蛋白质印迹法分类
Western Blot显色的方法主要有以下几种：i. 放射自显影ii. 底物化学发光ECLiii. 底物荧光ECFiv. 底物DAB呈色现常用的有底物化学发光ECL和底物DAB呈色，体同水平和实验条件的是用第一种方法，发表文章通常是用底物化学发光ECL。只要买现成的试剂盒就行，操作也比较简单，原理如下（二抗用HRP标记）：反应底物为过氧化物+鲁米诺，如遇到HRP，即发光，可使胶片曝光，就可洗出条带。......阅读全文
蛋白质印迹法常见问题及解决方案分析
常见问题及解决方案问题原因解决方案胶不平玻璃板不干净胶板洗刷干净；催化剂或加速剂的量不合适加入过硫酸铵和TEMED的量要合适；试剂未混均，致使部分胶块聚合不均匀加入试剂后摇匀，使其充分混合；受热不均匀导致胶聚合不均匀温度合适凝胶漏液玻璃板未对齐两块玻璃板底部要对齐条带比正常的窄凝胶聚合不均匀灌胶时候
DNA印迹法的定义
Southern印迹法(Southern Blot)是将基因组 DNA经限制性内切酶酶解、琼脂糖凝胶电泳分离,使DNA片段按分子量大小排列在琼脂糖凝胶上。经碱处理凝胶使DNA变性(使双链DNA变成单链),通过具有一定盐离子浓度溶液的毛细管作用,将凝胶中变性的单链DNA片段原位地吸印到硝酸纤维素滤膜或
免疫印迹法过程
免疫印迹法 是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。 1、SDS-PAGE试剂：见电泳实验。2、匀浆缓冲液：1.0M Tris-HCl(pH 6.8)1.Oml；10%SDS 6.0ml；β-巯基乙醇 0
RNA－印迹法的概念
中文名称RNA 印迹法英文名称Northern blotting定 义将电泳分离的RNA从凝胶中转移到纤维素膜或尼龙膜上，用32P标记的RNA或DNA杂交进行检测的方法。主要用于检测目的基因的转录水平。应用学科细胞生物学（一级学科），细胞生物学技术（二级学科）
Western印迹法检测蛋白
实验概要Western印迹法检测蛋白的敏感性约为1-5ng，0.75mm厚的SDS-PAGE板的一个孔可上总蛋白量约为100μg，所以只要被检蛋白不低于总蛋白量的万分之一，即可被检测出来。如果所分析的样品为未知时，应同时作阳性对照。杂交技术主要有NC膜的封闭，靶蛋白与第一抗体的反应，结合靶蛋白的一抗
Western印迹法检测蛋白
实验概要Western印迹法检测蛋白的敏感性约为1-5ng，0.75mm厚的SDS-PAGE板的一个孔可上总蛋白量约为100μg，所以只要被检蛋白不低于总蛋白量的万分之一，即可被检测出来。如果所分析的样品为未知时，应同时作阳性对照。杂交技术主要有NC膜的封闭，靶蛋白与第一抗体的反应，结合靶蛋白的一抗
DNA－印迹法的概念
中文名称DNA 印迹法英文名称Southern blotting定 义DNA经酶切和凝胶电泳分离后转移至尼龙膜或硝酸纤维素薄膜上，用探针进行杂交后分析目的DNA片段的方法。应用学科细胞生物学（一级学科），细胞生物学技术（二级学科）
蛋白质免疫印迹实验
实验步骤 操作流程(1)制备与凝胶大小一致的硝酸纤维素膜一张，吸水滤纸 2 张 (Whatman 3 MM)。(2) 将凝胶在转印缓冲液中浸泡 30m in，将转移膜、滤纸和海绵垫也在同样的缓冲液浸湿。(3) 安装转印「夹心三明治」。将凝胶放置在玻璃平板上，然后将一张浸湿的滤纸放在凝胶上，如
蛋白质免疫印迹实验
蛋白质免疫印迹实验 实验步骤 操作流程 (1)制备与凝胶大小一致的硝酸纤维素膜一张，吸水滤纸 2 张
蛋白质印迹实验——检测
试剂、试剂盒甘氨酸TrisSDS甲醇实验步骤电泳转移后，小心地从固定化材料上剥离凝胶。如果有小块凝胶留在膜上，用双蒸水洗，然后用湿的软棉花擦去凝胶，残留在膜上的凝胶会导致染色后在膜上出现 “白点”。膜可以贮存，也可以立即染色或用其他方式检测。大部分用于电泳的染色方法都可用于膜。主要的限制是背景染色。
蛋白质免疫印迹技术
实验概要免疫印迹是利用聚丙烯酰胺凝胶电泳来检测样品或提取物中某种特定蛋白的方法。聚丙烯酰胺凝胶紧贴着膜放置，在电流的作用下蛋白质从凝胶迁移到膜上并且被固定，常用的膜是硝酸纤维素或 PVDF（聚偏乙烯氟化物）。膜是凝胶蛋白质的复制品，然后可以与抗体结合后进行染色。实验步骤1. 样品准备1) 抽
蛋白质印迹（Western－blotting）
印迹法（blotting）是指将样品转移到固相载体上，而后利用相应的探测反应来检测样品的一种方法。1975年，Southern建立了将 DNA转移到硝酸纤维素膜（NC膜）上，并利用DNA－RNA杂交检测特定的DNA片段的方法，称为Southern印迹法。而后人们用类似的方法，对 RNA和蛋白
如何阅读蛋白质印迹
Western印迹是临床医生可能会使用或要求的一种诊断技术。Western印迹通过分离样品（通常是血液样品）中的所有不同蛋白质来发挥作用。一旦分离了这些蛋白质，就可以使用称为抗体的物质来检测特定的蛋白质。这些特定蛋白质的存在与否，或检测到的蛋白质的水平，将导致诊断。如果使用诊断性蛋白质印迹，则临床医
蛋白质免疫印迹实验
这是一个建立在 B urnette 实验方案基础上的实验流程，小于 80k D a 的蛋白质的转移效果很好并且结果稳定, 重复性好。应用这种膜转移方法，我们利用多克隆抗体在下面的样本中检测目的蛋白：哺乳动物细胞和细菌溶解产物、细胞培养上清、组织提取物以及组织液。虽然下列实验条件是根据我们自己的实验需
蛋白质免疫印迹（Western－Blot－）底物化学发光－ECL－法
蛋白质免疫印迹（Western Blot ）可以：（1）从蛋白质混合物中检出目标蛋白质；（2）定量或定性确定细胞或组织中蛋白质的表达情况；（3）用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA、蛋白质-RNA 相互作用后续分析。实验方法原理———底物化学发光 ECL 法Western 免疫印迹（Western B
蛋白质印迹法阳性条带异常的原因和解决办法
可能原因验证或解决办法抗体结合不充分增加抗体浓度，延长孵育时间酶失活直接将酶和底物进行混合，如果不显色则说明酶失活了。选择在有效期内、有活性的酶联物标本中不含靶蛋白或靶蛋白含量太低设置阳性对照，如果阳性对照有结果，但标本没有则可能是标本中不含靶蛋白或靶蛋白含量太低。可考虑增加标本上样量解决靶蛋白含量
量蛋白质斑点印迹实验
蛋白质印迹法，它是用免疫学方法来测量某一蛋白质的量。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南，作者：朱厚础。试剂、试剂盒鼠抗-σ32 单克隆抗体辣根过氧化酶共价标记的羊抗鼠免疫球蛋白 GECLTM#1 和#2 试剂十二烷基肌氨酸钠Tris-缓冲盐溶液仪器、耗材硝酸纤维素膜斑点印迹装置ECLTMHYPER
快速蛋白质斑点印迹试验
试剂、试剂盒 Tris缓冲盐溶液(TBS)TBS+1%牛血清白蛋白TBS+0.1%Tween-20(TBST)5-溴-4-氯-3-吲哚-磷酸 氮蓝四唑(BCIP NBT)显色试剂鼠抗σ32单克隆抗体3RH2(MAb 3RH2)兔抗鼠免疫球蛋白G(IgG)~碱性磷酸酶缀合物仪器、耗材 硝酸纤维素膜
什么是蛋白质印迹测试？
Western blot测试,也称为免疫印迹,是对蛋白质混合物中特定蛋白质的测试。蛋白质印迹试验是在凝胶电泳或酶联免疫吸附测定(ELISA)试验后进行的,它使用抗体来鉴定特定的蛋白质。SDS页面十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)是用于分离蛋白质以进行蛋白质印迹的常用测试。当蛋白质通
蛋白质印迹的操作步骤
(1)蛋白质样品的制备 :有两种方法(直接加样缓冲液来裂解细胞,制备细胞蛋白质提取液)。(2)十二烷基酸钠-聚丙烯电泳(SDS-PAGE分离原理:根据蛋白质的分子差异)电泳:在直流电场作用下,带电的粒子向着与自身电荷相反的方向移动的现象。电泳迁移率与分子量的对数呈线性关系。(3)蛋白质的电转移 采用
快速蛋白质斑点印迹试验
试剂、试剂盒 Tris缓冲盐溶液(TBS) TBS+1%牛血清白蛋白 TBS+0.1%Tween-20(TBST) 5-溴-4-氯-3-吲哚-磷酸 氮蓝四唑(BCIP NBT)显
蛋白质的Western－blot印迹分析
一、原理 一个基因表达的最终产物是产生相应的蛋白，因此检测蛋白是测定基因表达的主要标志。 原理：Western Blotting 是将获得的蛋白质样品通过SDS-聚丙稀酰胺凝胶电泳，对不同分子量的蛋白质进行分离；并通过转移电泳将凝胶上分离到的蛋白质转印至固相支持物上，用抗靶蛋白的非标记抗体（
快速蛋白质斑点印迹试验
试剂、试剂盒Tris缓冲盐溶液(TBS)TBS+1%牛血清白蛋白TBS+0.1%Tween-20(TBST)5-溴-4-氯-3-吲哚-磷酸 氮蓝四唑(BCIP NBT)显色试剂鼠抗σ32单克隆抗体3RH2(MAb 3RH2)兔抗鼠免疫球蛋白G(IgG)~碱性磷酸酶缀合物仪器、耗材硝酸纤维素膜实验步骤
定量蛋白质斑点印迹实验
试剂、试剂盒 鼠抗-σ32 单克隆抗体 辣根过氧化酶共价标记的羊抗鼠免疫球蛋白 G ECLTM#1 和#2 试剂 十二烷基肌氨酸钠 Tris-缓冲盐溶液
蛋白质印迹(westernblot)
实验原理印迹法一般由凝胶电泳；样品的印迹和固定化；各种灵敏的检测手段如抗体、抗原反应等三大实验部分组成。生物大分子凝胶电泳分离 蛋白质印迹法的第一步一般是将蛋白质进行SDS聚丙烯酰胺平板凝胶电泳，使待测蛋白质在电泳中按相对分子质量大小在板状胶上排列。2.分子区带的转移和固定 第二步就是反凝胶电泳已分
定量蛋白质斑点印迹实验
试剂、试剂盒 鼠抗-σ32 单克隆抗体辣根过氧化酶共价标记的羊抗鼠免疫球蛋白 GECLTM#1 和#2 试剂十二烷基肌氨酸钠Tris-缓冲盐溶液仪器、耗材 硝酸纤维素膜斑点印迹装置ECLTMHYPERFILM或柯达 X 光底片缓冲液 A实验步骤 材料与设备样品，由各步纯化操作所得硝酸纤维素膜 (0.
DNA－印迹法的技术特点
中文名称DNA 印迹法英文名称Southern blotting定 义DNA经酶切和凝胶电泳分离后转移至尼龙膜或硝酸纤维素薄膜上，用探针进行杂交后分析目的DNA片段的方法。应用学科细胞生物学（一级学科），细胞生物学技术（二级学科）
DNA印迹法所需仪器试剂
仪器1电热真空干燥箱 2硝酸纤维素滤膜或尼龙膜 3大方瓷盘、带盖方盘、玻璃板 4滤纸、吸水纸、保鲜膜、蜡膜Parafilm、一次性手套等 5刀片、刻度吸管、镊子、剪刀、lkg重物 材料电泳分离DNA的琼脂糖凝胶试剂1 酸变性液:0.25mol/L HCl, 用分析纯的盐酸12Mol/L稀释 2碱变性
免疫印迹法检测原理
免疫印迹法是在蛋白质电泳分离和抗原抗体检测的基础上发展起来的一项检测蛋白质的技术，它将SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的高分辨力与抗原抗体反应的高特异性相结合。第一阶段为SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）。抗原等蛋白样品经SDS处理后带负电荷，在聚丙烯酰胺凝胶中从阴极向阳极泳动，分子量越小，泳
菌落印迹法的技术用途
中文名称菌落印迹法英文名称colony blotting定 义将固体培养平板上的菌落吸印转移到滤膜上的技术。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），方法与技术（二级学科）