电穿孔转染DNA实验
电穿孔可以有效地转染磷酸钙-DNA 沉淀物等其他方法转染效果不好的细胞系。但是，与其他转染方法一样，未使用过的细胞系进行电穿孔转染的实验条件要经过优化。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。实验材料指数生长的哺乳动物细胞培养液试剂、试剂盒Giemsa 染液甲醇磷酸盐缓冲液丁酸钠载体 DNA细胞生长培养基仪器、耗材组织培养皿基因脉冲器 II电穿孔设备与电转化池Sorvall H1000B 转子或类似设备实验步骤材料缓冲液与溶液贮存液、缓冲液与试剂的成分见附录 1。稀释贮存液至所需浓度Giemsa 染液（10%m/V)Giemsa 染液应使用前用磷酸盐缓冲液或水新鲜制备的，用 Whatman1 号滤纸过。甲醇磷酸盐缓冲液溶液使用前过滤除菌，室温保存丁酸钠（500 mmol/L)(备选）在化学通风橱内，用10mol/LNaOH 调节丁酸贮存液至 pH7.0。用 0.22um 的滤器......阅读全文
磷酸钙介导的质粒－DNA－转染真核细胞实验
实验材料 指数生长的哺乳动物细胞 试剂、试剂盒 CaCl2 氯喹 Giemsa 染液
磷酸钙介导的质粒－DNA－转染真核细胞实验
本方法中介绍的磷酸钙介导的质粒 DNA 转染贴壁细胞是对 Jordan 等建立的方法 (1996) 的改进。Jordan 等大大优化了磷酸钙介导的中国仓鼠卵巢细胞与人胚肾 293 细胞的转染方法。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。实验材料指数
几种常用的转染方法
一、物理-化学方法 脂质体转染法：采用脂质体转染试剂，将遗传物质如质粒, siRNA等转移至细胞内。 此种方法易于操作且不需要许多步骤或特殊的专业知识。通常情况下，你只需要一种转染试剂和一种兼容的生长培养基 (通常是低血清且具有良好的缓冲作用，使细胞在转染过程中保持活性)。不同的厂商有自己的
细胞转染原理及常见转染方法的比较（一）
实验原理：转染是将外源性基因导入细胞内的一种专门技术。随着基因与蛋白功能研究的深入，转染目前已成为实验室工作中经常涉及的基本方法。常规转染技术可分为两大类,一类是瞬时转染,一类是稳定转染（永久转染）。前者外源 DNA /RNA不整合到宿主染色体中,因此一个宿主细胞中可存在多个拷贝数,产生高水平的
细胞瞬时转染
细胞瞬时转染 实验方法原理 通过脂质体介导转染法及电穿孔等基因转染技术，将靶基因导入细胞，一般在转染后48小时左右，靶基因即可在细胞内表达。根据不同的实验目的
关于转染试剂的简介
哺乳动物的转染技术在60年代末70年代初即已引入。 将外源DNA 导入哺乳动物细胞的方法大致可分为两大类，即生物方法和物理化学方法。物理化学方法中常用的有磷酸钙法、显微注射、电穿孔、脂质体介导的转染，以及最近出现的以高分子聚合物为载体的基因传递技术。生物方法则主要是以病毒作为载体,通过病毒感染
脂质体介导DNA转染法
脂质体（LR）试剂是阳离子脂质体DOTMA和DOPE的混合物（1：1）。它适用于把DNA转染入悬浮或贴壁培养细胞中，是目前条件下最方面的转染方法之一。转染率高，优于磷酸钙法，比它高5-100倍，能把DNA和RNA转染到各种细胞。用LR进行转染时，首先需要优化转染条件，应找出该批LR对转染某一特定细胞
DNA转染的基本概念
中文名称DNA转染英文名称DNA transfection定 义将外源DNA分子导入真核细胞的过程。一般细胞很难接受外源DNA分子，可用适当的化学或物理方法处理(如磷酸钙法、电穿孔法等)，使外源DNA容易进入细胞。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），方法与技术（二级学科）
细胞转染的途径与方法
细胞转染是指将外源分子如DNA，RNA等导入真核细胞的技术,它是研究基因表达调控，突变分析等的常规工具。细胞转染分为瞬时转染和稳定转染。瞬时转染是指外源基因进入受体细胞后，存在于游离的载体上，不整合到细胞的染色体上。稳定转染是指DNA整合到宿主细胞的染色体中。细胞转染途径（一） 物理介导：电穿孔法、
细胞瞬时转染
细胞瞬时转染可用于（1）观察目的基因功能（2）表达蛋白在某种细胞中的功能（短时间即可进行观察，但效应会很快丢失）。实验方法原理通过脂质体介导转染法及电穿孔等基因转染技术，将靶基因导入细胞，一般在转染后48小时左右，靶基因即可在细胞内表达。根据不同的实验目的，48小时后即可进行靶基因表达的检测等实验。
酿酒酵母的电穿孔转化法实验_电穿孔转化法
实验材料细胞试剂、试剂盒PEG3350仪器、耗材YPAD 液体培养基涡旋振荡器实验步骤1. 将菌株接种 100 ml 的 YPAD 液体培养基，30℃ 振荡培养过夜，使细胞滴度达到每毫升 1X108 到 2X108 个细胞。2. 3000 g 离心 5 分钟沉淀细胞，用 100 ml 灭菌水洗两遍，
细胞转染快准狠GeneCopoeia转染试剂的适用细胞
细胞转染是指将外源基因如DNA，RNA等导入细胞内的一种技术。根据哺乳动物细胞蛋白表达流程，细胞培养完成后需进行细胞转染，根据不同的实验目的可选择不同的转染方法。目前，常用的细胞转染方法主要分为三类途径：物理介导（电穿孔法，基因枪法、显微注射法）、化学介导（脂质体转染法、磷酸钙共沉淀法、阳离子聚合物
细胞转染快准狠GeneCopoeia转染试剂的适用细胞
细胞转染是指将外源基因如DNA，RNA等导入细胞内的一种技术。根据哺乳动物细胞蛋白表达流程，细胞培养完成后需进行细胞转染，根据不同的实验目的可选择不同的转染方法。目前，常用的细胞转染方法主要分为三类途径：物理介导（电穿孔法，基因枪法、显微注射法）、化学介导（脂质体转染法、磷酸钙共沉淀法、阳离子聚合物
siRNA的转染
将制备好的siRNA，siRNA表达载体或表达框架转导至真核细胞中的方法主要有以下几种： 1.磷酸钙共沉淀将氯化钙，RNA(或DNA)和磷酸缓冲液混合，沉淀形成包含DNA且极小的不溶的磷酸钙颗粒。磷酸钙-DNA复合物粘附到细胞膜并通过胞饮进入目的细胞的细胞质。沉淀物的大小和质量对于磷酸钙转染的成功至
siRNA的转染方法
将制备好的siRNA，siRNA表达载体或表达框架转导至真核细胞中的方法主要有以下几种：1.磷酸钙共沉淀将氯化钙，RNA(或DNA)和磷酸缓冲液混合，沉淀形成包含DNA且极小的不溶的磷酸钙颗粒。磷酸钙-DNA复合物粘附到细胞膜并通过胞饮进入目的细胞的细胞质。沉淀物的大小和质量对于磷酸钙转染的成功至关
siRNA的转染方法
将制备好的siRNA，siRNA表达载体或表达框架转导至真核细胞 中的方法主要有以下几种：1.磷酸钙共沉淀将氯化钙，RNA(或DNA )和磷酸缓冲液混合，沉淀形成包含DNA 且极小的不溶的磷酸钙颗粒。磷酸钙-DNA 复合物粘附到细胞 膜并通过胞饮进入目的细胞 的细胞 质。沉淀物的大小和质量对
电穿孔实验的步骤过程
电穿孔是具有几个不同阶段的多步骤过程。首先，将短的电脉冲，必须应用。典型的参数是300-400 mV，跨越膜的时间小于1 ms（注意：电池实验中使用的电压通常要大得多，因为它们被用于跨越大体积溶液的较大距离，所以横跨实际膜的结果场只是所施加的偏差的一小部分）。在施加这个电位时，膜像电容器一样充电通过
电穿孔实验的物理机制
电穿孔允许细胞引入高度带电荷的分子，例如不会被动地扩散穿过疏水性双层核心的DNA。这一现象表明，该机制是在膜上形成纳米级的充水空穴。虽然电穿孔和介电击穿这两者都是由电场的应用引起的，所涉及的机制是根本不同的。在电介质击穿中，阻挡材料被电离，产生导电通路。材料的变化因此是化学性质的。相比之下，在电穿孔
酵母转化实验_电穿孔转化
实验材料酵母试剂、试剂盒二硫苏糖醇山梨醇仪器、耗材电穿孔仪器电击池水浴锅实验步骤1. 实验前两天，将转化用酵母菌株的单菌落接种于5 ml YPD培养基中，30℃过夜培养至饱和。 2. 转化前一天晚上，在装有500 ml YPD培养基的2 L 无菌烧瓶中接种适量的过夜培养液，于30℃剧烈摇动培养过
siRNA的转染
将制备好的siRNA，siRNA表达载体或表达框架转导至真核细胞中的方法主要有以下几种： 1.磷酸钙共沉淀 将氯化钙，RNA(或DNA )和磷酸缓冲液混合，沉淀形成包含DNA 且极小的不溶的磷酸钙颗粒。磷酸钙-DNA 复合物粘附到细胞膜并通过胞饮进入目的细胞的细胞质。沉淀物的大小和质量对于磷酸钙转
电穿孔的技术简介
电穿孔或电渗透是微生物学技术，其中将电场施加到细胞以增加细胞膜的渗透性，从而允许化学品，药物或DNA被引入细胞。在微生物学中，电穿孔过程通常用于通过引入新的编码DNA来转化细菌，酵母或植物原生质体。如果细菌和质粒混合在一起后，质粒可以在电穿孔后转移到细菌中，尽管取决于正在转移的细胞穿透肽或CellS
电穿孔或电渗透的技术简介
电穿孔或电渗透是微生物学技术，其中将电场施加到细胞以增加细胞膜的渗透性，从而允许化学品，药物或DNA被引入细胞。在微生物学中，电穿孔过程通常用于通过引入新的编码DNA来转化细菌，酵母或植物原生质体。如果细菌和质粒混合在一起后，质粒可以在电穿孔后转移到细菌中，尽管取决于正在转移的细胞穿透肽或CellS
如何优化GenMuteTM转染试剂，提高siRNA/DNA共转染效率？
GenMuteTM siRNA转染试剂（Cat#SL100568）是市场上最有力的siRNA传递工具之一。siRNA/DNA共转染时，siRNA的最佳浓度范围是0.5ηM到10ηM，过多的siRNA可能导致沉默效果差的“洪水效应”，切勿使用超过20ηM的siRNA。以24孔板为例，如下步骤将对如何优
如何去除转染后悬浮细胞中的死细胞
悬浮细胞和贴壁细胞转染还是有很大不同的。脂质体转染的原理基于电荷吸引原理，先形成脂质体-dna复合物，散布在细胞周围，然后通过细胞的内吞作用，将目的基因导入细胞内，而脂质体复合物与贴壁细胞的接触机会比悬浮细胞高出很多倍，所以，脂质体转染时悬浮细胞的转染效率要明显低于贴壁细胞。我们实验室转染悬浮细胞是
xCELLigence系统实时监测低毒性XtremeGENE－DNA转染实验（一）
前言 X-tremeGENE DNA Transfection Reagent是一种非脂质体、多组分转染试剂，已被证明可有效转染多种细胞。X-tremeGENE 9和X-tremeGENE HP在有无血清条件下均可进行转染，且细胞毒性低，转染后无需更换培养基。 降低转染试剂本身的脱靶效应是非常重要的
xCELLigence系统实时监测低毒性XtremeGENE－DNA转染实验（二）
■ 终点法分析，转染约72h后通过细胞增殖试剂盒WST-1分析确定细胞活性（图3）。与X-tremeGENE 9和X-tremeGENE HP Transfection Reagent相比，其他试剂转染细胞后，显著降低代谢活力，显示出细胞毒性效应。图3：比较罗氏X-tremeGENE 9和X-tr
细胞核转染技术原理、步骤及应用
全球公认的最高效转染技术，针对免疫细胞、神经细胞、干细胞等几乎所有的难转染细胞系或原代细胞，以及悬浮细胞。 ——Amaxa品牌Nucleofector细胞核转染技术 Amaxa®Nucleofector®技术是Lonza(原Amaxa)公司的ZL创新技术，它综合应用传统的电穿孔技术及细胞特异性
真核细胞转染实验
学习和掌握外源基因导入真核细胞的主要方法——脂质体介导的转染。了解外源基因进入的一般性方法，观测外源蛋白的表达（绿色荧光蛋白），为染色准备实验材料。实验材料真核细胞试剂、试剂盒脂质体 转染液仪器、耗材CO2孵箱 离心管 6孔板
真核细胞转染实验
真核细胞的转染 实验材料 真核细胞 试剂、试剂盒 脂质体 转染液
细胞转染实验目的
学习和掌握外源基因导入真核细胞的主要方法—脂质体介导的转染。了解外源基因进入的一般性方法，观测外源蛋白的表达（绿色荧光蛋白），为染色准备实验材料。