非同位素分析报道基因活性实验——β半乳糖苷酶
实验材料转染的细胞试剂、试剂盒PBSTriton裂解液β-半乳糖苷酶反应缓冲液光发射加速液仪器、耗材细胞刮子绘图仪发光计计数器实验步骤1. 用PBS分别洗涤两次60 mm 培养皿中的转染β-半乳糖苷酶表达质粒的细胞及模拟转染的细胞。 2. 加入250 μl Triton裂解液，用一橡胶细胞刮子将细胞刮下来。将细胞提取物转移至1 个1.5 ml 微量离心管中。在4℃以最大速度离心2 min，将上清转移至一个干净的微量离心管中。 3. 在一只发光计的测试管中加2~20 μl 细胞提取液。再加200 μl β-半乳糖苷酶反应缓冲液，在室温下温育60 min。 4. 将测试管放入发光计中，注人300 μl 光发射加速液。注入后等2~5 s，然后测定5 s。......阅读全文
非同位素分析报道基因活性实验——β半乳糖苷酶
实验材料转染的细胞试剂、试剂盒PBSTriton裂解液β-半乳糖苷酶反应缓冲液光发射加速液仪器、耗材细胞刮子绘图仪发光计计数器实验步骤1. 用PBS分别洗涤两次60 mm 培养皿中的转染β-半乳糖苷酶表达质粒的细胞及模拟转染的细胞。 2. 加入250 μl Triton裂解液，用一橡胶细胞刮子将
非同位素分析报道基因活性实验
萤火虫荧光素酶法 冻融裂解的细胞的荧光素酶分析 β-半乳糖苷酶报道基因的化学发光分析 实验材料 转染细胞
非同位素分析报道基因活性实验
实验材料 转染细胞试剂、试剂盒 PBS荧光素贮液Triton甘氨酰甘氨酸仪器、耗材 橡胶细胞刮子绘图仪比色杯实验步骤 1. 用冰冷的PBS洗涤在3个60 mm 培养皿中的转染了荧光素酶表达质粒的细胞各3次， 毎次用4 ml PBS洗后吸去洗液。 2. 每个培养皿中加入350 μl Trito
报道基因活性的同位素分析实验
实验材料 DNA试剂、试剂盒 PBS乙酸乙酯氯仿甲醇Tris·Cl仪器、耗材 薄层层析缸滤纸离心管离心机实验步骤 1. 100 mm 培养皿中的转染了CAT表达质粒的贴壁细胞，用PBS洗两次，每次5 ml每培养皿加入1 ml TEN溶液。将细胞置于冰浴5 min。 2. 用橡胶细胞刮子将细胞从培
报道基因活性的同位素分析实验
CAT活性的层析分析法 原位裂解细胞的CAT分析法 CAT活性的相-抽提分析法 人生长激素的放射免疫分析法 实验材料
报道基因活性的同位素分析实验——CAT活性的层析分析法
报告基因 是一种编码可被检测的蛋白质或酶的基因，也就是说，是一个其表达产物非常容易被鉴定的基因。把它的编码序列和基因表达调节序列相融合形成嵌合基因，或与其它目的基因相融合，在调控序列控制下进行表达，从而利用它的表达产物来标定目的基因的表达调控，筛选得到转化体。实验材料DNA试剂、试剂盒PBS乙酸乙酯
报道基因活性的同位素分析实验——CAT活性的相抽提分析法
实验材料转染细胞试剂、试剂盒氯霉素Tris·ClTMPD二甲苯仪器、耗材离心机离心管培养箱实验步骤一、来源于哺乳动物细胞1. 按“CAT活性的层析分析法”中的步骤1~5的冻融法，制备哺乳动物细胞提取物。如果用胰蛋白酶消化或制细胞方法来收集细胞，则将原位裂解法的步骤1至4用以下的步骤2至4代替。 2
非同位素分析报道基因活性实验——萤火虫荧光素酶法
报告基因是一种编码可被检测的蛋白质或酶的基因，也就是说，是一个其表达产物非常容易被鉴定的基因。把它的编码序列和基因表达调节序列相融合形成嵌合基因，或与其它目的基因相融合，在调控序列控制下进行表达，从而利用它的表达产物来标定目的基因的表达调控，筛选得到转化体。实验材料转染细胞试剂、试剂盒PBS荧光素贮
哺乳动物原代细胞培养的β半乳糖苷酶（荧光测定）
β半乳糖苷酶：β半乳糖苷酶由大肠杆菌lacZ基因编码，可催化半乳糖苷水解。最大优势是易于用免疫组织化学法观测其原位表达，是最常用的监测转染率的报道基因之一。以邻—硝基苯—β—D—半乳吡喃糖苷(ONPG)为底物可用标准的比色法检测酶活性，其检测动力学范围为6个数量级。氯酚红—β—D—半乳吡喃糖苷(CP
非同位素分析基因活性实验——冻融裂解细胞荧光素酶分析
实验材料哺乳动物细胞试剂、试剂盒PBS仪器、耗材培养皿细胞刮子离心机实验步骤1. 用PBS分别洗3个60 mm 培养皿中的转染了荧光素酶质粒的细胞。 2. 每只培养皿中加1 ml 提取缓冲液，立即用橡胶刮子刮下细抱，移至1.5 ml 微量离心管中。离心15~30 s，弃上清。3. 在细胞沉淀中
基因活性的同位素分析实验——原位裂解细胞的CAT分析法
实验材料转染细胞试剂、试剂盒Triton裂解液仪器、耗材培养皿培养箱实验步骤1. 60 mm 培养皿中转染了CAT表达质粒的细胞，用2 ml PBS洗1次。每培养皿加入2 ml 低渗缓冲液，在室温下温育2~5 min。2. 吸去低渗缓冲液，加入400 μl Triton裂解液。用橡胶刮子将细胞刮
常用报道基因的功能对比
道基因的对比报道基因作用方式优点缺点氯霉素乙酰基转移酶（CAT；细菌）CAT通过使乙酰基与抗生素共价连接的方式来解除氯霉素的毒性，报道基因实验通常检测n-丁酰基的一半从辅助因子n-丁酰辅酶A转移到具有放射活性的氯霉素上，被修饰的氯霉素的迁移率发生改变，并且能够掺入有机溶剂。没有内源活性；可使用自动化
基因活性同位素分析实验——人生长激素的放射免疫分析法
实验材料hGH表达质粒试剂、试剂盒洗涤液亲和素包被珠仪器、耗材试管γ计数仪实验步骤1. 取转染了hGH表达质粒的哺乳动物细胞的培养液100~500 μl。2. 加100 μl 培养液或标准品至12 mm×75 mm 圆底试管中。加入100 μl 125I-标记的抗体溶液，混合。加入1颗亲和素包被
β葡萄糖苷酶活性测定方法
β-葡萄糖苷酶的活性测定方法很多，常见反应底物有对硝基苯-β-D-葡萄糖苷(pNPG)、纤维二糖、水杨苷等。由于酶与pNPG作用产生的对硝基苯可用分光光度法在400 nm处测定， 方法简单、反应快速、反应活性大，所以大多数实验采用pNPG作为底物的分光光度法测定酶活性。由于测定葡萄糖含量的方法很多，
β葡萄糖苷酶活性测定方法
β-葡萄糖苷酶的活性测定方法很多，常见反应底物有对硝基苯-β-D-葡萄糖苷(pNPG)、纤维二糖、水杨苷等。由于酶与pNPG作用产生的对硝基苯可用分光光度法在400 nm处测定， 方法简单、反应快速、反应活性大，所以大多数实验采用pNPG作为底物的分光光度法测定酶活性。由于测定葡萄糖含量的方法很多
NK细胞活性测定：同位素法原理和实验步骤
一、原理 将用同位素3H-TdR标记的靶细胞与淋巴细胞共同培养时，靶细胞可被NK细胞杀伤。同位素便从被杀伤的靶细胞中释放出来，其释放的量与NK细胞活性成正比。通过测定靶细胞3H-TdR的释放率即可反应NK细胞的活性。 二、仪器和材料 液体闪烁仪、多头细胞取集器、二氧化碳培养箱、3H-TdR、RPMI
β半乳糖苷酶活性的整体封片免疫组化检测实验
半乳糖苷酶活性的整体封片染色和免疫组化检测 准备大组织的厚切片进行β-半乳糖苷酶染色 实验方法原理 实验材料
β半乳糖苷酶活性的整体封片免疫组化检测实验
实验方法原理 实验材料 小鼠或鸡的整个胚胎、组织或外植体试剂、试剂盒 磷酸盐缓冲液（PBS)冰冷β-半乳糖苷酶固定剂β-半乳糖苷酶洗涤缓冲液β-半乳糖苷酶染色液仪器、耗材 5 mL或10 mL的聚苯乙烯或聚丙烯帽盖的试管或1.5〜2 mL的离心管转动平台染色用密闭箱附有盖玻片的下陷载玻片或箱式载玻片
半乳凝素的基本信息
Gal-1是一个对富含多N乙酰基乳糖糖复合物有明显亲和力的动物外源凝集素家族的一个成员。最近的发现Gal-1有调节免疫反应、血管新生和肿瘤进展的作用。
什么是报道基因？
报道基因（reporter gene）是一种编码可被检测的蛋白质或酶的基因，从而在其表达后，使细胞表现出特定的可检测性状。
半乳糖苷酶活性的整体封片染色和免疫组化检测
实验材料小鼠或鸡的整个胚胎、组织或外植体试剂、试剂盒磷酸盐缓冲液（PBS)冰冷β-半乳糖苷酶固定剂β-半乳糖苷酶洗涤缓冲液β-半乳糖苷酶染色液仪器、耗材5 mL或10 mL的聚苯乙烯或聚丙烯帽盖的试管或1.5〜2 mL的离心管转动平台染色用密闭箱附有盖玻片的下陷载玻片或箱式载玻片纤光照明的解剖显微镜
酿酒酵母培养基制备实验—检测酵母中β半乳糖苷酶活性
试剂、试剂盒酵母氮碱基葡萄糖SC-Ura 或 SC-Trp 或 SC-Len 或 SC-His 的混合物蒸馏水琼脂仪器、耗材磁力搅拌器锥形瓶实验步骤1. 在 1 L 的螺旋盖瓶或锥形瓶中将下面的成分溶于水中，置于搅拌器上混匀。酵母氮碱基 4.0 g，葡萄糖 12.0 g，SC-Ura 或 SC-Tr
酵母载体与表达产物的检测实验_β半乳糠苷酶检测
实验材料酵母试剂、试剂盒YPDSDS磷酸钾Na2CO3OPNG仪器、耗材水浴锅培养箱分光光度计漩涡混合器离心机实验步骤1. 按每一个单酵母菌落接种YPD（或适当）的培养基，挑2~3个含lacZ融合蛋白表达质粒的酵母菌于30℃培养过夜，如果融合蛋白在一个质粒上，那么就在选择该质粒的培养基中培养。 2
半乳葡萄甘露聚糖的基本信息
中文名称半乳葡萄甘露聚糖英文名称galactoglucomannan定 义半纤维素的组成之一，尤其在裸子植物细胞壁中，该聚糖占12%～15%。主链由葡萄糖和甘露糖以β-1,4键连接而成，半乳糖则以α-1,6键连到主链的任一种糖上。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），糖类（二级学科）
β葡萄糖苷酶的活性中心结构
有研究表明，β-葡萄糖苷酶中起催化作用的残基是两个谷氨酸残基。采用定点突变的方法证明，靠近N-端的谷氨酸是酸碱基团，另外一个是亲核基团。
实验室分析方法同位素质谱法
质谱技术成为分析科学的重要组成部分是从同位素的发现开始的，并伴随同位素分析、研究和应用而发展。英国著名物理学家汤姆逊在1913年用简陋的抛物线装置发现惰性气体氖的两个稳定性同位素，标志着质谱技术的开始，而汤姆逊的抛物线装置被后人公认为是现代质谱仪的雏形。 汤姆逊的学生和助手阿斯顿（Aston），不但
荔枝果肉多糖乳酸菌发酵转化规律研究获进展
广东省农业科学院蚕业与农产品加工研究所功能食品创新团队在国家自然科学基金重点项目、广东省重点领域研究发展项目等的资助下，在乳酸菌发酵促进荔枝果肉多糖可溶化转化规律及机制研究方面取得新进展。近日，相关成果以封面论文的形式发表于《农业与食品化学杂志》（Journal of Agricultural
发现植物乳杆菌比短乳杆菌有更高的抗菌活性
发酵蔬菜蕴含丰富的乳酸菌资源。陕西省微生物研究所薛文娇课题组从16份自然发酵蔬菜样品中分离得到74株产酸、杆状革兰氏阳性菌，其中26株在低pH和高胆盐条件下表现出较高的存活率。他们经对其进行16S rRNA测序和系统发育树分析表明，15株为植物乳杆菌，9株为短乳杆菌，其余2株为绿色魏斯氏菌；又通
发现植物乳杆菌比短乳杆菌有更高的抗菌活性
原文地址：http://news.sciencenet.cn/htmlnews/2022/3/474898.shtm发酵蔬菜蕴含丰富的乳酸菌资源。陕西省微生物研究所薛文娇课题组从16份自然发酵蔬菜样品中分离得到74株产酸、杆状革兰氏阳性菌，其中26株在低pH和高胆盐条件下表现出较高的存活率。他们经对
相互作用蛋白鉴定实验
鉴定诱饵蛋白（半乳糖苷酶） 鉴定诱饵蛋白（LacZ 的活性分析） 相互作用蛋白捕获 实验方法原理 捕捉相互作用蛋白的第一步是构建能够表达