细胞提取物中β半乳糖苷酶的测定实验
本方案介绍报道分子载体（请见图 17-5) 转染哺乳动物细胞后，测定表达的β-半乳糖苷酶活性。本方法既简单快速，又可以用可见光分光光度计进行测定。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。实验材料转染了感兴趣 DNA 的哺乳动物培养细胞试剂、试剂盒大肠杆菌β-半乳糖苷酶Tris-Cl磷酸钠ONPGNa2CO3β-巯基乙醇MgCl2实验步骤材料缓冲液和溶液贮存液稀释到适当浓度。100XMgCl20.1mol/L MgCl24.5mo1/L β-巯基乙醇临用前，加入适量的 14.7mol/Lβ-巯基乙醇贮存液。Na2CO3(1mol/L)10.6 g 无水固体溶于 100 ml 水中。1xONPGONPG 溶于 0.1mol/L 磷酸钠（pH7.5) 中，浓度为 4 mg/ml。磷酸钠（0.1mol/L，pH7.5）混合 41 ml 0.2mol/L Na2HPO4•2H2O(Mt=......阅读全文
透化细胞和退化细胞器中测定比活性实验
1.从标记细胞提取ATP1) 备下列材料：本实验用到的所有溶液必须用Mlli - Q纯化的水或它的等价物配制。冰冷的4%高氣酺（v/v)三-n-辛胺1,1,2-三氮三m乙烷32p标记的细胞带螺帽的聚丙烯离心管测量范围PH4~8的PH试纸小心：高氣酸■ 三-n -辛胺； U 1，2-三氯三氟乙烧；
透化细胞和退化细胞器中测定比活性实验
从标记的细胞或者细胞裂解物中提取ATP用发光分析定量测定ATP用高效液相层析定量测定ATP测定[γ-32P]ATP的比活性实验步骤1.从标记细胞提取ATP1) 备下列材料：本实验用到的所有溶液必须用Mlli - Q纯化的水或它的等价物配制。冰冷的4%高氣酺（v/v)三-n-辛胺1,1,2-三氮三m
非同位素分析报道基因活性实验——β半乳糖苷酶
实验材料转染的细胞试剂、试剂盒PBSTriton裂解液β-半乳糖苷酶反应缓冲液光发射加速液仪器、耗材细胞刮子绘图仪发光计计数器实验步骤1. 用PBS分别洗涤两次60 mm 培养皿中的转染β-半乳糖苷酶表达质粒的细胞及模拟转染的细胞。 2. 加入250 μl Triton裂解液，用一橡胶细胞刮子将
液态乳及乳粉中硫氰酸盐的测定
硫氰酸盐简介 硫氢酸盐是硫氰酸根离子所成的盐常见的包括无色的硫氰酸钾硫氰酸钠硫氰酸铵和硫氰酸汞。 硫氰酸钠（化学式NaSCN）是白色斜方晶系结晶或粉末，毒害品。易溶于水乙醇和丙酮。主要用作丙烯晴纤维抽丝溶剂化学分析试剂彩色电影胶片冲洗剂某些植物脱叶剂以及机场道路除莠剂还用于制药、印染、
酵母β半乳糖苷酶的测定
实验步骤展
岩藻糖苷酶的测定方法
荧光法：利用AFU水解4-甲基伞型酮α-L-岩藻吡喃糖苷，释放4-甲基伞型酮，用碱性缓冲液终止反应，并使产物呈现荧光，用360nm或365nm激发波长和400nm或448nm发射波长检测荧光强度，对照不同浓度4-甲基伞型酮制备的标准曲线求酶活性。此法敏感性高，最小检出限为0.06U/L。 [1] 比
岩藻糖苷酶的测定方法
荧光法：利用AFU水解4-甲基伞型酮α-L-岩藻吡喃糖苷，释放4-甲基伞型酮，用碱性缓冲液终止反应，并使产物呈现荧光，用360nm或365nm激发波长和400nm或448nm发射波长检测荧光强度，对照不同浓度4-甲基伞型酮制备的标准曲线求酶活性。此法敏感性高，最小检出限为0.06U/L。 [1] 比
淀粉葡糖苷酶的测定
实验方法原理 4-α-D-葡聚糖葡萄糖水解酶，葡聚糖 1，4-α-葡糖苷酶通过水解末端 1，4- 和 1，6 连接的 α-1，6-葡糖苷键释放 β-D-葡萄糖。这个实验与 α-葡糖苷酶类似，只是用糖原代替麦芽糖作为底物。一段时间以后（5 min）反应停止，葡萄糖被测出与己糖激酶/6-磷酸葡糖脱氢酶偶
精浆α葡糖苷酶测定测定方法
比色法可测定精浆中α-葡糖苷酶的活性。葡萄糖氧化酶法测定葡萄糖的生成量，反映α-葡糖苷酶的活性。国内临床上较为常用。
大鼠乳鼠成骨细胞培养实验
大鼠乳鼠成骨细胞培养培养可以：（1）获得大鼠乳鼠成骨细胞；（2）用于骨修复的细胞学机制研究。实验方法酶消化法实验方法原理取材于出生2~3 d 小鼠颅骨，以含20%胎牛血清的DMEM培养液进行培养，采用胶原酶消化法分离成骨细胞，并进行细胞接种与传代。采用胶原酶消化法分离培养成骨细胞是一种可靠、简便、快
大鼠乳鼠成骨细胞培养实验
酶消化法 实验方法原理 取材于出生2~3 d 小鼠颅骨，以含20%胎牛血清的DMEM培养液进行培养，采用胶原酶消化法分离成骨细胞，并进行细胞接种与传代。采用胶
大鼠乳鼠成骨细胞培养实验
酶消化法 实验方法原理 取材于出生2~3 d 小鼠颅骨，以含20%胎牛血清的DMEM培养液进行培养，采用胶原酶消化法分离成骨细胞，并进行细胞接种与传代。采用胶
从哺乳动物细胞中制备核和细胞质提取物—核提取物制备
实验材料转瓶或单层培养的哺乳动物细胞（如HeLa细胞）试剂、试剂盒PBS低渗缓冲液高盐缓冲液含1. 2 mol L KCl透析缓冲液液氮仪器、耗材贝克曼 JS4. 2 转子或相当的转子50 mL 圆锥形刻度聚丙烯离心管（对较小体积的提取物也可用 15 mL 的离心管）Dounce 氏玻璃匀浆器（B
β果糖苷酶测定
实验方法原理 β-D-呋喃果糖苷果糖水解酶，β-呋喃糖苷酶，转化酶，蔗糖酶。此酶水解 β-D-呋喃果糖苷中 β-D-呋喃果糖苷残基的非还原端，特别是蔗糖。这是早期生化研究中最热领域之一，Michaelis-Menten 等式就是来自于转化酶的反应。实验利用当蔗糖被切成葡萄糖和果糖的等克分子混
透化细胞和退化细胞器中测定比活性实验2
用发光分析定量测定ATP实验步骤Sigma公司提供了 -种测定MP浓度的非常简单，灵敏&又方便的方法。其原理是用荧光素酶从荧光素和ATP中产生光。在荧光素/荣光素酶浓度恒定的情况下，可以绘制一条不同ATP浓度时产光量变化的标准曲线，因此可以很容易地对来自细胞裂解物的未知样品进行定量。然而，如果要测定
透化细胞和退化细胞器中测定比活性实验1
从标记的细胞或者细胞裂解物中提取ATP实验步骤1.从标记细胞提取ATP1) 备下列材料：本实验用到的所有溶液必须用Mlli - Q纯化的水或它的等价物配制。冰冷的4%高氣酺（v/v)三-n-辛胺1,1,2-三氮三m乙烷32p标记的细胞带螺帽的聚丙烯离心管测量范围PH4~8的PH试纸小心：高氣酸■
透化细胞和退化细胞器中测定比活性实验3
用高效液相层析定量测定ATP实验步骤1)准备下列材料：Whatman Partisphere SAX高效液相层析柱和保护柱线性梯度洗脱液设定在254nm的紫外线监测仪装配好的0.2;mi Whatman滤膜和滤器0.2^?过滤的Milli-Q水0.2/im S@_0,:5m〇l/LNH4H2ro4
透化细胞和退化细胞器中测定比活性实验4
测定[γ-32P]ATP的比活性实验步骤准备下列材料：含有未知浓度mp] ATP的细胞裂解物样品10mg/ml激酶底物肽渐夜（Calbiochem)0.5mraol/L cAMP 溶液 I、Calbiochem)cA-PrK (Calbiochem)cA-PrK分析缓冲液lmol/L DTT储存液（
卤素水分测定仪快速测定牛奶、酸奶中全乳固体
全乳固体是牛乳和酸奶的一项重要检测指标，目前使用的测定方法是GB5409-85及GB/T5009146-2003〔1，2〕。其一为计算法，因脂肪测定复杂，成本高用时长，故很少采用;其二为减重法，测定耗时长达4～5h，不适合大批样品的测定，对生产的实用性也不大。袁旭等〔3-5〕在GB5409-85的基
报告基因实验——植物提取物中LUC活性的检测
实验材料植物组织试剂、试剂盒裂解液萤光素酶分析缓冲液仪器、耗材离心机实验步骤一、完整组织1. 液氮速冻植物组织（5~50 mg)，研磨成粉末状。2. 100~400 ul 裂解液室温重悬，组织匀浆。3. 16000 g，4℃ 离心 15 min，弃掉破碎的细胞。4. 检测提取物中的蛋白质浓度。5.
第二法乳及其他乳制品中酸度的测定
13 原理以酚酞为指示液，用0.1000 mol/L氢氧化钠标准溶液滴定100g试样样至终点所消耗的氢氧化钠溶液体 积，经计算确定试样的酸度。14 试剂和材料除非另有规定，本方法所用试剂均为分析纯或以上规格，水为GB/6682规定的三级水。14. 1 中性乙醇—乙醚混合液：取等体积的乙醇、乙醚混合后
茵陈提取物的含量测定
绿原酸照高效液相色谱法（附录 Ⅵ D ）测定。色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈 -0.05% 磷酸溶液（ 10 ∶ 90 ）为流动相；检测波长为 327nm 。理论板数按绿原酸峰计算应不低于 10000 。对照品溶液的制备精密称取绿原酸对照品适量，置棕色量瓶中，加
天麻提取物的含量测定
照高效液相色谱法测定。 色谱条件与系统适应性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇－磷酸盐溶液（0.1mol/L磷酸二氢钾溶液和0.1mol/L磷酸氢二钠溶液等量混合）－水（1.5:3:95.5）为流动相；检测波长为270nm。 理论板数按天麻素峰计算应不低于1500。 对照品溶液的制备
用卤素水分测定仪怎样测定酸奶中全乳固体含量
测定方法 称取充分混匀的样品215 g于铝盘中，用药勺将样品分布均匀，在*测定条件下，按照仪器的测定程序进行测定。 2 结果与讨论 211 *测定条件的选择 牛奶、酸奶中总固体含量即为该样品失去水分后的质量，在实际操作中重要的是加热速率。使用卤素灯加热
β葡萄糖苷酶活性测定方法
β-葡萄糖苷酶的活性测定方法很多，常见反应底物有对硝基苯-β-D-葡萄糖苷(pNPG)、纤维二糖、水杨苷等。由于酶与pNPG作用产生的对硝基苯可用分光光度法在400 nm处测定， 方法简单、反应快速、反应活性大，所以大多数实验采用pNPG作为底物的分光光度法测定酶活性。由于测定葡萄糖含量的方法很多
β葡萄糖苷酶活性测定方法
β-葡萄糖苷酶的活性测定方法很多，常见反应底物有对硝基苯-β-D-葡萄糖苷(pNPG)、纤维二糖、水杨苷等。由于酶与pNPG作用产生的对硝基苯可用分光光度法在400 nm处测定， 方法简单、反应快速、反应活性大，所以大多数实验采用pNPG作为底物的分光光度法测定酶活性。由于测定葡萄糖含量的方法很多，
核提取物的制备实验
实验材料 哺乳动物试剂、试剂盒 PBS低渗缓冲液低盐缓冲液透析缓冲液仪器、耗材 转子离心机电导计透析膜匀浆机离心管实验步骤 1a. 收集转瓶培养的细胞：将浓度为5~10×108细胞/l 的培养液用1 L 的塑料瓶1 850 g 离心20 min，将细胞收入50 ml 锥形离心管中（每管收2~3 L
核提取物的制备实验
实验方法原理 通过向某些蛋白质溶液中加入某些无机盐溶液后，可以降低蛋白质的溶解度，使蛋白质凝聚而从溶液中析出,这种作用叫作盐析，是物理变化，可复原。对于特定的蛋白质，影响蛋白质盐析的主要因素：无机盐的种类、浓度、温度和PH值。
酵母提取物的制备实验
实验方法原理酵母细胞的裂解方法有很多种，包括自溶、压力破碎（如French加压罐）、研磨（玻璃珠振荡）和酶裂解（如Zymolase)等。本方案讨论的振荡玻璃珠研磨，是最简便的方法之一。这对于小体积（如＜1mL的）和数升体积都很有效。经相差显微镜检测，细胞破碎率一般＞95%。实验材料新鲜培养的酵母细胞
酵母提取物的制备实验
实验方法原理 酵母细胞的裂解方法有很多种，包括自溶、压力破碎（如French加压罐）、研磨（玻璃珠振荡）和酶裂解（如Zymolase)等。本方案讨论的振荡玻璃珠研磨，是最简便的方法之一。这对于小体积（如＜1mL的）和数升体积都很有效。经相差显微镜检测，细胞破碎率一般＞95%。实验材料 新鲜培养的酵母