渗透细胞蛋白磷酸化实验——制备用于SDSPAGE的天然细胞
实验材料待标记的培养细胞预热研究用细胞（传代细胞或被分离的原代细胞）试剂、试剂盒2 × SDS-PAGE 样品缓冲液细胞培养液细胞外缓冲液有渗透性的37℃缓冲液链球菌溶血素 O 工作溶液ATP 储存溶液[γ-32P] ATP研究用药理试剂受体激动剂2 × 冰裂解缓冲液蛋白抑制剂储存溶液仪器、耗材4℃ 浴式超声仪沸水浴干冰 乙醇浴多细胞皿架 37℃ 无循环水浴箱50 ml 离心管台式离心机细胞刮片带螺旋盖的微量离心管实验步骤实验材料、试剂、仪器参见基本方案。1. 制备细胞并进行渗透性处理和标记（见基本方案步骤 1~8）。2.1 贴壁细胞培养。快速吸尽有渗透性的缓冲液，在每板中加入 100~250 ℃ 预冷的 2 × SDS-PAGE 样品缓冲液，停止反应。每板使用不同的细胞刮片迅速刮离细胞于缓冲液中，转移细胞样品至新的旋盖离心管中。2.2 悬浮细胞培养。在微量离心反应管中以最大速度离心 1 min, 室温。迅速吸尽上清，小心操作，......阅读全文
渗透细胞蛋白磷酸化实验——－制备用于SDSPAGE的天然细胞
实验材料待标记的培养细胞预热研究用细胞（传代细胞或被分离的原代细胞）试剂、试剂盒2 × SDS-PAGE 样品缓冲液细胞培养液细胞外缓冲液有渗透性的37℃缓冲液链球菌溶血素 O 工作溶液ATP 储存溶液[γ-32P] ATP研究用药理试剂受体激动剂2 × 冰裂解缓冲液蛋白抑制剂储存溶液仪器、耗材4℃
渗透细胞蛋白磷酸化实验——－制备用于等电聚焦的天然细胞
实验材料待标记的培养细胞预热研究用细胞（传代细胞或被分离的原代细胞）试剂、试剂盒4℃ 双向-PAGE裂解缓冲液双向-PAGE样品缓冲液细胞培养液细胞外缓冲液有渗透性的37℃缓冲液链球菌溶血素 O 工作溶液ATP 储存溶液[γ-32P] ATP研究用药理试剂受体激动剂仪器、耗材浴式超声仪干冰 乙醇浴冻
渗透细胞蛋白磷酸化实验
实验方法原理 检测出目标蛋白是磷蛋白后，可将这个蛋白质的磷酸化过程在无细胞系统或天然细胞系统中进行研究。大多数蛋白激酶除了在细胞内还可在胞外进行许多底物的磷酸化。天然细胞的渗透化处理为得到满意结果提供了一个有效的实验方法，通过使用一些不同的试剂可以使细胞处于短暂的渗透状态。这个过程使反应发生在细胞内
渗透细胞蛋白磷酸化实验
基本方案 带分析 备择方案1 制备用于SDS-PAGE的天然细胞样品 备择方案2 制备用于等电聚焦的天然细胞样品 实验方法原理 检测出目标
渗透细胞蛋白磷酸化实验——带分析
本实验讨论用三磷酸核苷在可渗透细胞和分离的细胞组分体外标记蛋白的策略。这类实验在大多数情况下还是以 [γ-32P] ATP 作为外源性磷酸供体。尽管在特殊情况下[γ-32P] GTP 也能被用于蛋白质标记。实验方法原理检测出目标蛋白是磷蛋白后，可将这个蛋白质的磷酸化过程在无细胞系统或天然细胞系统中进
透化细胞和退化细胞器中蛋白质的磷酸化实验—试剂制备
试剂、试剂盒胞外缓冲液胞内缓冲液透化缓冲液标准裂解缓冲液裂解缓冲液SDS-PAGE 加样缓冲液双向-PAGE 裂解緩冲液实验步骤这些试剂在后面许多地方要用到，应在进行下述实验前配好。1. 胞外缓冲液（pH 7.2，37℃）110 mmol/L NaCl10 mmol/L KCI1 mmol/L Mg
渗透溶胀法制备细胞核实验
实验材料 HeLa 细胞 试剂、试剂盒 Earle’s 平衡盐溶液 RSB
渗透溶胀法制备细胞核实验
用渗透溶胀法从HeLa细胞悬浮培养物中制备细胞核实验材料HeLa 细胞 试剂、试剂盒Earle’s 平衡盐溶液
渗透溶胀法制备细胞核实验
实验材料HeLa 细胞试剂、试剂盒Earle’s 平衡盐溶液RSB仪器、耗材玻璃盖玻片实验步骤1. 悬浮培养出 HeLa 细胞，600 g 离心 5 分钟收集细胞。2. 沉淀细胞用 5 倍体积 4℃ 预冷的 Earle’s 平衡盐溶液重新悬浮。3. 重悬浮的细胞在 4℃，600 g 离心 5 分钟，
渗透溶胀法制备细胞核实验
实验材料 HeLa 细胞试剂、试剂盒 Earle’s 平衡盐溶液RSB仪器、耗材 玻璃盖玻片实验步骤 1. 悬浮培养出 HeLa 细胞，600 g 离心 5 分钟收集细胞。2. 沉淀细胞用 5 倍体积 4℃ 预冷的 Earle’s 平衡盐溶液重新悬浮。3. 重悬浮的细胞在 4℃，600 g 离心 5
透化细胞和退化细胞器中蛋白质的磷酸化实验
试剂的制备单层培养细胞的透化悬浮培养细胞的透化用分离的亚细胞组分分析蛋白质的磷酸化用分离的亚细胞组分进行激酶分析试剂、试剂盒胞外缓冲液 胞内缓冲液
透化细胞和退化细胞器中蛋白质的磷酸化实验
试剂的制备 单层培养细胞的透化 悬浮培养细胞的透化 用分离的亚细胞组分分析蛋白质的磷酸化 用分离的亚细胞组分进行激酶分析
细菌细胞的制备实验实验——细胞抽提物的制备
实验材料细胞试剂、试剂盒弗氏破碎缓冲液匀浆缓冲液仪器、耗材弗氏破碎器实验步骤1. 将 5~10 g 新鲜或冻存的细胞沉淀物垂悬于弗氏破碎缓冲液中或者适当的匀浆缓冲液中。通常 4L 的大肠杆菌培养物可以获得大约 7.5 g 的细胞沉淀。2. 悬液中加入无 RNase 的 DNase 至终浓度为 2 μ
红细胞渗透脆性实验
实验方法原理本试验是测定红细胞对不同浓度低渗盐水溶液的抵抗力，这种抵抗力与红细胞表面积和体积的比值有密切关系．表面积大而体积小者对低渗盐水抵抗力较大（脆性减低）反之，则抵抗力较小（脆性增加），球形细胞表面积深/体积比值减小，脆性增加．试剂、试剂盒NaCL溶液双蒸水仪器、耗材容量瓶试管实验步骤一、实验
红细胞渗透脆性实验
实验方法原理 本试验是测定红细胞对不同浓度低渗盐水溶液的抵抗力，这种抵抗力与红细胞表面积和体积的比值有密切关系．表面积大而体积小者对低渗盐水抵抗力较大（脆性减低）反之，则抵抗力较小（脆性增加），球形细胞表面积深/体积比值减小，脆性增加．试剂、试剂盒 NaCL溶液双蒸水仪器、耗材 容量瓶试管实验步骤
细菌细胞的制备实验实验
实验材料 细胞试剂、试剂盒 弗氏破碎缓冲液匀浆缓冲液仪器、耗材 弗氏破碎器实验步骤 1. 将 5~10 g 新鲜或冻存的细胞沉淀物垂悬于弗氏破碎缓冲液中或者适当的匀浆缓冲液中。通常 4L 的大肠杆菌培养物可以获得大约 7.5 g 的细胞沉淀。2. 悬液中加入无 RNase 的 DNase 至终浓度为
细菌细胞的制备实验实验
细胞抽提物的制备 核糖体及多核糖体的分离 70S核糖体的纯化 多核糖体的纯化 将核糖体解离为大亚基和小亚基 实验材料
细菌细胞的制备实验实验
细胞抽提物的制备核糖体及多核糖体的分离70S核糖体的纯化多核糖体的纯化将核糖体解离为大亚基和小亚基实验材料细胞 试剂、试剂盒弗氏破碎缓冲液
SDSPAGE－蛋白质样品的制备
试剂、试剂盒SDS-PAGE Loading BufferddH2O30%丙烯酰胺混合液1.5M Tris(pH8.8)10%SDS10%过硫酸铵TEMEDTris-甘氨酸电泳缓冲液溴酚蓝考马斯亮蓝 R-250 染色液考马斯亮蓝脱色液仪器、耗材离心机冷室水浴锅电泳装置微量移液器水平摇床滤纸实验步骤实
SDSPAGE－蛋白质样品的制备
试剂、试剂盒 SDS-PAGE Loading BufferddH2O30%丙烯酰胺混合液1.5M Tris(pH8.8) 10%SDS10%过硫酸铵TEMEDTris-甘氨酸电泳缓冲液溴酚蓝考马斯亮蓝 R-250 染色液考马斯亮蓝脱色液仪器、耗材 离心机冷室水浴锅电泳装置微量移液器水平摇床滤纸实验
SDSPAGE－蛋白质样品的制备
SDS-PAGE 蛋白质样品的制备 试剂、试剂盒 SDS-PAGE Loading Buffer ddH2O
哪些细胞周期蛋白可以用于细胞周期分析实验？
以下是一些常用于细胞周期分析实验的细胞周期蛋白：Cyclin D：在细胞周期的 G1 期发挥作用，其表达水平与 G1 期进程相关。Cyclin E：同样在 G1 期起作用，促进细胞从 G1 期向 S 期过渡。Cyclin A：在 S 期和 G2 期表达，对 DNA 合成和细胞进入 M 期有重要作用。
植物细胞渗透势测定实验
实验概要本实验介绍了植物组织渗透势的测定原理及方法。实验原理植物细胞的渗透势取决于液泡的溶质浓度，因此又称溶质势。渗透势与植物水分代谢、生长及抗性等有密切关系。已知在干旱、盐渍等条件下，一些植物常在细胞内主动积累溶质，以降低其渗透势，增加吸水能力，而在一定程度上维持膨压，保障细胞的生长和气孔的开放，
红细胞渗透脆性（孵育）实验
实验原理 红细胞在低渗盐溶液中，当水渗透其内部达一定程度时，红细胞发生膨胀、破裂。观察红细胞在不同浓度盐溶液中的溶血程度，可以判断其对低渗盐溶液的抵抗力，这种抵抗能力与红细胞表面积与容积的比值有关，比值小者，红细胞抵抗力较小，脆性增加。反之抵抗力增大。实验方法 材料： 1.171.1mmol/
细胞膜的制备方法实验——从悬浮细胞中制备细胞膜
实验材料胶原酶试剂、试剂盒EDTAHBSS胶原酶溶液阳离子硅胶贮存液仪器、耗材离心机实验步骤一、用胶原酶/EDTA 释放细胞1. 用预保温溶液洗涤单层细胞并用胶原酶处理(1) 预保温溶液洗涤细胞。预保温溶液：5 mmol/L EDTA 钠盐溶于 HBSS，不含二价阳离子。(2) 在单层细胞上加 1%
细胞破碎和蛋白质溶解实验_化学渗透法
实验方法原理有些有机溶剂（如苯、甲苯）、抗生素、表面活性剂（SDS、Triton X-100）、金属整合剂（EDTA） 、变性剂（盐酸胍、脲）等化学药品都可以改变细胞壁或膜的通透性，使内含物有选择地渗透出来。这种处理方式就是化学渗透法。本文仅以表面活性剂 Triton X-100 为例简要介绍如下。
蛋白质的SDSPAGE实验
实验材料蛋白质溶液团粒状细胞蛋白试剂、试剂盒4X浓缩胶缓冲4X分离胶缓冲10X电泳缓冲液2XSDS-PAGE上样缓冲液正丁醇甲醇SDS储存液仪器、耗材离心机电泳装置凝胶上样吸头玻璃板加热器实验步骤一、灌制平板胶1.清洗玻璃板。a.将玻璃板放人 2%PCC-54 清洗液中浸泡 3?24 h。b.自来水
恒温培养箱应用于大肠杆菌细胞的制备实验
细胞经过一些特殊方法（电击法、CaCl2法）等处理后，细胞膜的通透性发生了暂时性的改变，成为能允许外源DNA分子进入的细胞，即感受态细胞（Compenent cells）。实验方法原理： 带有外源DNA 的重组质粒，在体外构建后，导入宿主细胞，随着细胞的大量复制、繁殖，才能够有机会获得纯的
制备肌动蛋白实验——从肌肉制备丙酮粉用于纯化肌动蛋白
实验材料肌球蛋白试剂、试剂盒肌球蛋白抽提溶液仪器、耗材离心机实验步骤1. 抽提肌球蛋白时得到的沉淀物用 3 倍于沉淀物体积的肌球蛋白抽提溶液抽提 10 分钟。肌球蛋白抽提溶液：0.5 mol/L KCl0.1 mol/L K2HPO42. 抽提物离心（GSA 转头，13000 r/min，17310
胰蛋白酶切磷酸化多肽作图实验—样品制备
实验材料蛋白质试剂、试剂盒甲醇电泳缓冲液仪器、耗材凝胶电泳实验步骤1. 用单向或者双向凝胶电泳将 32P 标记的目的蛋白质与其他不需要的成分分开。2. 电泳结束后，用 50% 甲醇清洗三次，时间控制在 6 小时，去处 SDS 和电泳缓冲液将凝胶放在两张塞热玢膜（Bio-Rad) 之间吸干。用放射性墨