环核苷酸依赖性蛋白激酶分析实验

蛋白激酶的分析是使用标记的供体底物,当酶样品中含有磷酸转移酶活性时,蛋白 质或多肽受体底物中标记物的积累就很容易被检出。实验材料具有环核苷酸依赖性蛋白激酶活性的酶样品10 mg/ml 组蛋白 2B(溶于水)试剂、试剂盒[γ-32P] ATP 溶液5 × 环核苷酸依赖性蛋白激酶反应缓冲液20 × 环核苷酸仪器、耗材30℃ 水浴实验步骤1. 每个分析反应按以下比例将反应组分加入 1.5 ml 微量离心管中,保持冰浴:5 × 环核苷酸依赖性蛋白激酶反应缓冲液1 μl 10 mg/ml 组蛋白 2B1 [γ-32P] ATP 溶液(ATP 终浓度为 5 μmol/L,放射活性为 5 μlCi/μl)1 μl 20 × 环核苷酸0~13 μl 水盖好离心管,混匀,放入 30℃ 水浴。每一反应做三份并设立无底物、酶、环核苷酸等各组分的实验对照。每个反应的体积为 20 μl。2. 加入 1~14 μl 有环核苷酸依赖性蛋白激酶活性的预冷酶样品......阅读全文

环核苷酸依赖性蛋白激酶分析实验

基本方案             实验方法原理 实验材料 具有环核苷酸依赖性蛋白激酶活性的酶样品

环核苷酸依赖性蛋白激酶分析实验

蛋白激酶的分析是使用标记的供体底物,当酶样品中含有磷酸转移酶活性时,蛋白 质或多肽受体底物中标记物的积累就很容易被检出。实验材料具有环核苷酸依赖性蛋白激酶活性的酶样品10 mg/ml 组蛋白 2B(溶于水)试剂、试剂盒[γ-32P] ATP 溶液5 × 环核苷酸依赖性蛋白激酶反应缓冲液20 × 环核

环核苷酸依赖性蛋白激酶分析实验

实验方法原理 实验材料 具有环核苷酸依赖性蛋白激酶活性的酶样品10 mg/ml 组蛋白 2B(溶于水)试剂、试剂盒 [γ-32P] ATP 溶液5 × 环核苷酸依赖性蛋白激酶反应缓冲液20 × 环核苷酸仪器、耗材 30℃ 水浴实验步骤 1. 每个分析反应按以下比例将反应组分加入 1.5 ml 微量离

周期蛋白依赖性蛋白激酶的简介

  指的是cyclin-dependent kinases,周期蛋白依赖性蛋白激酶,是一组丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,和周期蛋白cyclin协同作用,是细胞周期调控中的重要因子。CDK可以和cyclin结合形成异二聚体,其中CDK为催化亚基,cyclin为调节亚基,不同的cyclin—CDK复合物,通过

酪蛋白激酶分析实验

基本方案 用 β-酪蛋白 备择方案 用多肽底物             实验方法原理 实验材料 β-酪蛋

酪蛋白激酶分析实验

实验方法原理 实验材料 β-酪蛋白(溶于水)有酪蛋白激酶活性的酶样品试剂、试剂盒 [γ-32P] ATP 溶液酪蛋白激酶反应缓冲液TCA SDS-PAGE 样品缓冲液仪器、耗材 30℃ 水浴P81 磷酸纤维素膜离心管离心机实验步骤 每个鉴定反应按以下比例将各反应组分加入 1.5 ml 微量离心管中:

简述周期蛋白依赖性蛋白激酶的结构

  在结构上,Cdks有三个重要的功能域。第一个功能域是ATP的结合部位和该酶的活性部分;第二功能域是调节亚基(Cyclin)的结合部位;第三功能域是P13suc1的结合部位(P13suc1能抑制激酶活性,阻止细胞进入或退出M期)。各种Cdk在细胞周期内特定的时间被激活,通过磷酸化底物,驱使细胞完成

蛋白激酶C异构体分析实验

实验材料有 PKC 活性的酶样品试剂、试剂盒[γ-32P] ATP 溶液PKC 反应缓冲液TCASDS - PAGE 样品缓冲液仪器、耗材30℃ 水浴P81 磷酸纤维素膜离心管实验步骤1. 每个分析反应按以下比例将各反应组分加入 1.5 ml 微量离心管中:4 μl 5 × PKC 反应缓冲液1 μ

酪蛋白激酶分析实验_用-β酪蛋白

实验材料β-酪蛋白(溶于水)有酪蛋白激酶活性的酶样品试剂、试剂盒[γ-32P] ATP 溶液酪蛋白激酶反应缓冲液TCASDS-PAGE 样品缓冲液仪器、耗材30℃ 水浴P81 磷酸纤维素膜离心管离心机实验步骤1. 每个鉴定反应按以下比例将各反应组分加入 1.5 ml 微量离心管中:4 μl 5 ×

蛋白激酶C异构体分析实验

基本方案             实验方法原理 实验材料 有 PKC 活性的酶样品

酪蛋白激酶分析实验_用多肽底物

实验方法原理酪蛋白激酶 I 可用多肽 AspAspAspGluGluSerIleThrArgArg 进行分析,最近酿蛋白激酶 II 也已被特异性的多肽底物分析,如 ArgArgArgGluGluGluThrGluGluGlu(下划线残基是磷酸受体)。两个多肽均可通过精氨酸残基结合到 P81 磷酸纤维

蛋白激酶C异构体分析实验

实验方法原理 实验材料 有 PKC 活性的酶样品试剂、试剂盒 [γ-32P] ATP 溶液PKC 反应缓冲液TCASDS - PAGE 样品缓冲液仪器、耗材 30℃ 水浴P81 磷酸纤维素膜离心管实验步骤 1. 每个分析反应按以下比例将各反应组分加入 1.5 ml 微量离心管中:4 μl 5 × P

Ca2+/钙调蛋白依赖性激酶分析实验

蛋白激酶的分析是使用标记的供体底物,当酶样品中含有磷酸转移酶活性时,蛋白 质或多肽受体底物中标记物的积累就很容易被检出。实验材料1 mg ml 钙调蛋白(- 70℃ 小量储存)有 CaM 激酶活性的酶样品10 mmol L 合成肽底物溶液试剂、试剂盒[γ-32P] ATP 溶液5 × CaM 激酶反

Ca2+/钙调蛋白依赖性激酶分析实验

实验方法原理 实验材料 1 mg ml 钙调蛋白(- 70℃ 小量储存)有 CaM 激酶活性的酶样品10 mmol L 合成肽底物溶液试剂、试剂盒 [γ-32P] ATP 溶液5 × CaM 激酶反应缓冲液仪器、耗材 30℃ 水浴实验步骤 1. 对 1.5 ml 微量离心管做双管标记,每个反应按以下

Ca2+/钙调蛋白依赖性激酶分析实验

基本方案             实验方法原理 实验材料 1 mg ml 钙调蛋白(- 70℃ 小量储存)

用蛋白质底物进行蛋白质激酶分析实验—依赖环核苷酸

试剂、试剂盒激酶分析缓冲液组蛋白 2B 储存液环核苷酸依赖的蛋白质激酶分析缓冲液环核苷酸储存液实验步骤1. 在置于冰上的离心管内配制含下列成分的 20 μl 反应混合物:5X 激酶分析缓冲液 4 μl,10 mg/ml 组蛋白 2B 储存液 1 μl,[γ-32P] ATP(终浓度为 5 μCi/5

环核苷酸的定义

中文名称环核苷酸英文名称cyclic nucleotide定  义核苷酸分子内的磷酸酯。视连接部位不同,有2′,3′-环核苷酸、2′,5′-环核苷酸和3′,5′-环核苷酸。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科)

董梦秋等钙离子/钙调素依赖性蛋白激酶II调控机制获进展

  2013年6月25日,北京生命科学研究董梦秋实验室在《eLIFE》杂志发表题为“CAMKII and Calcineurin regulate the lifespan of Caenorhabditis elegans through the FOXO transcription fact

环核苷酸的结构特点

中文名称环核苷酸英文名称cyclic nucleotide定  义核苷酸分子内的磷酸酯。视连接部位不同,有2′,3′-环核苷酸、2′,5′-环核苷酸和3′,5′-环核苷酸。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科)

环核苷酸门通道简介

与电压门控性通道家族关系密切的是CNG通道,从蛋白质序列来看,它们与电压门钾通道结构相似,也有6个跨膜片段,各为带电荷片段,P区构成孔道内侧,整个通道为四聚体结构。在CNG通道中,细胞内的C末端较长,上面含有环核苷酸的结合位点。环核苷酸门通道分布于化学感受器和光感受器中,与膜外信号的转换有关。如气味

常用的药物依赖性实验方法

一、身体依赖性试验:评价新药的身体依赖性潜力,根据新药所属类别不同,需分别进行以下几方面试验: 1、自然戒断试验:自然戒断试验属于慢性实验, 对实验动物通常以剂量递增法给于试验药物;有的也采用恒量法。自然戒断实验的戒断症状发作慢, 持续时间长, 对戒断症状的定量有一定困难。但现已能在小鼠 ,

Nature:DNA依赖性蛋白激酶在rRNA加工等过程中起重要作用

  DNA依赖性蛋白激酶(DNA-dependent protein kinase, DNA-PK)是结合DNA并修复双链断裂的最重要的酶之一。这种修复方式对于产生能够帮助免疫系统抵御入侵者的受体至关重要。但是DNA-PK不仅结合DNA,而且还结合RNA。尽管科学家们早在几十年前就知道了这一点,但他

环核苷酸的基本信息

中文名称环核苷酸英文名称cyclic nucleotide定  义核苷酸分子内的磷酸酯。视连接部位不同,有2′,3′-环核苷酸、2′,5′-环核苷酸和3′,5′-环核苷酸。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科)

用蛋白质底物进行蛋白质激酶分析实验——酪蛋白激酶

试剂、试剂盒酪蛋白激酶分析缓冲液β-酪蛋白β-酪蛋白储存液实验步骤1. 在置于冰上的离心管内配制含下列成分的 20 μl 反应混合物:5X 酪蛋白激酶分析缓冲液                            4 μl  β-酪蛋白                               

大鼠蛋白激酶A(PKA)酶联免疫分析

大鼠蛋白激酶A(PKA)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用       目的:本试剂盒用于测定大鼠血清,血浆及相关液体样本中蛋白激酶A(PKA)的含量。实验原理:   本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠蛋白激酶A(PKA)水平。用纯化的大鼠蛋白激酶A(PKA)抗体包被微孔板,制成固相

药物分析如何预防对药物产生依赖性

对药物产生依赖后,轻者表现为离不开这种药物,不吃就难受,并感周身各种不适,只有服用这种药才自感舒服,此时应及时采取措施,逐步戒除。容易成瘾的药物,最常见的是两类。一类是麻醉镇痛药,如吗啡、杜冷丁等,这类药物除镇痛作用外,还可引起欣快或愉快感,常用剂量连续使用1——2周后即可成瘾。另一类是催眠和抗焦虑

用蛋白质底物进行蛋白质激酶分析实验

ATP储存液的配制依赖环核苷酸的蛋白质激酶蛋白质激酶C酪蛋白激酶酪氨酸激酶凝胶蛋白质激酶分析试剂、试剂盒ATP储存液                                                          实验步骤一、Mg-ATP 储存液的配制ATP 买来时通常是钠盐。大多

用蛋白质底物进行蛋白质激酶分析实验

ATP储存液的配制 依赖环核苷酸的蛋白质激酶 蛋白质激酶C 酪蛋白激酶 酪氨酸激酶 凝胶蛋白质激酶分析            

细胞生物学名词环核苷酸

中文名称:环核苷酸英文名称:cyclic nucleotide定  义:核苷酸分子内的磷酸酯。视连接部位不同,有2′,3′-环核苷酸、2′,5′-环核苷酸和3′,5′-环核苷酸。应用学科:生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科)

大鼠蛋白激酶C(PKC)酶联免疫分析

大鼠蛋白激酶C(PKC)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用       目的:本试剂盒用于测定大鼠血清,血浆,细胞上清及相关液体样本中蛋白激酶C(PKC)的含量。实验原理:   本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠蛋白激酶C(PKC)水平。用纯化的大鼠蛋白激酶C(PKC)抗体包被微孔板