透射电镜超薄切片和染色实验
实验步骤1. 取材 对一般的动物组织取材的要求如下:(1) 标本材料要新鲜,取材速度要快:由于生物组织离体后,细胞将会立即释放出各种水解酶而引起细胞自溶,使其微细结构发生改变而产生假象,故要尽量保持材料的新鲜,经解剖、手术或活检取材后迅速投入固定液内,以尽量保持细胞在活体状态的结构。(2) 取材小,取材部位要准确:由于用于电镜标本制备的固定液其渗透速度极慢,同时超薄切片的面积又很小,一般取材不超过 0.5-1mm3, 故取材时必须注意取材部位。如取材部位不当,则无法获得预期的结果。(3) 所用的固定液及器材都必须预冷,以尽可能降低离体细胞内水解酶的活性,减少细胞自溶,一般均将固定液保存于 4℃冰箱内,取材用的剪刀或手术刀片及载玻片可置于冰块上预冷。(4) 切割组织的刀、剪必须很锋利,操作时避免拉、扯、锯、压等动作所造成的机械损伤。如果标本是病毒的分离培养物,则必须注意其数量、浓度。这种培养物取材后可用塑料离心管离心取其沉淀物,其......阅读全文
透射电镜超薄切片和染色实验
实验步骤1. 取材 对一般的动物组织取材的要求如下:(1) 标本材料要新鲜,取材速度要快:由于生物组织离体后,细胞将会立即释放出各种水解酶而引起细胞自溶,使其微细结构发生改变而产生假象,故要尽量保持材料的新鲜,经解剖、手术或活检取材后迅速投入固定液内,以尽量保持细胞在活体状态的结构。(2) 取材小,
透射电镜超薄切片和染色实验
实验方法原理 实验步骤 1. 取材 对一般的动物组织取材的要求如下:(1) 标本材料要新鲜,取材速度要快:由于生物组织离体后,细胞将会立即释放出各种水解酶而引起细胞自溶,使其微细结构发生改变而产生假象,故要尽量保持材料的新鲜,经解剖、手术或活检取材后迅速投入固定液内,以尽量保持细胞在活体状态的结构。
透射电镜超薄切片和染色实验
实验步骤1. 取材 对一般的动物组织取材的要求如下:(1) 标本材料要新鲜,取材速度要快:由于生物组织离体后,细胞将会立即释放出各种水解酶而引起细胞自溶,使其微细结构发生改变而产生假象,故要尽量保持材料的新鲜,经解剖、手术或活检取材后迅速投入固定液内,以尽量保持细胞在活体状态的结构。(2) 取材小,
透射电镜生物制样超薄切片
这是一个为电镜观察提供极薄(约为60nm)的样品切片的过程,它是整个制样程序的中心环节。大部分生物样品只有被切割成超薄切片的形式才能在电镜下进行观察。能否提供理想的超薄切片关系到能否进行电镜观察,以及能否有令人满意的观察效果。在此以前的环节都是为了能给切片提供一个合格、切割性好的样品,而最后的染
透射电镜样品超薄切片常规制作规程
1.取材:根据实验目的取材,要求部位准确,体积小于2mm3 2.醛类固定:用2%-3%的戊二醛固定2小时 3.清洗:用磷酸缓冲液清洗3次,每次10min 4.锇酸固定:用1%-2%的锇酸固定2~3小时 5.清洗:用磷酸缓冲液清洗3次,每次10min 6.脱水:用50%、70%、80%、
冷冻超薄切片原理和使用
冷冻超薄切片技术是一种为了研究更接近于生物生活状态结构和功能而发展起来的电镜样品制备技术。它是把样品进行冷冻固定后,进行超薄切片,省去了经典超薄切片法的长时间的固定、脱水和也埋等处理。样励在切片前后,不经过强烈的化学处理,约胞结构能得到很好的保存;尤其是可溶性成分小会被抽提,使得电镜图像更接近于生物
超薄切片技术
在透射电镜的样品制备方法中,超薄切片技术是最基本、最常用的制备技术。超薄切片的制作过程基本上和石蜡切片相似,需要经过取材、固定、脱水、浸透、包埋聚合、切片及染色等步骤。
电镜超薄切片流程
超薄切片流程包括以下几个步骤: 1、切片前的准备:铜网清洗(用丙酮和乙醇浸洗) 2、支持膜制备:常用Formvar膜(用聚乙烯醇缩甲醛和氯仿配置,浓度为0.5%) 3、玻璃刀制备:专用制刀机制作。 4、半薄切片光镜定位(主要确定超薄切片的位置)。 5、修块(表面修成梯形或长方形)。 6、超薄切片:专
超薄切片技术简介
由于电镜产生的电子束穿透能力很弱,必须把标本切成厚度小于0.1um以下的薄片才适用,这种薄片称为超薄切片。常用的超薄切片厚度是50-70nm。在透射电镜的样品制备方法中,超薄切片技术是最基本、最常用的制备技术。超薄切片的制作过程基本上和石蜡切片相似,需要经过取材、固定、脱水、浸透、包埋聚合、切片及染
超薄切片的制备
制备超薄切片的设备为超薄切片机,使用的刀为玻璃刀或钻石刀。为了能切成薄片,包埋标本的包埋剂一定要达到一定的硬度,通常是用树脂聚合包埋。方法与步骤:锇酸和戊二醛固定样品→丙酮逐级脱水→环氧树脂包埋_→以热膨胀或机械伸缩的方式切片_→重金属(铀,铅)盐染色.
电镜所需的切片之超薄切片介绍
超薄切片(Ultrathin sectioning) 系供电子显微镜观察用的切片。由于电子穿透组织的能力低, 所以供电子显微镜观察用的切片要求极薄(一般厚度为40~50 nm) ,即为超薄切片 。
徕卡冰冻超薄切片技术
徕卡冰冻超薄切片技术是使样品迅速冷冻,然后用冷冻切片机进行徕卡冷冻超薄切片。它省去了普通超簿切片法中繁杂的化学固定与包埋操作,在细胞化学研究中有着特殊的用途。为了很好保存形态结构,必须使游离水形成玻璃态的冰,防止产生冰晶。这就要求很高的冰冻速率(~度/秒),这对于传热性能差的生物材料来说是困难的。
冷冻超薄切片术
中文名称冷冻超薄切片术英文名称cryoultramicrotomy;ultracryotomy定 义将低温冷冻标本在低温超薄切片机中制成供电镜观察使用的超薄切片的技术。应用学科细胞生物学(一级学科),细胞生物学技术(二级学科)
快速了解冷冻含水超薄切片
冷冻超薄切片技术是在光学显微冷冻切片和电镜超薄切片的基础上发展起来的。由于常规超薄切片技术中应用化学固定、有机溶剂脱水、树脂包埋等一系列处理,均可使生物样品受到物理和化学性损伤,引起组织和细胞内蛋白质分子变性,大部分可溶性成分及某些生物大分子物质被抽提或发生移位。为了弥补这些缺陷,人们创造了冷冻
超薄切片仪器的功能介绍
超薄切片(Ultrathin sectioning) 系供电子显微镜观察用的切片。由于电子穿透组织的能力低, 所以供电子显微镜观察用的切片要求极薄(一般厚度为40~50 nm) ,即为超薄切片 。
介绍透射电镜的样品准备的2种方法
透射电镜是一种综合性大型分析仪器,在现代科学技术的研究开发工作中被广泛地使用。由于透射电镜能观察的样品必须很薄(60~70nm),所以透射电镜的样品准备要求很严格,方法也很单一。一般有以下两种方法: 一、负染色技术 负染色技术简单快速,可以显示生物大分子、细菌、分离的细胞器以及蛋白晶
透射电镜样品制备要求有哪些
透射电镜样品制备步骤: 一,取材:组织块小于1立方毫米 二,固定: 2.5%戊二醛,徳酸缓冲液配制固定2小时或更长时间。 用0.1M磷酸漂洗液漂洗15分三次1%饿酸固定液固定2-3小时 用0.1M磷酸漂洗液漂洗15分三次 三,脱水: 50%乙醇15-20分 70%乙醇15-20分
超薄切片取材的基本要求
组织从生物活体取下以后,如果不立即进行适当处理,会由于细胞内部各种酶的作用,出现细胞自溶现象。此外,还可能由于污染,微生物在组织内繁殖使细胞的微细结构遭受破坏。因此,为了使细胞结构尽可能保持生前状态,必须做到快、小、准、冷:(1).动作迅速,组织从活体取下后应在最短时间内 (争取在1分钟内) 投入2
冷冻超薄切片术技术简介
中文名称冷冻超薄切片术英文名称cryoultramicrotomy;ultracryotomy定 义将低温冷冻标本在低温超薄切片机中制成供电镜观察使用的超薄切片的技术。应用学科细胞生物学(一级学科),细胞生物学技术(二级学科)
电镜样品科普贴:常见样品制备技术
电镜样品制备技术较复杂,种类也较多,分为普通样品制备技术和特殊样品制备技术。这里简单介绍几种常用的样品制备技术。 1、超薄切片技术 超薄切片技术(ultramicrotomy)是透射电镜样品制备方法中最基本的一种。由于电子束穿透能力的限制透射电镜观察的样品必须很薄,普通光镜切片厚度约3~5µ
SD大鼠神经视网膜组织分离和鉴定
实验概要本研究对SD大鼠神经视网膜进行分离,并用组织学和透射电镜方法鉴定所分离的组织。主要试剂1%戊巴比妥钠,液氮,HE染色剂,4%多聚甲醛,二甲苯,苏木素-伊红,2.5%戊二醛,0.1mol/L磷酸缓冲液,1%饿酸,丙酮,环氧树脂618,醋酸铀,枸椽酸铅主要设备解剖显微镜,冻存管,光镜,LKB超薄
TUNEL分析实验——组织切片的-TUNEL-染色
实验材料组织试剂、试剂盒甲醛NaOHPBS二甲苯乙醇蛋白酶 KTris-HCl 溶液仪器、耗材Parafilm 膜实验步骤1. 取下组织,立即用新制备的 4% 甲醛固定,室温过夜。用多聚甲醛制备 4% 的甲醛溶液,在 100 ml 水中加 8 g 多聚甲醛,在通风橱中加热至 50~60℃,加几滴 1
超薄切片机仪器的功能介绍
超薄切片机制作供透射型电子显微镜用的超薄切片的切片机。它可将各种包埋剂包埋的样品用玻璃刀或钻石刀切成50纳米以下的超薄切片。
超薄切片仪器取材的基本要求
组织从生物活体取下以后,如果不立即进行适当处理,会由于细胞内部各种酶的作用,出现细胞自溶现象。此外,还可能由于污染,微生物在组织内繁殖使细胞的微细结构遭受破坏。因此,为了使细胞结构尽可能保持生前状态,必须做到快、小、准、冷:(1).动作迅速,组织从活体取下后应在最短时间内 (争取在1分钟内) 投入2
组织切片Masson染色
Masson染色是利用两到三种阴离子染色液对组织中的纤维和炎性因子着色的染色方法,染色后可使胶原纤维、粘液、软骨呈蓝色,肌纤维、胞浆呈红色,细胞核呈蓝黑色 一、实验用品 组织蜡块、苏木素染液、盐酸酒精分化液、丽春红酸性复红液、苯胺蓝染液、1%磷钼酸、2%冰醋酸、0.2%冰醋酸、梯度乙醇、二甲
透射电镜的制样流程
透射电镜目前有两种制样技术: 一.负染色技术 负染色技术简单快速,可以显示生物大分子、细菌、分离的细胞器以及蛋白晶体等样品的形态、结构、大小以及表面结构的特征。尤其在病毒学中,负染色技术有着广泛的应用。 样品要求: ①样品悬液的纯度不要求很纯,但是如果杂质太多,如大量的细胞碎片,培养基残
透射电镜技术
透射电镜技术 透射电镜是以电子束透过样品经过聚焦与放大后所产生的物像,投射到荧光屏上或照相底片上进行观察。透射电镜的分辨率为0.1~0.2nm,放大倍数为几万~几十万倍。由于电子易散射或被物体吸收,故穿透力低,必须制备更薄的超薄切片(通常为50~100nm)。其制备过程与石蜡切片相似,但要求极严格
石蜡块做超薄切片的样品制作流程
石蜡块做超薄切片的样品制作流程如下: 1、取材:从石蜡块上相应部位切下约1mm3 的小块。 2、溶蜡:将取下的标本放在一张滤纸上,40℃烘箱内烘1小时,然后转放入二甲苯溶液中40℃烘箱内继续浸泡8—12h。 3、水化:纯丙酮30分钟、90%、80%、70%丙酮各15分钟。 4、漂洗:用缓冲液漂洗(0
断裂标记免疫电镜技术(2)
)超薄切片法步骤:①至⑤同临界点干燥法。⑥1%锇酸,室温固定2h,系列酒精或丙酮脱水,常规电镜包埋。⑦切半薄片,光镜定位合适的断裂部位,再切超薄切片,铀铅染色,透射电镜观察。断裂标记法目前文献报告应用较多的是植物凝集素-胶体金免疫标记技术,常用的如刀豆球蛋白(Con A)-- 胶体金免疫标记技术.C
投射和扫描电镜主要特性还是什么?
是透射电镜!透射电镜是以电子束透过样品经过聚焦与放大后所产生的物像, 投射到荧光屏上或照相底片上进行观察。透射电镜的分辨率为0。1~0。2nm,放大倍数为几万~几十万倍。由于电子易散射或被物体吸收,故穿透力低,必须制备更薄的超薄切片(通常为50~100nm)。 其制备过程与石蜡切片