步骤荧光抗体染色按不同反应机制，可有以下几种：1.直接法 用已知特异性病毒抗体与荧光素结合，制成荧光特异性抗体，直接与细胞或组织中相应病毒抗原结合，在荧光显微镜下即可见病毒或病毒抗原存在部位呈现特异性荧光。此法特异简便，但一种荧光抗体只能检查一种抗原，特
病毒免疫荧光实验_荧光素标记抗体
实验材料荧光色素试剂、试剂盒抗体实验步骤荧光标记抗体方法有直接标记法和间接标记法两种。(1) 直接法：较为常用，具体步骤是：1) 抗体溶液的制备：用 0.01mol/L pH 7.1 PBS 将待标记抗体稀释至 20mg/ml;2) 荧光素：根据待标记抗体的总量，按 0.01mg 荧光素/mg 蛋白
荧光定量PCR实验时，荧光基团如何选择？
原则一 每个反应只检测一个基因的，方法就比较简单，对5’端荧光基团的选择以及3’端淬灭基团的选择余地都是比较大的。比如5’-FAM + 3’-BHQ，就是比较常见的方案。 下表为常用荧光染料（基团）的颜色及波长参数，供参考。 原则二 如果在每个反应中要检测的目的
病毒免疫荧光实验_荧光抗体的制备
实验材料荧光色素试剂、试剂盒抗体实验步骤荧光色素的选择 可以产生明亮荧光的染料物质，称荧光色素 (fluorochrome) 。目前常用的荧光色素有以下几种：(1) 异硫氰酸荧光素 (Fluorescein isothiocyanate, FITC): 在碱性条件下， FITC 的异硫氰酸基在水溶液
荧光原位杂交实验
实验方法原理 荧光原位杂交（Fluorescence in situ hybridization FISH）是一门新兴的分子细胞遗传学技术，是20世纪80年代末期在原有的放射性原位杂交技术的基础上发展起来的一种非放射性原位杂交技术。目前这项技术已经广泛应用于动植物基因组结构研究、染色体精细结构变
病毒免疫荧光实验
实验方法原理 实验材料 待检测病毒试剂、试剂盒 丙酮0. 01mol L PBS95%乙醇二甲苯仪器、耗材 玻片实验步骤 1. 培养细胞小玻片标本的制备 根据所检测病毒种类，选择敏感细胞进行培养，如乙型肝炎病毒用乳地鼠肾细胞 (BHK21 细胞）培养，森林脑炎病毒用绿猴肾细胞 (Vero 细胞）培养
荧光原位杂交实验
实验方法原理 用已知的标记单链核酸为探针，按照碱基互补的原则，与待检材料中未知的单链核酸进行异性结合，形成可被检测的杂交双链核酸。由于DNA分子在染色体上是沿着染色体纵轴呈线性排列，因而可以探针直接与染色体进行杂交从而将特定的基因在染色体上
荧光原位杂交实验
实验原理荧光原位杂交（Fluorescence in situ hybridization FISH）是一门新兴的分子细胞遗传学技术，是20世纪80年代末期在原有的放射性原位杂交技术的基础上发展起来的一种非放射性原位杂交技术。目前这项技术已经广泛应用于动植物基因组结构研究、染色体精细结构变异分析、
叶绿素的荧光现象实验
实验方法原理：物质具有不同的能态，物质中的某些电子吸收了光量子的能量后，物质从原来稳定状态的能级跳跃到一个较高的能级。这种稳定状态被称为基态；电子从基态跳跃到较高能级的现象称为激发；激发状态的电子称为激发态电子。叶绿体色素分子吸收光量子后，使其分子内的电子跃迁而变为激发态，由于激发能未被适当的接受体
SYPRO－Ruby－荧光染色实验
实验方法原理到目前为止，在常用来检测经聚丙烯酰胺凝胶电泳分离后的蛋白质的方法中，SYPRORUBY 可能是最灵敏的突光染色方法了，它能检测出仅含 1?2ng 蛋白的条带。遗憾的是，如此微量的蛋白条带经染色后用肉眼却不可见，需要一个荧光扫描仪检测（SYPRORuby 的最大激发光和发射光的波长分别是
SYPRO－Orange－荧光染色实验
实验材料单向凝胶电泳分离后的蛋白样品仪器、耗材铝箔荧光扫描仪塑料容器实验步骤1.电泳结束后，将凝胶置于盛有试剂 A 的塑料容器中，试剂 A 的量要足够覆盖整块凝股。例如，一’块典型的 mini 胶（8 cmXIOcm 或 8 cmX8 cm) 需用 50~IOOml 的试剂 A。2.用铝箔遮盖好容器
免疫荧光实验流程
免疫荧光实验步骤实验流程：（1） 细胞准备。对单层生长细胞，在传代培养时，将细胞接种到预先放置有处理过的盖玻片的培养皿中，待细胞接近长成单层后取出盖玻片，PBS洗两次；对悬浮生长细胞，取对数生长细胞，用PBS离心洗涤（1000rpm，5min）2次，用细胞离心甩片机制备细胞片或直接制备细胞涂
叶绿素的荧光现象实验
实验方法原理物质具有不同的能态，物质中的某些电子吸收了光量子的能量后，物质从原来稳定状态的能级跳跃到一个较高的能级。这种稳定状态被称为基态；电子从基态跳跃到较高能级的现象称为激发；激发状态的电子称为激发态电子。叶绿体色素分子吸收光量子后，使其分子内的电子跃迁而变为激发态，由于激发能未被适当的接受体接
荧光定量PCR实验步骤
1、总RNA抽提（枪头和离心管均经过湿热灭菌，无RNA酶） 1）取匀浆器，加入1ml的Trizol Reagent，置冰上预冷。 2）取100mg组织，加入到匀浆器中。 3）充分研磨直至无可见组织块。 4）12000rpm离心10min取上清。 5）加入250 μl三氯甲烷，颠倒离心管
叶绿素的荧光现象实验
实验方法原理 物质具有不同的能态，物质中的某些电子吸收了光量子的能量后，物质从原来稳定状态的能级跳跃到一个较高的能级。这种稳定状态被称为基态；电子从基态跳跃到较高能级的现象称为激发；激发状态的电子称为激发态电子。叶绿体色素分子吸收光量子后，使其分子内的电子跃迁而变为激发态，由于激发能未被适当的接受体
荧光原位杂交实验——荧光原位杂交技术
荧光原位杂交可应用于：（1）动植物基因组结构研究；（2）染色体精细结构变异分析；（3）病毒感染分析；（4）肿瘤遗传学和基因组进化研究。实验方法原理用已知的标记单链核酸为探针，按照碱基互补的原则，与待检材料中未知的单链核酸进行异性结合，形成可被检测的杂交双链核酸。由于DNA分子在染色体上是沿着染色体纵
实验室Western－Blot荧光实验干货分享
听说隔壁实验室买了一台新成像，可以做Western Blot荧光扫描式Azure Sapphire成像，效果很好，操作也简单，小师妹一脸羡慕，问了句，我从来没做过荧光实验，现在期刊杂志要求也在升级，也建议使用荧光的方法，之前因为没有合适的仪器，所以不能尝试，现在可以准备我的实验了，那从化学到荧光
实验室Western－Blot荧光实验干货分享
听说隔壁实验室买了一台新成像，可以做Western Blot荧光扫描式Azure Sapphire成像，效果很好，操作也简单，小师妹一脸羡慕，问了句，我从来没做过荧光实验，现在期刊杂志要求也在升级，也建议使用荧光的方法，之前因为没有合适的仪器，所以不能尝试，现在可以准备我的实验了，那从化学到荧光
双荧光素酶实验原理
双荧光素酶实验原理：利用荧光素酶与底物结合发生化学发光反应的特点，把感兴趣的基因转录的调控元件克隆在萤火虫荧光素酶基因（firefly luciferase）的上游，构建成荧光素酶报告质粒。然后转染细胞，适当刺激或处理后裂解细胞，测定荧光素酶活性。通过荧光素酶活性的高低判断性刺前后或不同刺激对感兴趣
FISH－荧光原位杂交实验
实验概要1. 通过实验了解荧光原位杂交技术的基本原理和实验技术 2. 掌握原位杂交技术的操作方法及荧光显微镜的使用方法 3. 了解其在生物学、医学领域的应用实验原理荧光原位杂交（Fluorescence in situ hybridization FISH）是一门新兴的分子细胞遗传学技术，是20
双荧光素酶实验原理
双荧光素酶实验原理：利用荧光素酶与底物结合发生化学发光反应的特点，把感兴趣的基因转录的调控元件克隆在萤火虫荧光素酶基因（firefly luciferase）的上游，构建成荧光素酶报告质粒。然后转染细胞，适当刺激或处理后裂解细胞，测定荧光素酶活性。通过荧光素酶活性的高低判断性刺前后或不同刺激对感兴趣
荧光原位杂交实验步骤
荧光原位杂交实验步骤1）探针变性将探针在75oC恒温水浴中温育5min，立即置0oC，5～10min，使双链DNA探针变性。2）标本变性①将制备好的染色体玻片标本于50oC培养箱中烤片2～3h。（经Giemsa染色的标本需预先在固定液中退色后再烤片）。 ②取出玻片标本，将其浸在70～75
免疫荧光实验方法
免疫荧光技术是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。它是根据抗原抗体反应的原理，先将已知的抗原或抗体标记上荧光基团，再用这种荧光抗体（或抗原）作为探针检查细胞或组织内的相应抗原（或抗体）。利用荧光显微镜可以看见荧光所在的细胞或组织，从而确定抗原或抗体的性质和定位，以及利用定量技
荧光素酶的测定实验
基本方案 实验方法原理 荧光素 4-单氧酶（ATP-水解）提取于萤火虫，Photinus Pyralis。荧光素＋ATP＋O2→氧和虫荧光素＋PPi＋H2O＋
双荧光素酶实验原理
双荧光素酶实验原理：利用荧光素酶与底物结合发生化学发光反应的特点，把感兴趣的基因转录的调控元件克隆在萤火虫荧光素酶基因（firefly luciferase）的上游，构建成荧光素酶报告质粒。然后转染细胞，适当刺激或处理后裂解细胞，测定荧光素酶活性。通过荧光素酶活性的高低判断性刺前后或不同刺激对感兴趣
双荧光素酶实验原理
双荧光素酶实验原理：利用荧光素酶与底物结合发生化学发光反应的特点，把感兴趣的基因转录的调控元件克隆在萤火虫荧光素酶基因（firefly luciferase）的上游，构建成荧光素酶报告质粒。然后转染细胞，适当刺激或处理后裂解细胞，测定荧光素酶活性。通过荧光素酶活性的高低判断性刺前后或不同刺激对感兴趣
荧光定量PCR实验指南1
第一部分一、基本步骤：1、目的基因（DNA和mRNA）的查找和比对；2、引物、探针的设计；3、引物探针的合成；4、反应体系的配制；5、反应条件的设定；6、反应体系和条件的优化；7、荧光曲线和数据分析；8、标准品的制备； 二、技术关键： 1、目的基因（DNA和mRNA）的查找和比对；
荧光定量PCR实验设计
设置对照组：荧光定量PCR检测一般流程如下图，选择检测靶标基因，进行引物筛选及体系构建，后续进行样本处理核酸提取，检测分析结果。对照组是实验的监控系统，监测实验是否有存在异常，也是排除实验异常关键所在；实验对照设置: 通常有阳性对照，阴性对照组等。 具体可根据实验类型进行对照组的设置；对
细胞免疫荧光染色实验
实验原理利用抗原抗体反应，鉴定细胞是否表达某种蛋白。细胞经固定后，用特异性抗体（一抗）识别目的蛋白，再用一抗的抗体（二抗）识别一抗，二抗一般耦联荧光基团或化学反应基团，通过荧光或化学发光显示目的蛋白。主要试剂防淬灭剂、DPBS、指甲油、4% PFA、10 μg/mL PI、10 μg/mL Hoec