免疫金标记检测方法标准操作程序
【目的】 保证免疫金标技术检验准确性 【本SOP适用范围】 免疫金标技术 【原理】 氯化金分子在还原剂作用下聚合形成金颗粒，颗粒与颗粒之间因静电作用而相互排斥，使其保持一个比较稳定的胶体状态，故称作胶体金。利用胶体金颗粒的高电子密度及其表面能结合生物大分子(如抗体、SPA、植物血凝素和刀豆蛋白A等)以 及具有一定颜色等特性，可用光镜和电镜对细胞内抗原进行定位、定性的研究。 【方法学分类】 1. 班点金免疫渗滤试验 固相膜免疫测定中液体在微孔膜中穿过流出呈穿流形式，为斑点金免疫渗滤试验(dot immunogold filtration assay，DIGFA)，亦有称免疫金溶胶斑点法、滴金免疫测定法等。试验单位为三层反应盒，第一层为过滤器(滤纸层)，第二层为反应膜(NC膜或MC膜)上点加有特异性抗原或抗体，第三层为吸水垫料，有称此渗滤装置为滴金反应板。 以双抗体夹心法测dsDNA为例：试验中将标本加在反应盒上......阅读全文
免疫标记技术介绍
免疫标记技术是指将抗原抗体反应与标记技术相结合，将已知的抗体或抗原标记上示踪物质，通过检测标记物，间接测定抗原-抗体复合物的一类实验方法。常用的标记物有酶，荧光素，放射性核素，化学发光物质及胶体金等。
免疫标记法及其分类
免疫标记法及其分类1.荧光免疫法原理是应用一对单克隆抗体的夹心法。底物用磷酸-4-甲基伞形酮，检测产物发出的荧光，荧光强度与Mb浓度呈正比，可在8min内得出结果。结果以Mb每小时释放的速率表示（△Mb）表示。该法重复性好，线性范围宽，具有快速、敏感、准确的特点。以双抗夹心法为例，首先将特异性抗体与
标记免疫分析技术概述
一、概要 定义：应用广泛、先进的免疫分析技术，是生物活性物质分析方法的新领域；基本技术是将多种标记示踪技术和高度灵敏性和医学免疫学抗原抗体反应的高度特异性相结合的分析技术。 特点：灵敏度高，特异性强，重复性好，准确性高，操作简便，易于自动化商品化。 发展：放射免疫分析，免疫放射分析，酶标记免疫分析，
概述标记的免疫技术
免疫技术是利用抗原抗体反应进行的检测方法，即应用制备好的特异性抗原或抗体作为试剂，以检测标本中的相应抗体或抗原。它的特点是具有高度的特异性和敏感性。如将试剂抗原或试剂抗体用可以微量检测的标记物（例如放射性核素、荧光素、酶等）进行标记，则在与标本中的相应抗体或抗原反应后，可以不必测定抗原抗体复合物
标记免疫分析技术1
一、标记分析技术概述1959年，美国学者Yalow和Berson建立了放射免疫分析技术，这种技术以免疫反应的特异性，和放射性同位素标记的灵敏性显示了其在微量检测方面的优势，吸引着各国的生物医学工作者。标记免疫分析技术进入了一个崭新的时期。从而使免疫分析，从定性分析和半定量分析走向了定量分析。医学检测
标记免疫分析技术2
四、发光免疫分析：发光免疫分析：直接用发光物质标记抗原或抗体生物的发光剂：荧火虫荧光素（酶催化发光）化学的发光剂：鲁米那、吖啶脂等在有过氧化氢的弱碱溶液中即可迅速发光。美国CHIRON公司生产的ACS-180使用类均相的包被抗体的磁性微粒，扩大了反应面，加速了免疫反应，又应用吖啶脂作标记的化学发光分
标记免疫分析技术概述
一、概要 定义：应用广泛、先进的免疫分析技术，是生物活性物质分析方法的新领域；基本技术是将多种标记示踪技术和高度灵敏性和医学免疫学抗原抗体反应的高度特异性相结合的分析技术。 特点：灵敏度高，特异性强，重复性好，准确性高，操作简便，易于自动化商品化。 发展：放射免疫分析，免疫放射分析，
金免疫技术（斑点免疫层析试验）
一、原理金免疫技术是免疫标记技术之一，金盐被还原成原子金后形成金颗粒悬浮（胶体金），这种金颗粒呈红色，并能与蛋白质等大分子物质结合，因此，可用胶体金作为标记物来检测标本中的抗原或抗体。典型的测定方法有斑点买免疫渗滤试验和斑点免疫层析试验等。二、材料1 、HCG金标试纸条2、妊娠尿液 正常尿液三、方法
胶体金标记蛋白质的纯化
标记好的免疫金探针必须经过纯化处理才能用于IHC染色，尤其是免疫电镜的染色。纯化的目的就是除去其中未标记的蛋白质，未充分标记的胶体金及在标记过程可能形成的各种聚合物。其纯化方法有超速离心法、色谱柱法以及以上二者相结合应用。（一）超迷离心法根据胶体金颗粒大小不同及蛋白质种类不同，离心的转速和时间也不同
胶体金标记技术及其应用解析
传统的同源建模技术对抗体进行人源化改造，主要是基于蛋白质一级结构的相似性同时结合已有的蛋白质晶体结构进行同源模拟。现有的多种同源建模技术大部分都没有对已有的抗体序列数据进行分析，在人源化改造过程中存在突变位点不确定的问题，同时抗体特性如表达水平、关键氨基酸的后期修饰预测等无法提前预知。
胶体金标记技术及其应用解析
胶体金是氯金酸在还原剂的作用下，聚合成特定大小的金颗粒，并由于静电作用形成一种稳定的胶体状态，故称之为胶体金。胶体金溶液的常见制备方法大致分为白磷还原法、硼氢化钠还原法、抗坏血酸盐还原法、柠檬酸三钠还原法和鞣酸柠檬酸三钠还原法。其基本原理是向一定浓度的金溶液内加入适量还原剂，使金离子还原为金原子。通
免疫球蛋白标记技术_酶标记抗体
免疫标记技术是用特定的物质标记抗原或抗体进行的抗原抗体反应。可借助各种仪器观察结果或进行自动化测定，可在细胞、亚细胞、超微结构及分子水平上，对抗原抗体反应进行定性和定位研究；或应用各种液相和固相免疫分析方法，对液体中的抗原、半抗原或抗体进行定性和定量测定。实验方法原理酶标记物包括酶标记抗原、酶标记抗
常用的免疫胶体金检测技术斑点免疫金渗滤法
斑点免疫金渗滤法应用微孔滤膜（如膜）作载体，先将抗原或抗体点于膜上，封闭后加待检样本，洗涤后用胶体金标记的抗体检测相应的抗原或抗体。
非标记抗体免疫电镜技术
（一） 原理 标记抗体法虽然具有许多优点，但也存在一些难以克服的问题，如标记抗体的分子增大，对细胞膜和组织的穿透力减弱；化学交联反应对抗体和酶的活性有所影响；结合物中未标记的抗体可与抗原竞争结合，影响检测方法的敏感性等。不标记抗体法可以避免上述的不利影响因素，通过一系统的非标记抗体的免疫学反应
断裂标记免疫电镜技术（2）
)超薄切片法步骤:①至⑤同临界点干燥法。⑥1%锇酸，室温固定2h，系列酒精或丙酮脱水，常规电镜包埋。⑦切半薄片，光镜定位合适的断裂部位，再切超薄切片，铀铅染色，透射电镜观察。断裂标记法目前文献报告应用较多的是植物凝集素-胶体金免疫标记技术，常用的如刀豆球蛋白(Con A)-- 胶体金免疫标记技术.C
断裂标记免疫电镜技术（1）
断裂-标记免疫电镜技术此法是先进行冷冻断裂，再做免疫标记，从而可以对断裂开的各种膜结构及胞浆断面进行标记。(1)临界点干燥法①固定:1.0%~2.5%戊二醛PBS液4℃1~2h，PBS冲洗3min×3。如为细胞悬液，可加入30%BSA后加入1%戊二醛，使BSA凝胶化，将凝胶切成2mm左右的小块，用3
断裂—标记免疫电镜技术介绍
此法是先进行冷冻断裂，再做免疫标记，从而可以对断裂开的各种膜结构及胞浆断面进行标记。（1）临界点干燥法①固定：1.0%～2.5%戊二醛PBS液4℃1～2h，PBS冲洗3min×3。如为细胞悬液，可加入30%BSA后加入1%戊二醛，使BSA凝胶化，将凝胶切成2mm左右的小块，用30%的甘油—PBS浸透
非标记抗体免疫电镜技术
一、原理 标记抗体法虽然具有许多优点，但也存在一些难以克服的问题，如标记抗体的分子增大，对细胞膜和组织的穿透力减弱；化学交联反应对抗体和酶的活性有所影响；结合物中未标记的抗体可与抗原竞争结合，影响检测方法的敏感性等。不标记抗体法可以避免上述的不利影响因素，通过一系统的非标记抗体的免疫学反应，对组织
免疫标记主要是检查什么
免疫标记检查的种类较多，比如荨麻疹、水痘等等。免疫标记技术是在已知抗体或抗原标记上易显示的物质，通过检测标记物来反映抗原抗体反应的情况，从而间接地测出被检抗原或抗体的存在与否或量的多少的一种生物技术。常用的标记物有荧光素、酶、放射性核素及胶体金等。免疫标记技术具有快速、定性或定量甚至定位的特点，是目
什么是免疫学标记？
免疫学标记(Immune Genetic Markers)是以动物的免疫学特征为遗传标记，主要指：红细胞抗原、白细胞抗原、胸腺细胞抗原等。早在1900年，Ehrlich和Morgenroth指出山羊红细胞表面存在抗原，并证明这些抗原具有个体差异；20世纪80年代初，人们转向白细胞抗原的研究，即主
标记免疫分析技术的种类
免疫标记分析技术主要包括：放射物标记、酶标记、发光标记、荧光标记和金标记方法。1 放射物标记分析：用放射物标记抗原或抗体发展的放射免疫分析(radio immunoassay, RIA)是美国科学Yalow和Berson于1959年创立的一种微量分析法,它是将具有高灵敏度的放射性核素示踪技术和特异性
免疫标记技术及其应用
近二十几年来，免疫学检测的方法发展很快，特别是在使用标记了的抗原和抗体的分析技术以后，使检测的敏感性和特异性都大大提高。继20世纪50年代的免疫荧光(1FA)和60年代的放射免疫(RIA)分析技术之后，在70年代初期又建立了用酶来标记抗原或抗体的分析技术。 标记免疫技术是将某种可微量测定或超微量
放射免疫标记技术
一、放射免疫标记技术放射免疫标记技术是将同位素分析的高灵敏度与抗原抗体反应的特异性相结合，以放射性同位素作为示踪物的标记免疫测定方法，由于此项技术具有灵敏度高 (可检测出毫微克(ng)至微微克(pg)，甚至毫微微克(fg)的超微量物质，特异性强(可分辨结构类似的抗原)、重复性强、样品及试剂用量少
非标记抗体免疫电镜实验
实验方法原理 标记抗体法虽然具有许多优点，但也存在一些难以克服的问题，如标记抗体的分子增大，对细胞膜和组织的穿透力减弱；化学交联反应对抗体和酶的活性有所影响；结合物中未标记的抗体可与抗原竞争结合，影响检测方法的敏感性等。不标记抗体法可以避免上述的不利影响因素，通过一系统的非标记抗体的免疫学反应，对组
常用的免疫胶体金检测技术胶体金免疫层析法
胶体金免疫层析法将特异性的抗原或抗体以条带状固定在膜上，胶体金标记试剂（抗体或单克隆抗体）吸附在结合垫上，当待检样本加到试纸条一端的样本垫上后，通过毛细作用向前移动，溶解结合垫上的胶体金标记试剂后相互反应，再移动至固定的抗原或抗体的区域时，待检物与金标试剂的结合物又与之发生特异性结合而被截留，聚集在
视神经损伤模型实验—荧光金逆行性标记
实验方法原理在上丘和外侧膝状体进行荧光金逆行性标记存活的节细胞。这种方法常结合视神经夹伤模型使用。上丘逆行性标记可分为两种，损伤前标记及损伤后标记。损伤前标记用于研究存活的节细胞，一般在损伤前3d进行标记。损伤后标记一般用于研究存活的纤维及再生纤维，一般在处死前3d进行标记。实验材料实验动物试剂、试
胶体金标记技术（制备方法和应用）
胶体金标记技术是以胶体金作为示踪标志物或显色剂，应用于抗原抗体反应的一种新型免疫标记技术。由于它不存在内源酶干扰及放射性同位素污染等问题，且利用不同颗粒大小的胶体金还可以作双重甚至多重标记，使定位更加精确。因此已成为继荧光素、酶、同位素及乳胶标记技术之后的一种新型标记技术。现已广泛应用于电镜、流式细
胶体金标记的抗体是什么意思
胶体金是一种常用的标记技术，是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体的一种新型的免疫标记技术，有其独特的优点。近年已在各种生物学研究中广泛使用。在临床使用的免疫印迹技术几乎都使用其标记。同时在流式、电镜、免疫、分子生物学以至生物芯片中都可能例用到。 1971年Faulk 和Taytor将胶体金引
金垫中胶体金标记的抗体释放不够，这是什么原因
可能是因为你的胶体金的颗粒大小的选择和最佳抗体标记量的选择上出了问题，这是多方面的因素导致的，你得先固定一个影响因子来调另一个因子，这样反复实验看看效果。
免疫球蛋白标记技术_荧光素标记抗体技术
实验方法原理目前用于抗体标记的荧光素主要有异硫氰酸荧光素（Fluorescein isothiocynate，FITC）或罗达明（Lissamine rhodamine B200，RB200）。在碱性条件下FITC的碳酰胺键可与抗体赖氨酸的ε氨基共价结合，标记后的抗体仍保持与相应抗原结合的能力。在荧