序列特异性DNA结合蛋白的亲和层析纯化实验
实验方法原理 实验材料 两种带有结合位点的合成寡核苷酸各440μg试剂、试剂盒 TE缓冲液 pH 7.810×T4噬菌体多核苷酸激酶缓冲液20 mmol L ATP (钠盐） pH 7.0150 m Ci mL [γ-32P] ATP (6000 Ci mmol)10 U μL T4噬菌体多核苷酸激酶（New England Biolabs)仪器、耗材 15 mL螺口盖聚丙稀试管15℃37℃65℃及88℃加热器或水浴 60 mL粗烧结玻璃漏斗旋转轮实验步骤 1) 在1个1.5 mL的微量离心管中准备下面物质的混合物：含有每种寡核苷酸440μg的TE缓冲液，总体积为130μL。再加入20μL 10×T4噬菌体多核苷酸激酶缓冲液。88℃温育2 min, 65℃10 min, 37℃10 min,室温 5 min。2) 将上述混合物平均分入2个微量离心管中。每管（75μL)加15μL 20 mmol/L ATP (pH 7.0......阅读全文
序列特异性DNA结合蛋白的亲和层析纯化实验
DNA亲和介质的制备 DNA偶联于溴化氰活化的琼脂糖上 用制备性凝胶电泳纯化寡核苷酸 DNA亲和层析法 实验方法原理
序列特异性DNA结合蛋白的亲和层析纯化实验
实验方法原理 实验材料 两种带有结合位点的合成寡核苷酸各440μg试剂、试剂盒 TE缓冲液 pH 7.810×T4噬菌体多核苷酸激酶缓冲液20 mmol L ATP (钠盐） pH 7.0150 m Ci mL [γ-32P] ATP (6000 Ci mmol)10 U μL T4噬菌体多
序列特异性DNA结合蛋白亲和层析纯化实验_DNA亲和层析法
实验材料制备性的DNA亲和层析树脂试剂、试剂盒缓冲液Z或其他柱缓冲液（如缓冲液Ze或TM)配制时含不同的KCl浓度（从缓冲液 Z 0.1 mol L KCl 至缓冲液 Z 1 mol L KCl对缓冲液Z 0. 1 mol L KCl透析的部分纯化的蛋白质组分非特异性的竞争DNA柱再生缓冲液柱储存缓
序列特异性DNA结合蛋白亲和层析纯化实验DNA亲和介质制备
实验材料两种带有结合位点的合成寡核苷酸各440μg试剂、试剂盒TE缓冲液 pH 7.810×T4噬菌体多核苷酸激酶缓冲液20 mmol L ATP (钠盐） pH 7.0150 m Ci mL [γ-32P] ATP (6000 Ci mmol)10 U μL T4噬菌体多核苷酸激酶（New Eng
天然RNA文库筛选与蛋白特异性结合的RNA序列实验
实验方法原理 细胞中，蛋白质与 RNA 结合参与多种生理调控和发育过程。在 mRNA 的加帽，多聚腺苷酸化，剪切，核外运，翻译起始及降解等过程中都存在着蛋白质与 RNA 的直接相互作用。在发育的各个阶段，RNA 结合蛋白可以通过与 mRNA 的相互作用调控基因的表达。实验材料 mRNA寡核苷酸试剂、
天然RNA文库筛选与蛋白特异性结合的RNA序列实验
细胞中，蛋白质与 RNA 结合参与多种生理调控和发育过程。在 mRNA 的加帽，多聚腺苷酸化，剪切，核外运，翻译起始及降解等过程中都存在着蛋白质与 RNA 的直接相互作用。在发育的各个阶段，RNA 结合蛋白可以通过与 mRNA 的相互作用调控基因的表达。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编：郑晓飞
天然RNA文库筛选与蛋白特异性结合的RNA序列实验
实验方法原理 细胞中，蛋白质与 RNA 结合参与多种生理调控和发育过程。在 mRNA 的加帽，多聚腺苷酸化，剪切，核外运，翻译起始及降解等过程中都存在着蛋白质与 RNA 的直接相互作用。在发育的各个阶段，RNA 结合蛋白可以通过与 m
直链淀粉树脂亲和层析纯化麦芽糖结合融合蛋白实验
实验材料 表达 BMP 融合蛋白的大肠杆菌细胞试剂、试剂盒 细胞裂解缓冲液细胞洗涤缓冲液柱洗脱缓冲液柱洗涤缓冲液MgCl2PMSFSDS 凝胶加样缓冲液Tris-ClDNase溶菌酶RNase凝血酶、肠激酶或 Xa 因子溶液SDS-聚丙烯酰胺凝胶仪器、耗材 Beckman Ti60 转头或相当的转头
直链淀粉树脂亲和层析纯化麦芽糖结合融合蛋白实验
亲和层析方法几乎可以将麦芽糖结合融合蛋白纯化成单组分。麦芽糖结合蛋自（MBP) 是一个由大肠杆菌 malE 基因编码的周质蛋白，是细菌麦芽糖转运系统的成员之一。MBP 能结合微摩尔水平的麦芽糖和麦芽糊精，因此可用交联了麦芽糖的琼脂糖进行纯化。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J
用原位筛选法分离编码序列特异性DNA结合蛋白的cDNA
放射性标记DNA探针的制备l 聚丙烯酰胺凝胶的制备1．按照（三）中操作流程灌制非变性聚丙烯酰胺凝胶。将10×TBE稀释成0.5×的工作浓度。聚丙烯酰胺的工作浓度取决于待测DNA片段的大小，200bp左右的片段需要4～5％的凝胶，小于100bp的片段应灌制6～8％的凝胶。 l DN
编码DNA结合蛋白的cDNA克隆的检测、纯化和鉴定实验
从重组溶源菌中制备粗提物鉴定DNA结合蛋白的活性实验材料大肠杆菌 Y1089试剂、试剂盒含有或不含10 mmol L MgCl2的LB培养液1010pfu mLλgtU重组噬菌体液1 mol L IPTG抽提缓冲液5 mg mL溶于抽提缓冲液中的溶菌酶（保存于-20℃)仪器、耗材4 mol L Na
编码DNA结合蛋白的cDNA克隆的检测、纯化和鉴定实验
用盐酸胍进行干燥膜的变性/复性循环试剂、试剂盒HEPES结合缓冲液实验步骤1) 按基本方案步骤1〜15进行。2) 将平皿在4℃冷却10 min。用针扎孔标记各膜的位置。小心地揭起膜，室温下在空气中瞭干15 min。3) 将膜浸于HEPES结合缓冲液/6 mol/L盐酸狐中，4℃轻轻摇动温育10 mi
编码DNA结合蛋白的cDNA克隆的检测、纯化和鉴定实验
实验方法原理 实验材料 含有多个串联拷贝识别位点的、缺乏识别位点的（或含识别位点突变的）pUC重组质粒DNA试剂、试剂盒 限制性内切核酸酶EcoRI及HhdIII1 mol L Tris • Cl pH 7. 55 mmol L dCTPdGTPdTTPdATP5000 Ci mmol [α32P]
编码DNA结合蛋白的cDNA克隆的检测、纯化和鉴定实验
用位点识别DNA筛选λgtll表达文库 用盐酸胍进行干燥膜的变性/复性循环 从重组溶源菌中制备粗提物鉴定DNA结合蛋白的活性 实验方法原理
DNA结合蛋白测定实验
本实验主要用于检测粗制提取物中序列特异性的DNA结合蛋白。实验方法原理本分析方法是一种简单、快速和极为灵敏的用于检测粗制提取物中序列特异性的DNA结合蛋白的方法。在电泳时，与末端标记的DNA片段特异结合的蛋白质阻滞了片段的迁移，因而产生对应于蛋白-DNA复合物的清晰电泳条带。实验材料质粒DNA试剂、
DNA结合蛋白测定实验
实验方法原理 本分析方法是一种简单、快速和极为灵敏的用于检测粗制提取物中序列特异性的DNA结合蛋白的方法。在电泳时，与末端标记的DNA片段特异结合的蛋白质阻滞了片段的迁移，因而产生对应于蛋白-DNA复合物的清晰电泳条带。
DNA结合蛋白测定实验
实验材料 质粒DNA试剂、试剂盒 dNTPDNA聚合酶Klenow酶TETAE溴化乙锭TEMED过硫酸铵BSA仪器、耗材 培养箱离心管实验步骤 1. 用一种或多种限制性内切酶在100 μl 体积中消化10 μg 质粒人，产生25~100 bp 的含有结合位点的DNA片段，并至少有一端是5’突出的
编码DNA结合蛋白的cDNA克隆的检测、纯化和鉴定实验1
一个DNA位点识别探针被用来从表达文库中检测合适的重组克隆，并对 之进行纯化，证明其中编码了具有一定序列特异性的DNA结合域。这种策略排除了为 分离其基因而对序列特异性DNA结合蛋白进行纯化的过程；只需要一个合适的构建于 λgtll载体中的cDNA文库和一个DNA识别位点的探针。用位点识别DNA筛选
直链淀粉树脂亲和层析纯化麦芽糖结合融合蛋白
实验材料 表达 BMP 融合蛋白的大肠杆菌细胞 试剂、试剂盒 细胞裂解缓冲液 细胞洗涤缓冲液 柱洗
什么是非特异性的DNA结合蛋白
为DNA蛋白质之一种，是与单链DNA有强的亲和性，与DNA复制、遗传的重组等DNA代谢有关的蛋白质。也称螺旋不稳定蛋白质（helix destabili－zing protein），又称解DNA旋卷蛋白质（DNAuntwisting protein）。此蛋白质与单链DNA协同（cooperative
核酸亲和层析法纯化蛋白质实验
实验方法原理 DNA 偶联至溴化氰活化的 Sepharcse 4B 是通过它们本身的碱基实现的。从理论上讲，该方法也许干扰最佳结合序列的接近路径，但是这样一个简单的方法一直被广泛地成功应用。偶联效率的定量检测可经 A260 值测定评估，或者更精确地从偶联介质上水解核酸和进行磷酸盐测定。实
核酸亲和层析法纯化蛋白质实验
步骤一 偶联寡核苷酸到溴化氰活化的 Sepharose 4B 步骤二 核酸亲和层析 实验方法原理 DNA 偶联至溴化氰活化的 Sepharcse 4
谷胱甘肽琼脂糖亲和层析纯化融合蛋白实验
实验材料 表达 GST 融合蛋白的大肠杆菌细胞试剂、试剂盒 二硫苏糖醇谷胱甘肽洗脱缓冲液磷酸缓冲钠盐溶液TritonX-100DNase溶菌酶RNase凝血酶、肠激酶或 Xa 因子溶液SDS-聚丙烯酰胺凝胶仪器、耗材 SorvallSS-34 转头或相当的转头谷胱甘肽-琼脂糖树脂皮下注射针头实验步骤
核酸亲和层析法纯化蛋白质实验1
核酸亲和柱的应用极大地促进了核酸结合调节蛋白特性的研究，这些蛋白质涉及基因表达、染色体修复和复制、基因重组等的调控。核酸结合蛋白可以结合单链 DNA、双链 DNA 或 RNA。DNA 结合蛋白结合 DNA 可以是序列特异的，也可以是非特异的。此外，含有特异寡核苷酸的亲和树脂能用于某些酶的分离，这些酶
核酸亲和层析法纯化蛋白质实验2
核酸亲和层析实验材料样品蛋白质试剂、试剂盒平衡缓冲液（Tris-HClKClEDTA）非特异 DNA实验步骤在上样品液到核酸亲和柱之前，建议首先采用其他的纯化方法，如硫酸铵沉淀、离子交换或凝胶过滤层析等富集目的蛋白。这样可以除去绝大多数的污染物，并减少非特异结合。亲和层析柱一般来讲是短而粗的，例如长
谷胱甘肽琼脂糖亲和层析纯化融合蛋白实验
pGEX 载体表达的外源蛋白与谷胱甘肽 S 转移酶融合，因此可以通过谷胱甘肽-琼脂糖亲和层析进行纯化。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。实验材料表达 GST 融合蛋白的大肠杆菌细胞试剂、试剂盒二硫苏糖醇谷胱甘肽洗脱缓冲液磷酸缓冲钠盐溶液Tri
谷胱甘肽琼脂糖亲和层析纯化融合蛋白实验
实验材料 表达 GST 融合蛋白的大肠杆菌细胞 试剂、试剂盒 二硫苏糖醇 谷胱甘肽洗脱缓冲液 磷酸
与DNA结合蛋白相作用的启动子序列的鉴定
番茄子叶细胞核的分离提取为例子进行实验步骤2～7须在4℃下使用高压灭菌过的设备进行。1．将番茄种子种在灭菌的水饱和滤纸上，置于小盆内，用薄膜封口后，培养7天。用刀片切下番茄子叶后收集备用。2．将40～50g新鲜组织放入300ml匀浆缓冲液，用韦林氏搅切器先1×4秒而后6×1秒。3．过滤匀浆混合液，使
DNA－结合蛋白的凝胶阻滞分析实验
实验材料 作为对照的核提取物或蛋白组分 核提取物或蛋白组分 试剂、试剂盒 Ficoll 400 聚
DNA－结合蛋白的凝胶阻滞分析实验
实验材料 作为对照的核提取物或蛋白组分核提取物或蛋白组分试剂、试剂盒 Ficoll 400聚乙烯醇蔗糖染色液10X Tris-氨基乙酸或Tris-硼酸-EDTA(TBE)缓冲液4%~7% 中性聚丙烯酰胺凝胶poly(dI-dC)32P标记的对照DNA32P标记的靶DNA仪器、耗材 杂交膜实验步骤 材