高质量DNA的纯化实验
应用经过修改的 Miller 等（1988) 的盐沉淀方法纯化 DNA，不使用酚和氯仿，比较温和，有效防止了长的染色体 DNA 的断裂。在第 9 章中讲述了另一种 DNA 纯化的方法。这种方法可以沉淀细胞核，已被成功地用于对血液样品、培养的细胞和乳腺瘤组织DNA 的纯化。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。实验材料乳腺瘤组织试剂、试剂盒EDTA异丙醇裂解缓冲液细胞核裂解缓冲液Triton 裂解缓冲液仪器、耗材水浴锅破璃棒实验步骤一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂EDTA，100 mmol/L异丙醇裂解缓冲液10 mmol/LTris-HCl1mmol/LEDTA150 mmol/LNaCl0.5%SDS,pH10.5NaCl，0.15mol/L 和 6mol/L细胞核裂解缓冲液75 mmol/LNaCl24 mmol/LEDTA,pH8.0蛋白酶 K 或者链霉蛋白酶，20 mg/ml。SDS,200 g/......阅读全文
质粒DNA的提取与纯化
一、实验目的与原理质粒多为一些双链、环状的DNA分子，是独立于细菌染色体之外进行复制和遗传的辅助性遗传单位。质粒是进行分子生物学实验操作，进行遗传工程改良物种等工作时最主要的DNA载体。提取质粒的基本步骤分为三步：①细菌的培养和质粒的扩增，②细菌菌体的裂解，③质粒DNA的纯化。本实验采取的菌体裂解方
质粒DNA的制备和纯化
实验概要质粒（plasmid）是一种染色体外的稳定遗传因子，大小从1~200kb不等，为双链、闭环的DNA分子，并以超螺旋状态存在于宿主细胞中。质粒主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中，它具有自主复制和转录能力，能在子代细胞中保持恒定的拷贝数，并表达所携带的遗传信息。质粒在细胞内的复制一般有两种类型：
DNA小片段的纯化回收
DNA 电泳小于100bp的片断通常在电泳时就比较难观察分辨，需要用分辨率很高的琼脂糖或者丙烯酰胺凝胶。比如Cambrex的NuSieve 3:1或者GTG，或者是大名鼎鼎的MetaPhor琼脂糖。所以实际上对于小片断，可以分为两种情况：一个是真的要回收电泳中特别小的片断，这种情况我们前面有提到，比
如何对提取的DNA纯化
质粒DNA的提取、纯化和电泳检测摘要本实验通过碱变性法提取E.coli DH5α(pUC19)的质粒DNA,并且通过一系列的分离纯化技术将其质粒DNA与染色体DNA、RNA、蛋白质等杂质分开从而得到纯化的质粒DNA分子。通过琼脂糖凝胶电泳可以通过DNA条带的位置来大致判断其分子大小,也可以将实际电泳
质粒DNA的提取与纯化
一、实验目的与原理 质粒多为一些双链、环状的DNA分子，是独立于细菌染色体之外进行复制和遗传的辅助性遗传单位。质粒是进行分子生物学实验操作，进行遗传工程改良物种等工作时最主要的DNA载体。 提取质粒的基本步骤分为三步： ①细菌的培养和质粒的扩增 ②细菌菌体的裂解 ③质粒DNA的纯化 本实验采取的菌体
纯化dna的方法有哪些
纯化DNA的常用方法是用酚抽提-乙醇沉淀法，适用于普通实验室操作。它通过交替使用苯酚、氯仿两种不同的蛋白质变性剂，可以增加去除蛋白质杂质的效果；氯仿可以去除核酸溶液中的微量酚，还可以加快有机相与液相混合，去除色素和蔗糖；在氯仿中加入少量的异戊醇可以减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡。【实验材料】待纯
用原子力显微镜表征DNA纯化效果的实验
实验概要运用原子力显微镜(AFM)表征3种DNA纯化试剂盒对DNA的纯化效果。方法：PCR扩增K562/A02细胞mdr1基因DNA，分别以3种不同的DNA纯化试剂盒对PCR产物进行纯化后，按终浓度为10 ng・μl-1固定在用1 ng・μl-1 L型多聚赖氨酸预先处理过的新剥离的云母片上，用AFM
聚乙二醇沉淀法纯化质粒DNA实验
这种方法最早由 Richaed Treisman ( 英国，伦敦，ICRF) 参照 Lis 的工作而设计。Lis 是最早用聚乙二醇（PEG ) 分离不同大小 DNA 的人。Treisman 法被广泛用于碱裂解法制备的质粒 DNA 的纯化。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理这
从全血中纯化基因组－DNA－实验方法
试剂、试剂盒 乙醇 异丙醇 RNA 酶 A 全血 仪器、耗材 琼脂糖凝胶电泳
从全血中纯化基因组－DNA－实验方法
试剂、试剂盒 乙醇异丙醇RNA 酶 A全血仪器、耗材 琼脂糖凝胶电泳离心管Wizard 基因组 DNA 纯化试剂盒实验步骤 一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂乙醇，70%，室温异丙醇, 室温RNA 酶 A将 RNA 酶 A 溶解于 DNA 再水合液中至终浓度为 4 mg/ml, 煮沸 10min 以去
聚乙二醇沉淀法纯化质粒DNA实验
实验方法原理 这种方法最早由 Richaed Treisman ( 英国，伦敦，ICRF) 参照 Lis 的工作而设计。Lis 是最早用聚乙二醇（PEG ) 分离不同大小 DNA 的人。Treisman 法被广泛用于碱裂解法制备的质粒 DNA 的纯化。实验材料 粗制质粒试剂、试剂盒 氯仿乙醇异丙醇L
从全血中纯化基因组－DNA－实验方法
用于从全血（10 ml) 中分离基因组 DNA 的 Wizard 基因组 DNA 纯化试剂盒建立在一个四步程序基础上的。纯化程序的第一步包括血红细胞的裂解、可溶部分的弃除，随后是白细胞及其细胞核的裂解。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。试剂、试剂盒乙醇异丙醇RNA 酶 A
聚乙二醇沉淀法纯化质粒DNA实验
实验方法原理 这种方法最早由 Richaed Treisman ( 英国，伦敦，ICRF) 参照 Lis 的工作而设计。Lis 是最早用聚乙二醇（PEG ) 分离不同大小 DNA 的人。Treisman 法被广泛用于碱裂解法制备的质粒 DNA
如何进行DNA纯化
检测：用足迹法，又称为足印法（footprinting）是一种用来测定DNA-蛋白质专一性结合的方法。用于检测与特定蛋白质结合 的DNA序列的部位,可展示蛋白质因子同特定DNA片段之间的结合区域。其原理为：DNA和蛋白质结合以后便不会被DNAase分解，在测序时便出现空白区(即蛋白质结合区)，从而了
DNA提取纯化技术概述
质粒DNA的提取与纯化质粒是一类双链、闭环的DNA，大小范围从1 kb至200 kb以上不等。通常情况下，质粒可持续稳定地处于染色体外的游离状态，具有自主复制功能；但在一定条件下也会可逆地整合到宿主染色体上，随着染色体的复制而复制，并通过细胞分裂传递到后代。 质粒已成为核酸克隆和测序最常用的载体。质
DNA片段回收与纯化
质粒、噬菌体等经酶切，电泳；PCR产物经电泳后，常常需要对一些DNA电泳片段进行回收和纯化，用于亚克隆、探针标记等。DNA回收和纯化常用方法有压碎法、低融点琼脂糖法、冻融法等，也有现成的试剂盒供应。一、冻融法1. 紫外灯下仔细切下含待回收DNA的胶条，将切下的胶条（小于0.6g）捣碎，置于
编码DNA结合蛋白的cDNA克隆的检测、纯化和鉴定实验
用盐酸胍进行干燥膜的变性/复性循环试剂、试剂盒HEPES结合缓冲液实验步骤1) 按基本方案步骤1〜15进行。2) 将平皿在4℃冷却10 min。用针扎孔标记各膜的位置。小心地揭起膜，室温下在空气中瞭干15 min。3) 将膜浸于HEPES结合缓冲液/6 mol/L盐酸狐中，4℃轻轻摇动温育10 mi
编码DNA结合蛋白的cDNA克隆的检测、纯化和鉴定实验
用位点识别DNA筛选λgtll表达文库 用盐酸胍进行干燥膜的变性/复性循环 从重组溶源菌中制备粗提物鉴定DNA结合蛋白的活性 实验方法原理
编码DNA结合蛋白的cDNA克隆的检测、纯化和鉴定实验
从重组溶源菌中制备粗提物鉴定DNA结合蛋白的活性实验材料大肠杆菌 Y1089试剂、试剂盒含有或不含10 mmol L MgCl2的LB培养液1010pfu mLλgtU重组噬菌体液1 mol L IPTG抽提缓冲液5 mg mL溶于抽提缓冲液中的溶菌酶（保存于-20℃)仪器、耗材4 mol L Na
编码DNA结合蛋白的cDNA克隆的检测、纯化和鉴定实验
实验方法原理 实验材料 含有多个串联拷贝识别位点的、缺乏识别位点的（或含识别位点突变的）pUC重组质粒DNA试剂、试剂盒 限制性内切核酸酶EcoRI及HhdIII1 mol L Tris • Cl pH 7. 55 mmol L dCTPdGTPdTTPdATP5000 Ci mmol [α32P]
序列特异性DNA结合蛋白的亲和层析纯化实验
DNA亲和介质的制备 DNA偶联于溴化氰活化的琼脂糖上 用制备性凝胶电泳纯化寡核苷酸 DNA亲和层析法 实验方法原理
序列特异性DNA结合蛋白的亲和层析纯化实验
实验方法原理 实验材料 两种带有结合位点的合成寡核苷酸各440μg试剂、试剂盒 TE缓冲液 pH 7.810×T4噬菌体多核苷酸激酶缓冲液20 mmol L ATP (钠盐） pH 7.0150 m Ci mL [γ-32P] ATP (6000 Ci mmol)10 U μL T4噬菌体多
序列特异性DNA结合蛋白亲和层析纯化实验DNA亲和介质制备
实验材料两种带有结合位点的合成寡核苷酸各440μg试剂、试剂盒TE缓冲液 pH 7.810×T4噬菌体多核苷酸激酶缓冲液20 mmol L ATP (钠盐） pH 7.0150 m Ci mL [γ-32P] ATP (6000 Ci mmol)10 U μL T4噬菌体多核苷酸激酶（New Eng
基因组DNA的快速纯化
第 1 天1. 大约 1.5 cm 长的尾部活检样品放在一个 1.5 ml 盛有 0.7 ml 尾部缓冲液的小离心管中，加 35 μl 10 mg/ml蛋白酶 K，在 55℃ 振摇温育过夜。尾部缓冲液（配 25 ml）50 mmol/L Tris，pH 8
质粒DNA的抽提与纯化
目的 ： 采用碱变性法，学习小规模制备质粒DNA的技术原理 ： 碱变性抽提质粒DNA是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在pH值高达12.6的碱性条件下，染色体DNA的氢键断裂，双螺旋结构解开而变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂，但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会完
质粒DNA的分离、纯化和鉴定
材料、设备及试剂 一、材料 含质粒的E. coli DH5α或JM系列菌株，1.5ml塑料离心管(又称eppendorf管),离心管架。 二、设备 微量取液器(20μl,200μl,1000μl)， 台式高速离心机，恒温振荡摇床， 高压蒸汽消毒器(灭菌锅)， 涡旋振荡器， 电泳仪，琼脂糖平板
植物细胞叶绿体DNA的分离纯化
实验方法原理本实验首先是制备植物新鲜组织匀浆、过滤,分离出完整的叶绿体,然后通过蔗糖密度梯度离心,把叶绿体与其他亚细胞结构分离开来。完整叶绿体经蛋白酶K酶解后,再通过酚-氯仿抽提获得高纯度的叶绿体DNA。实验材料植物新鲜幼嫩叶片试剂、试剂盒缓冲液A(提取缓冲液)缓冲液B(裂解缓冲液)TE缓冲液蔗糖溶
植物细胞叶绿体DNA的分离纯化
实验方法原理 本实验首先是制备植物新鲜组织匀浆、过滤,分离出完整的叶绿体,然后通过蔗糖密度梯度离心,把叶绿体与其他亚细胞结构分离开来。完整叶绿体经蛋白酶K酶解后,再通过酚-氯仿抽提获得高纯度的叶绿体DNA。实验材料 植物新鲜幼嫩叶片试剂、试剂盒 缓冲液A(提取缓冲液)缓冲液B(裂解缓冲液)TE缓冲液
DNA提取纯化新技术浅谈——核酸电泳纯化技术
核酸的提取和纯化是法医DNA物证检验的关键技术之一，目前实验室最常用的方法包括核酸纯化柱（Spin column）磁珠法和clean-up系统，磁珠法由于操作简便、快速，能够提取到高纯度的核酸DNA,并且可以自动化，因此成为目前法医DNA实验室核酸提取纯化的主要手段。但磁珠法由于磁珠吸附DN
氯化铯溴化乙锭梯度平衡离心法纯化闭环DNA实验
实验方法原理 用含氯化铯和溴化乙锭的悬浮密度梯度离心法分离质粒和染色体 DNA 的方法，取决于与线状 DNA 和闭环 DNA 结合的溴化乙锭的量的差异。实验材料 粗制质粒试剂、试剂盒 CsCl CsCl 再分带溶液乙醇溴化乙锭 石蜡油仪器、耗材 皮下注射针头折光仪一次性注射器实验步骤 一、材料1.