双标签的分离实验

试剂、试剂盒溶液与缓冲液BSALoTEcDNA标签实验步骤一、用 NlaIII 消化双标签,释放接头1.向 480ul 已纯化的 PCR 产物中加入下列成分:2.在 37℃ 下消化 Ih(不要热失活酶,否则将致使 22~26bp 的小双标签变性)。3.消化产物可以在 4℃ 下过夜保存,或者用 Dynabead 进行生物素化 PCR 产物的提取。二、用 Dynabead 提取生物素化产物注意:本步骤中,由于生物素链霉抗生物素的捕获,去除了接头及未酶解或者部分酶解的产物,从而富集反应产物。1.荡链霉抗生物素 M-280 Dynabead 1 min,使其重新成为悬液。2.将 3 份 IOOul 的 Dynabead 转移入 1.5 ml 的 Eppendorf 试管中。3.用磁设备固定磁珠,弃去上清液。4.200ulIX 结合及冲洗缓冲液重悬冲洗 3 次,固定磁珠,弃去冲洗液。5.NlaIII 酶解过的双标签(体积为 600ul) ......阅读全文

双标签的分离实验

            试剂、试剂盒 溶液与缓冲液 BSA LoTE cDNA标签 实验步骤 一、用

双标签的分离实验

试剂、试剂盒 溶液与缓冲液BSALoTEcDNA标签 实验步骤 一、用 NlaIII 消化双标签,释放接头 1.向 480ul 已纯化的 PCR 产物中加入下列成分: 2.在 37℃ 下消化 Ih(不要热失活酶,否则将致使 22~26bp 的小双标签变性)。 3.消化

双标签的分离实验

试剂、试剂盒 溶液与缓冲液BSALoTEcDNA标签实验步骤 一、用 NlaIII 消化双标签,释放接头1.向 480ul 已纯化的 PCR 产物中加入下列成分:2.在 37℃ 下消化 Ih(不要热失活酶,否则将致使 22~26bp 的小双标签变性)。3.消化产物可以在 4℃ 下过夜保存,或者用 D

连接为双标签实验

            试剂、试剂盒 溶液与缓冲液 LoTE cDNA标签 实验步骤

连接为双标签实验

是对差异显示技术(DD)实验和基因表达系列分析实验中实验方案A和B的补充实验 现代神经科学研究技术 作者:U.Windhorst & H. Johansson  翻译:赵志奇 陈军 试剂、试剂盒 溶液与缓冲液LoTEcDNA标签 实验步骤 实验方案 A 1.此实验方

标签酶消化释放标签实验

            试剂、试剂盒 溶液与缓冲液 LoTE 仪器、耗材 Eppendorf 试管 实

标签酶消化释放标签实验

试剂、试剂盒 溶液与缓冲液LoTE仪器、耗材 Eppendorf 试管实验步骤 实验方案 A1.向含有 Dynabeads 的每个试管中加入下列物质:2.65℃ 下酶解 Ih(每 IOmin 混合 1 次)。3.时收集上清液(含有释放的 cDNA 标签)4.用 LoTE 扩容到 200mL。5.等体

标签酶消化释放标签实验

试剂、试剂盒溶液与缓冲液LoTE仪器、耗材Eppendorf 试管实验步骤实验方案 A1.向含有 Dynabeads 的每个试管中加入下列物质:2.65℃ 下酶解 Ih(每 IOmin 混合 1 次)。3.时收集上清液(含有释放的 cDNA 标签)4.用 LoTE 扩容到 200mL。5.等体积的

补平标签实验

            试剂、试剂盒 溶液与缓冲液 BSA LoTE cDNA标签 实验步骤

补平标签实验

是对差异显示技术(DD)实验和基因表达系列分析实验中实验方案A和B的补充实验 现代神经科学研究技术 作者:U.Windhorst & H. Johansson  翻译:赵志奇 陈军 实验步骤 实验方案 A 1.向两个含有释放的 cDNA 标签的试管中加入: 2.在 37°C

补平标签实验

试剂、试剂盒 溶液与缓冲液BSALoTEcDNA标签实验步骤 实验方案 A1.向两个含有释放的 cDNA 标签的试管中加入:2.在 37°C 下孵育 30 min。3.加入 150ul LoTE 扩容到 200ul。4.如上所述,用等体积的 PCI 抽提,乙醇沉淀(实验方案 A,第 2 步)。5.将

用于蛋白质表达的标签实验

实验步骤 一、设计具有标签的蛋白质时需要考虑的因素 亲和力和可溶性的选择 在大肠埃布氏菌中生产外源蛋白时面临两个挑战: 一? 是所用蛋白质表达系统的表达水平很低; 二是所表达的蛋白质被错误折叠进不溶性的聚集体—包涵体中。弱启

用于蛋白质表达的标签实验

实验步骤一、设计具有标签的蛋白质时需要考虑的因素亲和力和可溶性的选择在大肠埃布氏菌中生产外源蛋白时面临两个挑战: 一? 是所用蛋白质表达系统的表达水平很低; 二是所表达的蛋白质被错误折叠进不溶性的聚集体—包涵体中。弱启动子、低转录起始或稀有密码子的存在引起的表达问题都可以通过在装配过表达质粒时将矫正

分离核仁实验——分离核仁

实验材料肝脏试剂、试剂盒NKM仪器、耗材粗孔滤纸Teflon-玻璃匀浆器实验步骤1. 制备溶液:NKM:0.13 mol/L NaCl,5 mmol/L KCl,8 mmol/L MgCl20.34 mol/L 蔗糖,3 mmol/L MgCl22.3 mol/L 蔗糖,10 mmol/L MgCl

双歧杆菌的分离、培养及鉴定

园友sakuyaandy:我们培养双歧杆菌是在厌氧培养箱中进行培养,如果没有的话,用厌氧瓶或厌氧缸都可以。培养基你用的是怎么改良的呢?我们是在MRS里面加入了L-半胱氨酸,不过这都是培养用的培养基,如果你需要区分菌落可以用X-GAL改良MRS可以起到鉴别做用,具体文献名称为园友jerrycs:厌氧微

双歧杆菌的分离、培养及鉴定

  我们培养双歧杆菌是在厌氧培养箱中进行培养,如果没有的话,用厌氧瓶或厌氧缸都可以.培养基你用的是怎么改良的呢?我们是在MRS里面加入了L-半胱氨酸,不过这都是培养用的培养基,如果你需要区分菌落可以用X-GAL改良MRS可以起到鉴别做用,具体文献名称为园友jerrycs:    厌氧微生物在自然

用于蛋白质表达的标签实验(二)

二、可溶性标签在重组蛋白表达中,特别是当在细菌中表达真核蛋白时,主要的瓶颈在于蛋白质的正确折叠与可溶性。一些可溶性蛋白已被作为标签用来改善目标蛋白质的折叠。这些标签应该与其他方法共同使用来促进蛋白质的折叠,如诱导后降低培养温度或者共表达伴侣蛋白(BaneyxandMujacic,2004;deMar

用于蛋白质表达的标签实验(一)

一、设计具有标签的蛋白质时需要考虑的因素亲和力和可溶性的选择在大肠埃布氏菌中生产外源蛋白时面临两个挑战: 一? 是所用蛋白质表达系统的表达水平很低; 二是所表达的蛋白质被错误折叠进不溶性的聚集体—包涵体中。弱启动子、低转录起始或稀有密码子的存在引起的表达问题都可以通过在装配过表达质粒时将矫正

用于蛋白质表达的标签实验2

三、标签的去除由于蛋白标签可能会干扰目标蛋白质的正常功能,所以在完成其促进溶解或亲和纯化的作用后,标签的去除对于生物学和功能研究很有帮助,对 GST 或 MBP 这样的大标签尤其如此,尽管有一些例子显示融合了标签的蛋白质更易结晶 (Smythetal.,2003)。大多数用来向目标蛋白质添加标签的商

组织的分离实验

试剂、试剂盒 Hanks仪器、耗材 镊子网筛碟皿吸管注射器培养瓶实验步骤 一、切割分离法在进行组织块培养时,可采用剪切法,一般多剪切成1 mm3大小的块。具体操作如下:1.  无菌切取1 cm3组织一块,置入青霉素瓶或小烧杯中,左手斜持容器,右手持眼科尖剪或弯剪(剪柄较长为好)伸入容器中,反复剪切组

液泡的分离实验

仪器、耗材:紫洋葱                                                                  紫萝卜叶                                                                  蔗糖溶液

组织的分离实验

机械分散法 胰蛋白酶消化消化分离法 胶原酶消化分离法 离心分离法 EDTA 消化分离法             试剂、试剂盒

mRNA-的分离实验

实验方法原理 哺乳动物细胞的绝大部分mRNA在其3‘ 端均有一poly(A)尾,因此可以用oligo(dT)-纤维素亲和层析法从大量的细胞RNA中分离mRNA。实验步骤1.  用0.1 mol/L NaOH悬浮0.5~1.0 goligo(dT)-纤维素。 2.  将悬浮液装入灭菌的一次性层

液泡的分离实验

撕取紫色洋葱或萝卜叶片表皮,置于载玻片上,稍滴加清水后盖上盖玻片,于显微镜下观察制片中的细胞,若细胞其中有一个完整无缺的、含花青素的玫瑰紫色液泡,则用滤纸条吸引液体的方法连续滴加0.5M蔗糖溶液仪器、耗材紫洋葱紫萝卜叶蔗糖溶液小镊子实验步骤一、材料与设备紫洋葱、紫萝卜叶、0.5 M 蔗糖溶液、小镊子

mRNA-的分离实验

oligo(dT)-纤维素亲和层析法             实验方法原理  哺乳动物细胞的绝大部分mRNA在其3‘ 端均有一poly(A)尾,因此可以

病毒的分离实验

实验步骤 标本的采集:病毒分离常用的标本有血液,脑脊液,粪便,直肠拭子,咽喉含漱液,咽拭子,尸检组织等。所取标本的种类视疾病性质而异。如呼吸道疾病常取咽喉洗液,咽拭子;消化道疾病取粪便,直肠拭子;神经系统疾病取脑脊液,粪便等。采取标本时应避免污染,有些标本如粪便,咽喉洗液,虽本身含有大量杂菌,但为保

液泡的分离实验

仪器、耗材 紫洋葱紫萝卜叶蔗糖溶液小镊子实验步骤 一、材料与设备紫洋葱、紫萝卜叶、0.5 M 蔗糖溶液、小镊子二、实验步骤撕取紫色洋葱或萝卜叶片表皮,置于载玻片上,稍滴加清水后盖上盖玻片,于显微镜下观察制片中的细胞,若细胞其中有一个完整无缺的、含花青素的玫瑰紫色液泡,则用滤纸条吸引液体的方法连续滴加

Flag标签蛋白检测抗体实验应用说明

Flag标签蛋白检测抗体Abbkine提供可用于WB,IF,IP应用的Flag抗体,特异性检测Flag标签融合蛋白,Flag标签抗体可识别在细胞内表达的Flag标记重组蛋白,包括Flag位于氨基末端、中段以及羧基末端的重组蛋白。Flag标签系统利用一个短的亲水性八氨基酸肽( DYKDDDDK)融

双水相体系用于生物分子的分离

  双水相体系是一种高效的萃取体系,由于离子液体的可设计性,基于离子液体的双水相体系应用更加广泛。理想的双水相体系应具有优异相分离行为、较低粘度和高效萃取效率等特性,完全的两相分离是实现高选择性萃取的前提。然而在无机盐存在下,离子液体会出现盐析现象。浙江大学邢华斌教授课题组通过可逆加成-断裂链转移聚

分离核仁实验

分离核仁 从人肝脏或胎盘组织中分离核仁 HeLa细胞细胞核或核仁的制备 高镁法分离核仁             实验材料 肝脏