细胞同步化实验
实验材料细胞试剂、试剂盒诺考达唑仪器、耗材培养瓶试管实验步骤1. 往 175 cm2 规格的培养瓶中接种细胞，培养至汇合率达 60%~80%。2. 用力敲打培养瓶 10 次，然后吸去培养液，以去除松散贴壁的细胞，死细胞和细胞碎片。3. 加入 10 ml 含 0.05 mg/ml 诺考达唑的预温培养基，重新放回温箱孵育 4 小时。4. 将培养瓶中的培养液转入无菌试管中。5. 中等用力拍击培养瓶以剥离有丝分裂细胞，用 5 ml 原来的含诺考达唑培养液涮洗瓶子两次，再转入一支新的试管中。收集到的有丝分裂的细胞能室温放置，然后处理其余的培养瓶。每只瓶子的细胞产量为 3X105~4X106 。6. 合并所有瓶中的有丝分裂细胞，分析有丝分裂细胞的百分比。7. 要得到 G1 期细胞，600 g，37℃ 离心 8 分钟，用不含诺考达唑的培养基于 37℃ 重悬细胞，每 175 cm2 规格培养瓶接种 1X107&nb......阅读全文
细胞同步化实验
实验材料 CHO 细胞仪器、耗材 完全培养基实验步骤 1. 用完全培养基培养 CHO 细胞，这样当细胞转入无异亮氨酸培养基培养时，细胞汇合率达 50%~60% 且处于对数生长期。2. 吸弃培养基，用预温的无异亮氨酸的培养基冲涮一次细胞，加入无异亮氨酸的培养基，37℃ 孵育 40~48 小时。3. 要
细胞同步化实验
异亮氨酸营养缺乏法收集G1期细胞 同步优于G1/S期 选择性剥离法进行有丝分裂期同步 离心洗脱法 实验材料
细胞同步化实验
实验材料细胞试剂、试剂盒诺考达唑仪器、耗材培养瓶试管实验步骤1. 往 175 cm2 规格的培养瓶中接种细胞，培养至汇合率达 60%~80%。2. 用力敲打培养瓶 10 次，然后吸去培养液，以去除松散贴壁的细胞，死细胞和细胞碎片。3. 加入 10 ml 含 0.05 mg/ml 诺考达唑的预温培养基
细胞同步化实验
异亮氨酸营养缺乏法收集G1期细胞 同步优于G1/S期 选择性剥离法进行有丝分裂期同步 离心洗脱法 实验材料
细胞同步化实验操作步骤
在肿瘤细胞培养过程中，细胞多处于不同的细胞周期时相中。不同时相的细胞对药物干预存在不同的反应，会影响实验的重复性，因此需要制备细胞周期一致的细胞。细胞同步化是解决该问题的好办法。细胞同步化是利用药物或其他方法使细胞停止在细胞周期的某个时相的技术，其基本原则是使细胞停留在细胞周期的特定时相上；停滞过程
细胞同步化实验_离心洗脱法
实验材料细胞仪器、耗材洗脱离心机培养基锥形瓶洗脱仪实验步骤1. 准备下列仪器：洗脱离心机装有一个大容器中的 20 L 培养基，含 0.5%~1% 血清和抗生素，置于室温20 个 1 L 的锥形瓶，用以收集各洗脱组分2. 至少提前 10 天开始培养细胞，进行离心洗脱时细胞连续进入指数生长期且不会达到太
细胞同步化实验_同步优于G1/S期
实验材料细胞培养物试剂、试剂盒胸苷仪器、耗材流式细胞计量仪实验步骤一、双胸苷同步化法1. 往指数生长期细胞培养物中加入 2 mmol/L 的胸苷，孵育 12 小时。2. 600 g 离心，去含胸苷培养基，换上正常培养基轻轻重悬细胞，让细胞生长 10~12 小时使完全走出 S 期。3. 加入胸苷至 2
细胞同步化的方法总结
问：在培养细胞取材做其他检测时，为了各个培养瓶中的细胞的齐同性，常须通过同步而实现。具体方法不明，好象是用维持培养液（含较低浓度培养血清），而不是用生长培养液。答：1.细胞同步化是指为研究细胞周期的不同阶段的生化特征,必须获得细胞周期一致性的细胞.因此,你首先看看是否需要用同步化的细胞2.细胞同步化
细胞周期同步化的概念
同步化是一个生物学现象。在同种细胞组成的细胞群体中，不同的细胞可能处于细胞周期的不同时相。为了某种目的，人们常常需要整个细胞群体处于细胞周期同一时相。此过程即为细胞周期同步化，简称同步化。
技术和方案17－细胞同步化
实验步骤展
细胞同步化实验_异亮氨酸营养缺乏法收集G1期细胞
实验材料CHO 细胞仪器、耗材完全培养基实验步骤1. 用完全培养基培养 CHO 细胞，这样当细胞转入无异亮氨酸培养基培养时，细胞汇合率达 50%~60% 且处于对数生长期。2. 吸弃培养基，用预温的无异亮氨酸的培养基冲涮一次细胞，加入无异亮氨酸的培养基，37℃ 孵育 40~48 小时。3. 要重新释
DNA合成阻断法诱导细胞同步化的原理
其中高浓度TdR对S期细胞的毒性较小，因此常用TdR双阻断法诱导细胞同步化：在细胞处于对数生长期的培养基中加入过量TdR-（Hela细胞系，2mol/L；CHO细胞系，7.5mol/L），S期细胞被抑制，其他细胞继续运转，最后停在G1/S交界处，弃去TdR，洗涤细胞并加入新鲜培养液，细胞又开始分裂。
细胞周期人工同步化的过程和特点
人工选择同步化人工选择同步化实现方法人工选择同步化是指人为地将处于周期不同时相的细胞分离开来，从而获得不同时相的细胞群体。例如，处于对数生长期的单层培养细胞，细胞分裂活跃，大量处于分裂期的细胞变圆，从培养瓶（皿）壁上隆起，与培养瓶（皿）壁的附着力减弱。若轻轻振荡培养瓶（皿），处于分裂期的细胞即会从瓶
最重要的人工细胞周期同步化的方法
细胞周期同步化1.自然同步化自然同步化在自然界中，细胞自然同步化的现象在动、植物及粘菌中都有所发现，它们不受人为条件的干扰，因而有可能在接近自然的条件下进行观察。缺点：自然同步化受到很多条件的限制。2.人工选择同步化人工选择同步化：人为的将处于不同细胞周期的细胞分离开，从而获得不同时期细胞群体的方法
心脏再同步化治疗的新观点
一、心脏再同步治疗（CRT）指征 对于CRT治疗，目前观点为： （1）QRS波时限是目前CRT入选重要标准，有充分的循证医学证据； （2）循证医学证据拓展了CRT适应症范围，越来越多证据显示，房颤及NYHAⅠ～Ⅱ 级的心衰（LVEF≤35％）患者可从CRT治疗中获益，房室结
人工诱导同步化的过程和特点
细胞同步化可以通过人工诱导而获得，即通过药物诱导，使细胞同步化在细胞周期的某个特定时相。目前应用较广泛的诱导同步化方法主要有两种，即DNA合成阻断法和分裂中期阻断法。 DNA合成阻断法指采用低毒或无毒的DNA合成抑制剂，将细胞抑制在DNA合成期，从而实现同步化。目前采用最多的DNA合成抑制剂为Td
骨髓染色体培养同步化操作方案
实验概要本实验介绍了骨髓染色体培养同步化操作方法。实验步骤1. 培养制备 1) 在室温或37±2℃的温度下解冻骨髓细胞染色体同步化套装培养管或培养瓶。 2) 在无菌条件下添加1ml骨髓(加入的量由样本细胞密度决定)至一个试管中或分配5ml瓶装的介质到一个细胞培养瓶中并加入样本。 3) 盖上培养管的盖
骨髓染色体培养同步化操作方案
建议尝试对样本中包含的有核细胞的数量做一个评估（有核细胞的最佳浓度是1×106个细胞/ml.培养液）一、培養製備1: 在室温或37±2℃的温度下解冻骨髓细胞染色体同步化套装培养管或培养瓶。2: 在无菌条件下添加1ml骨髓（加入的量由样本细胞密度决定）至一个试管中或分配5ml瓶装的介质到一个细胞培养瓶
心脏再同步化治疗：一种新选择
充血性心力衰竭，即（congestive heart failure，CHF）是常见临床综合征同时也是心内科治疗学上的难题，是使患者丧失工作能力，具有较高死亡率的严重疾患，每年有成千上万的患者死于心力衰竭。最近几十年来，CHF的发病逐年增加。美国心脏协会（AHA）发布的2012年心脏疾病和脑卒中
细胞计数实验——细胞计数实验
实验方法原理平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞牛长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。但是，由于待测样品往往不易
Cell：同步化的Wnt和Notch脉冲控制胚胎分节
在胚胎由单个细胞形成复杂有机体的过程中，大量的结构形成过程确保正确的细胞在正确位置和正确的时间发育。细胞在这种早期发育过程中以有节奏的方式激活特定基因，从而导致激活波浪席卷整个胚胎。图片来自Cell, doi:10.1016/j.cell.2018.02.026。 如今，在一项新的研究中，来自
细胞周期分析技术对实验样本有哪些要求？
细胞周期分析技术对实验样本通常有以下要求：细胞数量：一般需要足够数量的细胞以获得具有统计学意义的结果。对于流式细胞术等方法，通常建议至少 10^5 - 10^6 个细胞。细胞活性：样本中的细胞应具有较高的活性，以确保细胞周期状态的准确性。死细胞或受损细胞可能会影响检测结果。细胞纯度：如果样本中存在大
细胞转染实验的实验步骤细胞传代
(1)试验准备：200ul/1mlTip头各一盒（以上物品均需高压灭菌），酒精棉球，废液缸，试管架，微量移液器，记号笔，培养皿，离心管。(2)弃掉培养皿中的培养基，用1ml的PBS溶液洗涤两次。(3)用Tip头加入1mlTrypsin液，消化1分钟（37。C，5%CO2)。用手轻拍培养瓶壁，观察到细
细胞转染实验的实验步骤细胞转染
1）转染试剂的准备A.将400ul去核酸酶水加入管中，震荡10秒钟，溶解脂状物。B.震荡后将试剂放在－20摄氏度保存，使用前还需震荡。2）选择合适的混合比例（1：1－1：2/脂质体体积：DNA质量）来转染细胞。在一个转染管中加入合适体积的无血清培养基。加入合适质量的MyoD或者EGFP的DNA，震荡
心脏再同步化治疗慢性心力衰竭适应证进展
心脏再同步治疗（CRT）已成为当下心力衰竭非药物治疗的一线选择。一系列大规模临床试验以及我们亲身的临床实践都证实了CRT在改善心力衰竭患者症状，降低发病率和死亡率的卓越疗效。然而，目前仍有一些问题尚待解决，尤为突出的是CRT较高的无反应率。应用不同判断标准，比如临床标准（纽约心功能分级或6分
一例心脏再同步化治疗超应答病例分析
患者，男性，58岁，因气促，呼吸困难1年入院。入院后胸片示心胸比0.56；Holter示窦性心律，完全性左束支传导阻滞，心率为60及100次/分时PR间期分别为0.22及0.18 s。心脏超声：左室舒张未期内径（LVDd）69 mm，左室射血分数（LEVF）0.34。诊断为扩张型心肌病，左心扩大
如何提高细胞周期分析技术的准确性？
可以提高细胞周期分析技术准确性的方法：严格的样本处理：确保细胞收集过程中尽量减少损伤，维持细胞的完整性和活性。优化固定、染色等步骤的条件，严格控制时间、温度和试剂浓度。质量控制：使用已知细胞周期分布的标准细胞样本作为对照，同时进行检测以验证实验的准确性。定期对仪器进行校准和维护，确保检测结果的稳定性
用流式测细胞周期的一点总结
【细胞种类】小牛肺动脉平滑肌细胞第5代；【培养液】含15％FBS的MEM液；【固定方法】70％酒精固定；【染色方法】PI单染法；【具体步骤】1、接种：以10*5/ml密度（活细胞）接种，加培养液；2、同步化：24h后加不含FBS的MEM进行同步化12－24h；3、加因素：弃MEM液换等量的培养液，加
细胞划痕实验实验步骤
一.准备：所有能灭菌的器械都要灭菌，直尺和marker笔在操作前紫外照射30min（超净台内）二.流程：1.先用marker笔在6孔板背后，用直尺比着，均匀得划横线，大约每隔0.5~1cm一道，横穿过孔。每孔至少穿过5条线。2.在空中加入约5X105个细胞，具体数量因细胞不同而不同，掌握为过一夜能铺
DNA合成抑制剂的作用原理是什么？
DNA合成阻断法：选用DNA合成抑制剂，可逆地抑制DNA合成，而不影响其他时期细胞的运转，最终可将细胞群阻断在S期或G1/S交界处。羟基脲、阿糖胞苷、氨甲蝶呤、高浓度AdR(脱氧腺苷)、GdR(脱氧鸟苷)和TdR，均可抑制DNA合成，使细胞同步化。其中高浓度TdR对S期细胞的毒性较小，因此常用TdR