扫描电镜——细胞内部结构冷冻割断法
该方法简便，结构清晰，已得到广泛应用。其操作方法如下：1) 取材和固定：为了使细胞结构清晰，不被过多的血细胞污染，可在取材前用灌注法冲洗。即先将动物麻醉，经腹主动脉注入生理盐水或低分子量的右,切开下腔静脉放血，至无血色为止。然后迅速取材，将样品修成1mm×1mm×5mm大小，投入1%锇酸溶液中固定1小时，用1/15M磷酸缓冲液(pH7.4)清洗两次，每次10分钟。2) 二甲基亚砜浸泡：将样品依次放入25%、50%二甲基亚砜溶液中，各浸泡30分钟。3) 割断：用TF—1型冷冻割断装置进行割断。然后将割断后的样品放到50%二甲基亚砜中，等融化后再用1/15M磷酸缓冲液浸洗，每次10分钟，换液5次。4) 软化及后固定：将样品放入0.1%锇酸中软化，温度20℃，时间48～72小时。然后用1%锇酸固定1小时，双蒸水浸洗1小时，换液几次，需彻底清洗干净。5) 导电染色：将样品放入2%丹宁酸中2小时(或过夜)，以双蒸水清洗1小时，换液......阅读全文
关于氯锇酸铵的操作处置与储运介绍
操作注意事项：严加密闭，提供充分的局部排风和全面通风。尽可能采取隔离操作。操作人员必须经过专门培训，严格遵守操作规程。建议操作人员佩戴防尘面具（全面罩），穿胶布防毒衣，戴橡胶手套。避免产生粉尘。避免与酸类、碱类接触。搬运时要轻装轻卸，防止包装及容器损坏。配备泄漏应急处理设备。倒空的容器可能残留有
扫描电镜样品制备程序
扫描电镜样品制备程序 一、固定：戊二醛-锇酸双固定法 1．2.5%戊二醛（试剂1）固定4小时（或者过夜） 2．0.1M 磷酸缓冲液（试剂2）清洗3次，每次15-30分钟 3．1%锇酸（试剂3）固定2-4小时 4．0.1M 磷酸缓冲液（试剂2）清洗3次，每次15分钟 二、脱水：乙醇系列
扫描电镜样品制备程序
扫描电镜样品制备程序 一、固定：戊二醛-锇酸双固定法 1．2.5%戊二醛（试剂1）固定4小时（或者过夜） 2．0.1M 磷酸缓冲液（试剂2）清洗3次，每次15-30分钟 3．1%锇酸（试剂3）固定2-4小时 4．0.1M 磷酸缓冲液（试剂2）清洗3次，每次15分钟 二、脱水：乙醇系列
微生物拟核体内体外染色观察实验
实验方法原理 富尔根氏（Feulgen）染色法是根据席夫氏（Schiff）试剂进行的反应而建立的微生物拟核染色法。席夫氏试剂含有碱性复红和亚硫酸，碱性复红与亚硫酸结合后，失去醌式结构而变为无色。当 DNA 经酸作用而生成的醛化合物与席夫氏试剂结合后，使醌式结构恢复，合成一种带紫红色的碱性复红衍生
微生物拟核体内体外染色观察实验_富尔根氏染色法
实验方法原理富尔根氏（Feulgen）染色法是根据席夫氏（Schiff）试剂进行的反应而建立的微生物拟核染色法。席夫氏试剂含有碱性复红和亚硫酸，碱性复红与亚硫酸结合后，失去醌式结构而变为无色。当 DNA 经酸作用而生成的醛化合物与席夫氏试剂结合后，使醌式结构恢复，合成一种带紫红色的碱性复红衍生物。此
自由基显示实验
实验方法原理 实验材料 组织样品试剂、试剂盒 铈生理溶液生理溶液多聚甲醛锇酸实验步骤 1. 组织取下后，立即在含 1 mmol/L 铈生理溶液中切成小块，孵育 5 min。2. 生理溶液漂洗 5 min。3. 4％ 多聚甲醛固定、漂洗。4. 锇酸后固定、脱水、包埋等同常规。5. 电镜观察。
电子显微镜检测细胞方法
、仪器与试剂射电子显微镜或扫描电子显微镜，组织切片机，离心机，离心涂片机。戊二醛固定液：取25%戊二醛原液10ml，加入0.2mol/L PBS液50ml，再加入蒸馏水40ml，混匀，4℃保存。锇酸固定液：将含有1g锇酸的小瓶浸入清洁液一晚，用双蒸水冲洗数遍后，将小瓶放在盛有50ml双蒸水的100m
非凝固型固定剂的类型及功能特点
1、 福尔马林(formalin)浓度在2～10%的福尔马林，为很好的硬化剂，但是渗透力薄弱，而且对材料会引起强烈收缩。所以最好与其他药剂混合使用，效果会大大增加。注意的是，它亦是一种还原剂，故不宜与氧化剂铬酸、锇酸相混。特点：很好的硬化剂，强还原剂；渗透力弱。2、重铬酸钾(potassium di
非凝固型固定剂的种类介绍
1、 福尔马林(formalin)浓度在2～10%的福尔马林，为很好的硬化剂，但是渗透力薄弱，而且对材料会引起强烈收缩。所以最好与其他药剂混合使用，效果会大大增加。注意的是，它亦是一种还原剂，故不宜与氧化剂铬酸、锇酸相混。特点：很好的硬化剂，强还原剂；渗透力弱。2、重铬酸钾(potassium di
自由基显示实验
H2O2细胞化学法 细胞化学法 实验方法原理 实验材料 组织样品
电子显微镜检测法检测细胞凋亡
具有凋亡特征的细胞程序性死亡后，可在扫描或透射电镜下观察到“凋亡小体”，该小体系由细胞膜卷曲、脱落形成的小泡，其内包含有完整的细胞器及核片段。这种小体易被巨噬细胞、上皮细胞等吞噬，借以清除正常发育过程中死亡的细胞。细胞坏死则无此小体形成。但是并非所有发生程序性死亡的细胞皆形成凋亡小体。 一、仪器与
细胞膜糖类电镜显示实验
实验方法原理 细胞膜糖类包括糖蛋白和糖脂，其显示技术较常用的是凝集素细胞化学技术，此外，还有钌红染色法等。钌红染色法的原理是钌红可以与羧基（酸性基）通过静电结合，电镜下呈电子密度高染色。实验材料 组织样品试剂、试剂盒 钌红原液戊二醛 二甲胂酸钠缓冲液锇酸实验步骤 1. 钌红原液配制钌红溶于双蒸水，浓
腺苷酸环化酶的电镜酶细胞化学试验方法
腺苷酸环化酶主要分布于细胞质膜、核膜和内质网膜上。它也是一种磷酸酶，能催化ATP形成3'，5'－环磷酸腺苷（cAMP）并释放出焦磷酸。 Howell等人（1972）首先用亚胺二磷酸腺苷（AMP－PNP）作底物，成功地对动物细胞中的腺苷酸环化酶进行了定位。现已确认，在未固定和固定
腺苷酸环化酶的电镜酶细胞化学试验方法
腺苷酸环化酶主要分布于细胞质膜、核膜和内质网膜上。它也是一种磷酸酶，能催化ATP形成3'，5'－环磷酸腺苷（cAMP）并释放出焦磷酸。 Howell等人（1972）首先用亚胺二磷酸腺苷（AMP－PNP）作底物，成功地对动物细胞中的腺苷酸环化酶进行了定位。现已确认，在未固定和固定
电子显微镜检测法检测细胞凋亡
具有凋亡特征的细胞程序性死亡后，可在扫描或透射电镜下观察到“凋亡小体”，该小体系由细胞膜卷曲、脱落形成的小泡，其内包含有完整的细胞器及核片段。这种小体易被巨噬细胞、上皮细胞等吞噬，借以清除正常发育过程中死亡的细胞。细胞坏死则无此小体形成。但是并非所有发生程序性死亡的细胞皆形成凋亡小体。一、仪器与试剂
离子细胞化学实验
实验方法原理 实验材料 组织试剂、试剂盒 磷酸钾戊二醛蔗糖焦锑酸钾锇酸实验步骤 1. 组织切成约 1 mm3 的小块，用 0.09 mol/L 磷酸钾（或草酸钾）-3％ 戊二醛（pH 7.3，用 0.1％～1％ KOH 调 pH）固定 4 h 以上，4℃。也有人推荐固定早期用微波照射，以加速
阴离子位点显示实验
实验方法原理 实验材料 组织样品试剂、试剂盒 磷酸缓冲液阳离子化铁蛋白液体戊二醛锇酸实验步骤 1. 0.1 mol/L磷酸缓冲液配制阳离子化铁蛋白，浓度为0.2～0.5 mg/ml。2. 组织样品悬浮于阳离子化铁蛋白液体中，室温下反应30 min。3. 0.1 mol/L磷酸缓冲液充分漂洗。4. 3
扫描电镜——细胞内部结构冷冻割断法
该方法简便，结构清晰，已得到广泛应用。其操作方法如下：1) 取材和固定：为了使细胞结构清晰，不被过多的血细胞污染，可在取材前用灌注法冲洗。即先将动物麻醉，经腹主动脉注入生理盐水或低分子量的右,切开下腔静脉放血，至无血色为止。然后迅速取材，将样品修成1mm×1mm×5mm大小，投入1%锇酸溶液
如何制备透射电镜的样品？
透射电镜样品制备方法 样品在2.5%的戊二醛溶液中4℃固定过夜，然后按下列步骤处理样品： 倒掉固定液，用0.1M，pH=7.0的磷酸缓冲液漂洗样品三次，每次15min； 用1%的锇酸溶液固定样品1-2h； 倒掉固定液，用0.1M，pH=7.0的磷酸缓冲液漂洗样品三次，每次15min；
凝集素显示糖类细胞化学实验
实验方法原理 实验材料 组织样品试剂、试剂盒 凝集素-胶体金探针锇酸实验步骤 1. 制备或购买凝集素-胶体金探针。2. 组织常规固定，游离细胞打散，组织切片切薄。3. 漂洗 3 次。4. 5～25 μg/ml 凝集素-胶体金 15～25℃ 孵育 30～60 min。5. 漂洗、锇酸固定同常规注意事项
腺苷酸环化酶的电镜酶细胞化学试验方法
腺苷酸环化酶主要分布于细胞质膜、核膜和内质网膜上。它也是一种磷酸酶，能催化ATP形成3'，5'－环磷酸腺苷（cAMP）并释放出焦磷酸。Howell等人（1972）首先用亚胺二磷酸腺苷（AMP－PNP）作底物，成功地对动物细胞中的腺苷酸环化酶进行了定位。现已确认，在未固定和固定的组织中
腺苷酸环化酶的电镜酶细胞化学试验方法
腺苷酸环化酶主要分布于细胞质膜、核膜和内质网膜上。它也是一种磷酸酶，能催化ATP形成3'，5'－环磷酸腺苷（cAMP）并释放出焦磷酸。 Howell等人（1972）首先用亚胺二磷酸腺苷（AMP－PNP）作底物，成功地对动物细胞中的腺苷酸环化酶进行了定位。现已确认，在未固定和固定
细胞膜糖类电镜显示实验——钌红染色法
细胞膜糖类 电镜 显示技术 免疫组织化学实验技术及应用 第十四章细胞膜糖类电镜显示实验可以用于：观察细胞膜上的糖蛋白和糖脂。其显示技术较常用的是凝集素细胞化学技术，此外，还有钌红染色法等。实验方法原理钌红染色法的原理是钌红可以与羧基（酸性基）通过静电结合，电镜下呈电子密度高染色。实验材料组织样品试剂
乙酰胆碱受体显示细胞化学实验
实验材料 组织样品试剂、试剂盒 磷酸钾戊二醛KOH蔗糖焦锑酸钾锇酸实验步骤 1. 组织切成约 1 mm3 的小块，用 0.09 mol/L 磷酸钾（或草酸钾）-3％ 戊二醛（pH 7.3，用 0.1％～1％ KOH 调 pH）固定 4 h 以上，4℃。也有人推荐固定早期用微波照射，以加速固定
腺苷酸环化酶的电镜酶细胞化学试验方法
腺苷酸环化酶主要分布于细胞质膜、核膜和内质网膜上。它也是一种磷酸酶，能催化ATP形成3'，5'－环磷酸腺苷（cAMP）并释放出焦磷酸。Howell等人（1972）首先用亚胺二磷酸腺苷（AMP－PNP）作底物，成功地对动物细胞中的腺苷酸环化酶进行了定位。现已确认，在未固定和固定的组织中
透射电镜超薄切片和染色实验
实验步骤1. 取材 对一般的动物组织取材的要求如下：(1) 标本材料要新鲜，取材速度要快：由于生物组织离体后，细胞将会立即释放出各种水解酶而引起细胞自溶，使其微细结构发生改变而产生假象，故要尽量保持材料的新鲜，经解剖、手术或活检取材后迅速投入固定液内，以尽量保持细胞在活体状态的结构。(2) 取材小，
透射电镜超薄切片和染色实验
实验步骤1. 取材 对一般的动物组织取材的要求如下：(1) 标本材料要新鲜，取材速度要快：由于生物组织离体后，细胞将会立即释放出各种水解酶而引起细胞自溶，使其微细结构发生改变而产生假象，故要尽量保持材料的新鲜，经解剖、手术或活检取材后迅速投入固定液内，以尽量保持细胞在活体状态的结构。(2) 取材小，
透射电镜超薄切片和染色实验
实验方法原理 实验步骤 1. 取材 对一般的动物组织取材的要求如下：(1) 标本材料要新鲜，取材速度要快：由于生物组织离体后，细胞将会立即释放出各种水解酶而引起细胞自溶，使其微细结构发生改变而产生假象，故要尽量保持材料的新鲜，经解剖、手术或活检取材后迅速投入固定液内，以尽量保持细胞在活体状态的结构。
离子细胞化学实验——钙离子细胞化学具体方法
离子细胞化学可用来显示细胞内离子定位分布，目前用得比较多的是显示细胞内钙的分布，通常需结合EDX能谱分析。细胞内钙离子分布是高度隔室化的，形成钙离子浓度不同的钙池，正常情况下，细胞内胞浆、线粒体、核等部位都有钙的分布；在大多病理情况下（如缺血、缺氧、中毒等），细胞内钙可升高，并且进入到细胞内的钙很多
关于病理切片的固定信息介绍
（1）病理切片— 小块组织固定法：这是最常用的方法，从人体或动物体取下的小块组织，须立即置入液态固定剂中进行固定，通常，标本与固定液的比例为1:4～20，但组织块不宜过大过厚，否则固定液不能迅速渗透。故取组织块的大小一般为2.0cm×2.0cm×0.3cm。 （2）病理切片— 注射、灌注固定法