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酪蛋白激酶分析实验_用多肽底物

实验方法原理酪蛋白激酶 I 可用多肽 AspAspAspGluGluSerIleThrArgArg 进行分析，最近酿蛋白激酶 II 也已被特异性的多肽底物分析，如 ArgArgArgGluGluGluThrGluGluGlu（下划线残基是磷酸受体）。两个多肽均可通过精氨酸残基结合到 P81 磷酸纤维素膜上。第一个多肽对酪蛋白激酶 I 相对比较特异，但它的磷酸化反应动力并不理想，其 Km 值大小在毫摩尔范围。因此只有在此酶的纯度很高时用于酪蛋白激酶 I 分析比较理想。实验材料合成肽底物溶液有酪蛋白激酶活性的酶样品试剂、试剂盒[γ-32P] ATP 溶液酪蛋白激酶反应缓冲液TCASDS-PAGE 样品缓冲液仪器、耗材30°C 水浴P81 磷酸纤维素膜离心管离心机实验步骤1. 每个分析反应按以下比例将各反应组分加入 1.5 ml 微量离心管中：10 μl 5 × 酪蛋白激酶反应缓冲液5 μl 10 mmol/L用于酪蛋白激酶......阅读全文