用于蛋白质表达的标签实验
实验步骤一、设计具有标签的蛋白质时需要考虑的因素亲和力和可溶性的选择在大肠埃布氏菌中生产外源蛋白时面临两个挑战: 一? 是所用蛋白质表达系统的表达水平很低; 二是所表达的蛋白质被错误折叠进不溶性的聚集体—包涵体中。弱启动子、低转录起始或稀有密码子的存在引起的表达问题都可以通过在装配过表达质粒时将矫正序列（correctivesequence) 引入基因中和使用补充了稀有 tRNA 的大肠杆菌来得到解决。将高表达的内源性蛋白质融合在外源目标蛋白质的 N 端不仅是一个提高产量的方法，而且还可以增加目标蛋白质的可溶性: 这是可溶性标签的基本原理。另外，亲和标签对蛋白质的纯化至关重要，它提供了多种策略使目标蛋白质结合在亲和基质上 (表 I6.1)。一些蛋白质标签既可作为亲和标签，又可作为可溶性标签。例如，谷胱甘肽-S-转移酶 (glutathione-S-tamsferase，GST) 可以提高某些蛋白质的可溶性，而可溶标签麦芽糖结合蛋......阅读全文
方案9－蛋白质的同位素亲和标签实验
实验材料透析或沉淀处理蛋白样品试剂、试剂盒DTTEDTAICAT 试剂三丁基膦Tris胰酶实验步骤第一阶段 ICAT 标记蛋白第二阶段 阳离子交换清洗 ICAT 样品第四阶段 ICAT 标记多肽的质谱分析展开
标签酶消化释放标签实验
试剂、试剂盒溶液与缓冲液LoTE仪器、耗材Eppendorf 试管实验步骤实验方案 A1.向含有 Dynabeads 的每个试管中加入下列物质：2.65℃ 下酶解 Ih(每 IOmin 混合 1 次)。3.时收集上清液（含有释放的 cDNA 标签）4.用 LoTE 扩容到 200mL。5.等体积的
标签酶消化释放标签实验
试剂、试剂盒 溶液与缓冲液 LoTE 仪器、耗材 Eppendorf 试管 实
标签酶消化释放标签实验
试剂、试剂盒 溶液与缓冲液LoTE仪器、耗材 Eppendorf 试管实验步骤 实验方案 A1.向含有 Dynabeads 的每个试管中加入下列物质：2.65℃ 下酶解 Ih(每 IOmin 混合 1 次)。3.时收集上清液（含有释放的 cDNA 标签）4.用 LoTE 扩容到 200mL。5.等体
用于表达监测的寡核苷酸分析实验1
用于表达监测的 mRNA 的扩增及其与寡核苷酸分析芯片的杂交实验材料样品 RNA试剂、试剂盒Superscript cDNA kit (Life Technologies)RNA 酶抑制剂制备对照转录池酚 氯仿 异戊醇乙酸铵乙醇10 X 转录缓冲液10 X rNTP 混合液T7 RNA 聚合酶RNe
用于表达监测的寡核苷酸分析实验2
数据分析与处理以及数量评定实验步骤1.用 Affymetrix Gene Chip 软件进行最初的数据处理。通过检测图像像素值，此软件测定每种寡核苷酸探针的荧光强度从而计算出每种转录本的简化值。此简化值被称为「平均差异」，它通过确定某一特定转录本在所有引物对中的特异信号而得（即将某一特定转录本由完全
重组蛋白表达的几种常用标签介绍
重组蛋白表达技术现已经广泛应用于生物学各个具体领域。特别是体内功能研究和蛋白质的大规模生产都需要应用重组蛋白表达载体。本文将简要介绍几个常用载体标签及其功能和优点。一. GST标签GST(谷胱甘肽巯基转移酶) 标签蛋白本身是一个在解毒过程中起到重要作用的转移酶，它的天然大小为26KD。将它应用在原
补平标签实验
是对差异显示技术（DD）实验和基因表达系列分析实验中实验方案A和B的补充实验现代神经科学研究技术作者：U.Windhorst & H. Johansson 翻译：赵志奇 陈军实验步骤实验方案 A1.向两个含有释放的 cDNA 标签的试管中加入：2.在 37°C 下孵育 30 min。3.加入 15
补平标签实验
试剂、试剂盒 溶液与缓冲液BSALoTEcDNA标签实验步骤 实验方案 A1.向两个含有释放的 cDNA 标签的试管中加入：2.在 37°C 下孵育 30 min。3.加入 150ul LoTE 扩容到 200ul。4.如上所述，用等体积的 PCI 抽提，乙醇沉淀（实验方案 A，第 2 步)。5.将
补平标签实验
试剂、试剂盒 溶液与缓冲液 BSA LoTE cDNA标签 实验步骤 实验方
生物学术语表达序列标签的定义
表达序列标签从互补DNA（cDNA）分子所测得部分序列的短段DNA（通常300~500bp）。从cDNA文库所得到的许多表达序列标签集合组成表达序列标签数据库，代表在一定的发育时期或特定的环境条件下，特定的组织细胞基因表达的序列。可用于验证基因在特定组织中的表达，推导全长cDNA序列，或作为标签标志
生物学术语表达序列标签的原理
EST是从一个随机选择的cDNA克隆进行5’端和3’端单一次测序获得的短的cDNA部分序列，代表一个完整基因的一小部分，在数据库中其长度一般从20到7000bp不等，平均长度为360±120bp 。EST来源于一定环境下一个组织总mRNA所构建的cDNA文库，因此EST也能说明该组织中各基因的表达水
生物学术语表达序列标签的方法
EST作为表达基因所在区域的分子标签因编码DNA序列高度保守而具有自身的特殊性质，与来自非表达序列的标记（如AFLP、RAPD、SSR 等）相比更可能穿越家系与种的限制，因此EST标记在亲缘关系较远的物种间比较基因组连锁图和比较质量性状信息是特别有用。同样，对于一个DNA序列缺乏的目标物种，来源于其
使用酶标仪的细胞成像系统检测标签蛋白的表达
优势： 带细胞成像系统的功能模块扩展了微孔读板机的检测应用2. 方便检测每个细胞或每孔的标签蛋白的表达水平3. 按照一般微孔读板机的简单流程4. 细胞可视化数据输出，增加了数据可信性某些细胞蛋白存在或不存在，可代表着细胞对某些刺激的反应、某种分化的状态或特定细胞类型的独特特征或者基因
双标签的分离实验
试剂、试剂盒 溶液与缓冲液BSALoTEcDNA标签实验步骤 一、用 NlaIII 消化双标签，释放接头1.向 480ul 已纯化的 PCR 产物中加入下列成分：2.在 37℃ 下消化 Ih(不要热失活酶，否则将致使 22~26bp 的小双标签变性)。3.消化产物可以在 4℃ 下过夜保存，或者用 D
双标签的分离实验
试剂、试剂盒 溶液与缓冲液 BSA LoTE cDNA标签 实验步骤 一、用
双标签的分离实验
试剂、试剂盒溶液与缓冲液BSALoTEcDNA标签实验步骤一、用 NlaIII 消化双标签，释放接头1.向 480ul 已纯化的 PCR 产物中加入下列成分：2.在 37℃ 下消化 Ih(不要热失活酶，否则将致使 22~26bp 的小双标签变性)。3.消化产物可以在 4℃ 下过夜保存，或者用 Dyn
蛋白质是如何表达的
不是蛋白质是如何表达的，而是细胞如何表达出蛋白质的。蛋白质的合成包括转录和翻译两个过程，转录是以DNA为模板合成RNA，mRNA从细胞内出来，和核糖体结合，再在tRNA的帮助和酶、ATP的帮助下，合成蛋白质分子。
羟基磷灰石柱用于蛋白质层析实验
实验步骤 一、机制 从 1971 年（Bernardi，1971;Gorbunoff，1990) 就已经幵始定期发表关于 HA 对蛋白质吸附与解吸附的综述。最近的一篇文献 (Kandorietal.，2004) 引用了较早阐述的
羟基磷灰石柱用于蛋白质层析实验
羟基磷灰石 (hydroxyapatite,HA) 是一种以磷酸钙为原料的羟基化物, 其大量地用于蛋白质的层析分离主要是在 1991?2009 年，并且最初只是用于重组蛋白的纯化。HA 的使用方法参照 Tiselius 等（1956) 的论述和 Gorbunoff(1985) 的综述。实验步骤一、机
蛋白质在哺乳动物细胞中表达实验
实验方法原理 实验材料 载体（如 CDM 8）实验步骤 1. 将目的基因亚克隆至合适的载体中得到所需的重组 DNA 。用小量法（5 ml 培养液）或用 CsCl／溴化乙锭离心法纯化重组 DNA。2. 在转染的前一天，将 COS-7 细胞以约 20% 汇片的数量种入含 DMEM-2 CS 培养基的 1
蛋白质在哺乳动物细胞中表达实验
实验材料载体（如 CDM 8）实验步骤1. 将目的基因亚克隆至合适的载体中得到所需的重组 DNA 。用小量法（5 ml 培养液）或用 CsCl／溴化乙锭离心法纯化重组 DNA。2. 在转染的前一天，将 COS-7 细胞以约 20% 汇片的数量种入含 DMEM-2 CS 培养基的 100 mm 培养皿
蛋白质在哺乳动物细胞中表达实验
基本方案 用COS细胞瞬时表达 实验方法原理 实验材料 载体（如 CD
杆状病毒表达系统用于表达融合型蛋白的转染质粒
是一类早期构建的转染质粒，它包括pAC系列[4],如pAC101、pAC311、pAC360等。在每个载体中，多角体蛋白基因启动子下游ATG启始密码后含有一个单一的BamHⅠ酶切位点，当外源基因和多角体基因的读码框架正确时，就可以获得含1个或几个多角体蛋白N端氨基酸的融合型外源基因。
杆状病毒表达系统的影响蛋白质表达的因素
在杆状病毒系统中，要获得蛋白质的有效表达，首先要选择合适的转染载体。依据表达的蛋白质属融合型或非融合型，选择单启动子型或多启动子型。另外目的基因的选择要注意以下因素：①该目的基因应不含内含子；②去除其mRNA 5′端非编码区的异源序列；③翻译启始密码子AUG应处于适当的序列之间（如Kozak 序列）
连接为双标签实验
是对差异显示技术（DD）实验和基因表达系列分析实验中实验方案A和B的补充实验现代神经科学研究技术作者：U.Windhorst & H. Johansson 翻译：赵志奇 陈军试剂、试剂盒溶液与缓冲液LoTEcDNA标签实验步骤实验方案 A1.此实验方案中，两部分补平的 cDNA 标签（源于同一 c
连接为双标签实验
试剂、试剂盒 溶液与缓冲液 LoTE cDNA标签 实验步骤 实验方案 A 1.此实验方案
羟基磷灰石柱用于蛋白质层析实验（三）
选择合适的缓冲液可以有助于保持目标蛋白质的完整性，同时利于其吸附于 HA。这一步骤在平衡时最好已经完成，平衡时应该没有任何的磷酸盐，然后加载缓冲液。但是在经过几个循环后，填充柱便失效了。研究表明，低至 2rmnol/L 的磷酸盐可以延长层析柱的寿命，同时又兼顾目标蛋白质的纯度。磷酸盐与 ME
羟基磷灰石柱用于蛋白质层析实验（一）
一、机制从 1971 年（Bernardi，1971;Gorbunoff，1990) 就已经幵始定期发表关于 HA 对蛋白质吸附与解吸附的综述。最近的一篇文献 (Kandorietal.，2004) 引用了较早阐述的机制，酸性蛋白质通过 C(钙)-位点结合, 而碱性蛋白质通过 P(磷酸盐
羟基磷灰石柱用于蛋白质层析实验（四）
五、生产规模层析柱的填装对于填充良好的大规模层析柱, 从其顶端到底端，其中的填料是连续均匀分布的，并表现为最佳的层析效能。CHT 的填装方法有数种，如何选择取决于所用的层析柱类型及设备。在填装层析柱前, 应参阅层析柱、介质转移设备和介质填装设备的相关指导手册。开放性层析柱的最大填充床高度不能高于介质