变性凝胶电泳实验——缓冲液梯度测序胶

实验方法原理在本实验方案,测序胶底部的缓冲液浓度大于其顶部浓度,使得短寡核苷酸片段(胶底部)的迁移率相对比长寡核苷酸(顶部)的迁移率要慢一些,这洋凝胶可电泳更长的时间而不至于短核苷醆从底部走失并改善了长核苷酸链的分离度。实验材料DNA试剂、试剂盒TEMEDSDSTBE仪器、耗材烧杯电泳仪实验步骤1. 按基本方案步骤1~5组装凝胶平板夹层。 2. 在2个100 ml 烧杯中,配制缓冲液梯度凝胶溶液:50 ml 用0.5×TBE配制,25 ml 用2.5×TBE配制,在50℃以下加热至固体完全溶解,冷却至室 温,加人20 μl TEMED和200 μl 10%SDS过硫酸氨于0.5 ×TBE / 凝胶溶液,轻轻混匀。加入10 μl TEMED及100 μl 10%过硫酸铵于2.5×TBE / 凝胶溶液中轻轻混匀。 3. 用23 ml 带橡皮吸球的吸管,吸出12.5 ml 清亮的......阅读全文

变性凝胶电泳实验——缓冲液梯度测序胶

实验方法原理在本实验方案,测序胶底部的缓冲液浓度大于其顶部浓度,使得短寡核苷酸片段(胶底部)的迁移率相对比长寡核苷酸(顶部)的迁移率要慢一些,这洋凝胶可电泳更长的时间而不至于短核苷醆从底部走失并改善了长核苷酸链的分离度。实验材料DNA试剂、试剂盒TEMEDSDSTBE仪器、耗材烧杯电泳仪实验步骤1.

变性凝胶电泳实验——电解质梯度测序胶

实验方法原理通过简单地提高下槽缓冲液的盐浓度,使凝胶底部的离子強度得以提高,在电泳过程中,盐离子可以电泳进入凝胶并产生重复性好的及有效的梯度。实验材料DNA试剂、试剂盒TBE乙酸钠仪器、耗材电泳仪实验步骤1.  按基本方案步骤1~22灌制凝胶及进行预电泳,但上槽缓冲液为0.5×TBE,下槽为1×TB

变性凝胶电泳实验——含甲酰胺的测序胶

实验方法原理聚丙烯酰胺凝胶加人甲酰胺可以使造成条带压缩的测序产物的二级结构不稳定。实验材料DNA试剂、试剂盒甲酰胺甲醇乙醇TEMEDSDS仪器、耗材电泳仪实验步骤1.  按基本方案步骤1~5组装凝胶平板夹层。 2.  按所需浓度配制甲酰胺凝胶溶液,加热轻轻挽拌使之溶解,冷却至30℃以下。3.  加入

配制电解质梯度胶实验

试剂、试剂盒 本方法包括方案 8 中所有物品加上: 甲酰胺(100%)离子梯度胶醋酸钠实验步骤 材料本方法包括方案 8 中所有物品,加上:甲酰胺(100%)离子梯度胶用 1XTBE 配制,有无甲酰胺均可。关于含甲酰胺的聚丙烯酰胺凝胶,请见方案 9。醋酸钠(3mol/L,PH7.0)方法1. 依方案

配制电解质梯度胶实验

Sheen 和 Seed(1980) 创造了一种既聪明又简单的改进方法,利用顶部和底部不同浓度的电泳缓冲液在胶中产生离子梯度,而胶本身的浓度是一定的。利用此法,从单块凝胶上可以读取的核苷酸总数可增加约 30%。本实验来源于分子克隆实验指南(第三版)下册,者:〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。

配制电解质梯度胶实验

            试剂、试剂盒 本方法包括方案 8 中所有物品 加上: 甲酰胺(100%) 离子梯度胶 醋酸钠 实验步骤

由非变性凝胶电泳迁移率法评估均一性实验

当蛋白质在保持其天然构型不变的条件下进行电泳时,其迁移率可以作为它的均一性的一种量度。由于迁移率是电荷和形状两者的函数,因此可以预期,能将单体、二聚体等形式彼此分开。也有可能因异构体形状的差异而用非变性凝胶电泳把蛋白质的构象异构体(conformational isomer) 分开。本实验来源于蛋白

由非变性凝胶电泳迁移率法评估均一性实验

试剂、试剂盒 核心 RNA 聚合酶核心 RNA 聚合酶-σ32 复合物σ32 非变性胶样品缓冲液储存缓冲液考马斯亮蓝(CBB) 染色液脱色液仪器、耗材 非变性凝胶电泳装置实验步骤 材料与设备核心 RNA 聚合酶核心 RNA 聚合酶-σ32 复合物,由免疫亲和柱洗脱所得σ32,由 POROS 50S

由非变性凝胶电泳迁移率法评估均一性实验

            试剂、试剂盒 核心 RNA 聚合酶 核心 RNA 聚合酶-σ32 复合物 σ32 非变性胶样品缓冲液 储存缓冲液 考马斯亮蓝(CBB) 染色

固相pH梯度等电聚焦实验——制胶

实验方法原理固相 pH 梯度凝胶是由固相 pH 梯度介质(丙烯酰胺衍生物)共价结合到聚丙烯酰胺凝胶中并形成 pH 梯度,所以制胶过程比载体两性电解质凝胶复杂。灌胶的方法与常规聚丙烯酰胺梯度凝胶和 SDS 梯度凝胶相似。高质量的凝胶介质和固相 pH 梯度介质,聚合过程以及漂洗对固相 pH 梯度凝胶是非

如何配制sdspage梯度胶

操作步骤( 1 )在制板支架上置一专用有机玻璃槽,将固定好的玻璃板下部插入槽内,中部用两个文具夹固定在支架竖板上。在槽内倒入已充分溶化的琼脂,冷凝后封闭胶腔底部。( 2 )用直径约 2mm 的聚乙烯管连接好梯度混合器、恒流泵、凝胶模。( 3 ) 30% 胶液的配制取 50ml 烧杯一只,加凝胶贮液①

SDSPAGE梯度胶怎么配置

操作步骤( 1 )在制板支架上置一专用有机玻璃槽,将固定好的玻璃板下部插入槽内,中部用两个文具夹固定在支架竖板上。在槽内倒入已充分溶化的琼脂,冷凝后封闭胶腔底部。( 2 )用直径约 2mm 的聚乙烯管连接好梯度混合器、恒流泵、凝胶模。( 3 ) 30% 胶液的配制取 50ml 烧杯一只,加凝胶贮液①

制胶缓冲液的生理作用

制胶缓冲液:浓缩胶选择pH6.8,分离胶选择pH8.8,选择Tris-HCl系统。

变性凝胶电泳实验

基本方案 缓冲液梯度测序胶 电解质梯度测序胶 含甲酰胺的测序胶             实验材料 DNA

变性凝胶电泳实验

 实验材料 DNA试剂、试剂盒 乙醇异丙醇二甲基二氯硅烷TEMED变性丙烯酰胺溶液SDS仪器、耗材 电泳仪注射器巴斯德吸管干胶机实验步骤 1.  制作每块凝胶时,首先要用肥皂及水小心严格地清洗两块30 cm×40 cm的前后玻璃平板,用去离子水冲洗后晾干,用喷射洗瓶喷10%乙酵或异丙醇使平板湿海。2

变性条件下的凝胶电泳实验——梯度胶凝胶电泳

实验方法原理在凝胶电泳中使用丙烯酰胺梯度胶比使用线性胶有两大优点。一是在高浓度丙烯酰胺条件下可以增加蛋白质的分子筛作用,从而使低分子量蛋白质形成淸晰的条带。另一是梯度胶可以在块胶内分离分子量范围更大的蛋白质(如 5%~20% 的凝胶可以分离 15 kDa~200 kDa 的蛋白质;而 3%~30%

配胶缓冲液系统对电泳的影响

在SDS-PAGE不连续电泳中,制胶缓冲液使用的是Tris-HCl缓冲系统,浓缩胶是pH=6.7,分离胶pH=8.9;而电泳缓冲液使用的Tris-甘氨酸缓冲系统。在浓缩胶中,其pH环境呈弱酸性,因此甘氨酸解离很少,其在电场的作用下,泳动效率低;而Cl-离子却很高,两者之间形成导电性较低的区带,蛋白分

配胶缓冲液系统对电泳的影响

在SDS-PAGE不连续电泳中,制胶缓冲液使用的是Tris-HCl缓冲系统,浓缩胶是pH=6.7,分离胶pH=8.9;而电泳缓冲液使用的Tris-甘氨酸缓冲系统。在浓缩胶中,其pH环境呈弱酸性,因此甘氨酸解离很少,其在电场的作用下,泳动效率低;而Cl-离子却很高,两者之间形成导电性较低的区带,蛋白分

配胶缓冲液系统对电泳的影响

在SDS-PAGE不连续电泳中,制胶缓冲液使用的是Tris-HCL缓冲系统,浓缩胶是pH6.7,分离胶pH8.9;而电泳缓冲液使用的Tris-甘氨酸缓冲系统。在浓缩胶中,其pH环境呈弱酸性,因此甘氨酸解离很少,其在电场的作用下,泳动效率低;而CL离子却很高,两者之间形成导电性较低的区带,蛋白分子就介

配胶缓冲液系统对电泳的影响

在SDS-PAGE不连续电泳中,制胶缓冲液使用的是Tris-HCl缓冲系统,浓缩胶是pH=6.7,分离胶pH=8.9;而电泳缓冲液使用的Tris-甘氨酸缓冲系统。在浓缩胶中,其pH环境呈弱酸性,因此甘氨酸解离很少,其在电场的作用下,泳动效率低;而Cl-离子却很高,两者之间形成导电性较低的区带,蛋白分

甲醛变性凝胶电泳鉴定RNA实验_凝胶电泳法

本实验旨在学会甲醛变性凝胶电泳鉴定RNA 的方法。琼脂糖凝胶电泳作为鉴定大分子物质经常被使用, 但含有RNase 酶活性, 因此要使RNase 变性而不使RNA 变性的, 故采用甲醛变性凝胶电泳鉴定RNA。实验方法原理琼脂糖凝胶电泳作为鉴定大分子物质经常被使用, 但含有RNase 酶活性, 因此要使

蛋白质的单向SDS凝胶电泳实验——制备多块梯度胶

实验材料蛋白质试剂、试剂盒TEMED丙烯酰胺仪器、耗材离心管电泳仪实验步骤1.  如灌制均一浓度凝胶一样在多板凝胶灌制装置中组装好微型胶夹层。 2.  如图一、安装好30 ml 梯度发生器、磁力搅拌器、蠕动泵(可选用)和聚乙烯Tygon管,梯度发生器的输出端连接于制胶室下方的输入口。图一3.  配制

免疫共沉淀确定结合蛋白实验

当细胞在非变性条件下被裂解时,完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间结合保持下来。这一亊实可被用于检测和确定生理条件下相关的蛋白质-蛋白质间相互作用。本实验来源于分子克隆实验指南(第三版)下册,作者:〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。实验材料培养基中生长的适宜细胞株试剂、试剂盒乙腈考马斯亮蓝

电泳系统Biometra

  Biometra为您提供各种核酸/蛋白质电泳设备,其中TGGE系统是独家生产的新一代产品,并享受ZL保护。该系统能够产生稳定而有效的温度梯度,基于生物大分子在不同温度下分子构象发生变化,进而发生电泳行为变化的原理,用于研究生物大分子突变、分子内或分子间相互作用、蛋白热稳定性及其他相关研究。  

电泳系统Biometra

  Biometra为您提供各种核酸/蛋白质电泳设备,其中TGGE系统是独家生产的新一代产品,并享受ZL保护。该系统能够产生稳定而有效的温度梯度,基于生物大分子在不同温度下分子构象发生变化,进而发生电泳行为变化的原理,用于研究生物大分子突变、分子内或分子间相互作用、蛋白热稳定性及其他相关研究。  

甲醛变性凝胶电泳鉴定RNA实验

实验方法原理 琼脂糖凝胶电泳作为鉴定大分子物质经常被使用, 但含有RNase 酶活性, 因此要使RNase 变性而不使RNA 变性的, 故采用甲醛变性凝胶电泳鉴定RNA。实验材料 RNA试剂、试剂盒 MOPS乙酸钠EDTA蔗糖EDTA溴酚蓝二甲苯青甲醛仪器、耗材 电泳槽电泳仪实验步骤 1.  制备凝

甲醛变性凝胶电泳鉴定RNA实验

凝胶电泳法             实验方法原理 琼脂糖凝胶电泳作为鉴定大分子物质经常被使用, 但含有RNase 酶活性, 因此要使RNase 变性而不使RNA 变性的, 故采用甲

变性凝胶电泳实验——基本方案

DNA序列测定的准确性很大程度取决于测序产物在变性聚丙烯酰胺凝胶上的分离度。一般说来,用于DNA测序的凝胶需要长40  cm,厚度均匀,含有4%~8%丙烯酰胺和7 mol/l 尿素。实验材料DNA试剂、试剂盒乙醇异丙醇二甲基二氯硅烷TEMED变性丙烯酰胺溶液SDS仪器、耗材电泳仪注射器巴斯德吸管干胶

细胞系的-DNA-STR-谱_利用ABI377DNA测序仪进行凝胶电泳

试剂、试剂盒TEMEDSGM Plus®凝胶上样混合液仪器、耗材ABI377 DNA 测序仪制胶材料凝胶装置材料冰或者电制冷板热循环仪凝胶板和凝胶盒缓冲液梢热传导板实验步骤1. 在烧杯中混合以下各成分,制备 4 % 聚丙烯酰胺凝胶(制胶材料:量筒、天平、过滤器(如 Sartolab 150 ml 滤

免疫共沉淀确定结合蛋白实验

实验材料 培养基中生长的适宜细胞株试剂、试剂盒 乙腈考马斯亮蓝 R-250EBC 裂解缓冲液NETN磷酸盐缓冲溶液SDS 凝胶加样缓冲液三氟乙酸胰蛋白酶胰蛋白酶消化缓冲液沉淀靶蛋白的抗体对照抗体不连续的 SDS-PAGE 梯度胶仪器、耗材 沸水浴蛋白质 A-Sepharose平板摇台实验步骤 材料缓