细胞同步化实验
实验材料细胞试剂、试剂盒诺考达唑仪器、耗材培养瓶试管实验步骤1. 往 175 cm2 规格的培养瓶中接种细胞,培养至汇合率达 60%~80%。2. 用力敲打培养瓶 10 次,然后吸去培养液,以去除松散贴壁的细胞,死细胞和细胞碎片。3. 加入 10 ml 含 0.05 mg/ml 诺考达唑的预温培养基,重新放回温箱孵育 4 小时。4. 将培养瓶中的培养液转入无菌试管中。5. 中等用力拍击培养瓶以剥离有丝分裂细胞,用 5 ml 原来的含诺考达唑培养液涮洗瓶子两次,再转入一支新的试管中。收集到的有丝分裂的细胞能室温放置,然后处理其余的培养瓶。每只瓶子的细胞产量为 3X105~4X106 。6. 合并所有瓶中的有丝分裂细胞,分析有丝分裂细胞的百分比。7. 要得到 G1 期细胞,600 g,37℃ 离心 8 分钟,用不含诺考达唑的培养基于 37℃ 重悬细胞,每 175 cm2 规格培养瓶接种 1X107&nb......阅读全文
细胞计数实验
实验方法原理细胞悬液制备后,需要计算悬液中所含细胞数量;一般以细胞数/毫升表示。因只有健康的细胞才有活力,接种后能够生长增殖,所以在接种关应先检查一下细胞的活力。实验材料细胞悬液试剂、试剂盒台盘蓝酒精培养液仪器、耗材吸管实验步骤1. 计数板用96%酒精冲洗计数板后,用干净鹿皮擦净,另擦净盖片一张;
细胞划痕实验
材料:6孔板marker笔直尺20微升枪头(灭菌)无血清培养基PBS准备:所有能灭菌的器械都要灭菌,直尺和marker笔在操作前紫外照射30min(超净台内)流程:1、先用marker笔在6孔板背后,用直尺比着,均匀地划横线,大约每隔0.5~1cm一道,横穿过孔。每孔至少穿过5条线。2、在空中加入约
细胞划痕实验
材料:6孔板marker笔直尺20微升枪头(灭菌)无血清培养基PBS准备:所有能灭菌的器械都要灭菌,直尺和marker笔在操作前紫外照射30min(超净台内)流程:1、先用marker笔在6孔板背后,用直尺比着,均匀地划横线,大约每隔0.5~1cm一道,横穿过孔。每孔至少穿过5条线。2、在空中加入约
细胞计数实验
实验方法原理 细胞悬液制备后,需要计算悬液中所含细胞数量;一般以细胞数/毫升表示。因只有健康的细胞才有活力,接种后能够生长增殖,所以在接种关应先检查一下细胞的活力。 实验材料
细胞划痕实验
材料: 6孔板 marker笔 直尺 20微升枪头(灭菌) 无血清培养基 PBS 准备: 所有能灭菌的器械都要灭菌,直尺和marker笔在操作前紫外照射30min(超净台内) 流程: 1、先用marker笔在6孔板背后,用直尺比着,均匀地划横线,大约每隔0.5~1cm一道,横穿过孔。每孔至少穿过5
细胞传代实验
细胞培养技术 消化法 实验方法原理 培养细胞传代根据不同细胞采取不同的方法。贴壁生长的细胞用消化法传代;部分贴壁生长的细胞用直接吹打可传代;悬浮生长
细胞凋亡实验
细胞凋亡(Apoptosis) 又称程序性细胞死亡(Programmed Cell Death,PCD)是指细胞基因调控的一种自主性的自杀现象。即是在一定的生理或病理条件下,遵循自身的程序,自主结束生命的死亡方式。凋亡一词最早是由年澳大利亚组织病理学家John Kerr通过研究大鼠肝左叶细胞死亡时,
细胞运送实验
实验方法原理 当前培养细胞既可可在国内相互寄赠,也可进行国际间的交流,为此要有运输细胞的方法。装运方法有两种:一是用液氮或干冰保存,效果较好,但需用特制容器如小液氮罐等,又因液氮和干冰蒸发均能较快,适于空运,比较麻烦;另为充液法,比较简便。实验材料 细胞试剂、试剂盒 培养液仪器、耗材 培养瓶实验步骤
细胞划痕实验
细胞划痕实验(Wound Healing)是一种操作简单,经济实惠的研究细胞迁移/肿瘤侵袭的体外试验方法。这种方法的原理是,当细胞长到融合成单层状态时,在融合的单层细胞上人为制造一个空白区域,称为“划痕”。划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域使“划痕”愈合。基本的步骤包括“划痕”的制造,细胞迁移期间图像
细胞运送实验
充液法 实验方法原理 当前培养细胞既可可在国内相互寄赠,也可进行国际间的交流,为此要有运输细胞的方法。装运方法有两种:一是用液氮或干冰保存,效果较好,但需用特
细胞划痕实验
实验步骤一.准备:所有能灭菌的器械都要灭菌,直尺和marker笔在操作前紫外照射30min(超净台内)二.流程:1.先用marker笔在6孔板背后,用直尺比着,均匀得划横线,大约每隔0.5~1cm一道,横穿过孔。每孔至少穿过5条线。2.在空中加入约5X105个细胞,具体数量因细胞不同而不同,掌握为过
细胞计数实验
实验原理 在细胞培养工作中,常需要了解细胞生活状态和鉴别细胞死活,确定细胞接种浓度和数量以及了解细胞存活率和增殖度,如用酶消化制备的细胞悬液中细胞活力的鉴别,冻存细胞复苏后的活力检测等。细胞悬液制备后,常用活体染料台盼蓝对细胞进行染色,进行细胞计数。台盼蓝不能透过活细胞正常完整的细胞膜,故活细胞不着
细胞划痕实验
划痕法 实验方法原理 创伤愈合实验是一种简单、廉价的方法,也是最早发展起来的研究定向细胞在体外迁移的方法之一。该方法模拟了细胞在体内愈合过程中的迁移过程。基本
细胞计数实验
实验方法原理 显微镜直接计数法是将小量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻片上(又称计菌器),于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法。目前国内外常用的计菌器有:血细胞计数板。Peteroff-Hauser 计菌器以及比 Hawksley 计菌器等,它们都可用于酵母、细菌
细胞传代实验
细胞培养技术 消化法 实验方法原理 培养细胞传代根据不同细胞采取不同的方法。贴壁生长的细胞用消化法传代;部分贴壁生长的细胞用直接吹打可传代;悬浮生长
细胞计数实验
实验方法原理细胞悬液制备后,需要计算悬液中所含细胞数量;一般以细胞数/毫升表示。因只有健康的细胞才有活力,接种后能够生长增殖,所以在接种关应先检查一下细胞的活力。实验材料细胞悬液试剂、试剂盒台盘蓝酒精培养液仪器、耗材吸管实验步骤1. 计数板用96%酒精冲洗计数板后,用干净鹿皮擦净,另擦净盖片一张;
细胞划痕实验
材料:6孔板marker笔直尺20微升枪头(灭菌)无血清培养基PBS准备:所有能灭菌的器械都要灭菌,直尺和marker笔在操作前紫外照射30min(超净台内)流程:1、先用marker笔在6孔板背后,用直尺比着,均匀地划横线,大约每隔0.5~1cm一道,横穿过孔。每孔至少穿过5条线。2、在空中加入约
细胞传代实验
实验方法原理 培养细胞传代根据不同细胞采取不同的方法。贴壁生长的细胞用消化法传代;部分贴壁生长的细胞用直接吹打可传代;悬浮生长的细胞可以采用直接吹打或离心分离后传代,或用自然沉降法吸除上清后,再吹打传代。实验材料 细胞试剂、试剂盒 D-Hanks液小牛血清RPMI1640双抗胰蛋白酶EDTANHCl
细胞计数实验
实验方法原理 细胞悬液制备后,需要计算悬液中所含细胞数量;一般以细胞数/毫升表示。因只有健康的细胞才有活力,接种后能够生长增殖,所以在接种关应先检查一下细胞的活力。 实验材料
细菌细胞的制备实验实验
细胞抽提物的制备 核糖体及多核糖体的分离 70S核糖体的纯化 多核糖体的纯化 将核糖体解离为大亚基和小亚基 实验材料
细胞转染实验的实验步骤
细胞传代(1)试验准备:200ul/1mlTip头各一盒(以上物品均需高压灭菌),酒精棉球,废液缸,试管架,微量移液器,记号笔,培养皿,离心管。(2)弃掉培养皿中的培养基,用1ml的PBS溶液洗涤两次。(3)用Tip头加入1mlTrypsin液,消化1分钟(37。C,5%CO2)。用手轻拍培养瓶壁,
细菌细胞的制备实验实验
细胞抽提物的制备核糖体及多核糖体的分离70S核糖体的纯化多核糖体的纯化将核糖体解离为大亚基和小亚基实验材料细胞 试剂、试剂盒弗氏破碎缓冲液
细菌细胞的制备实验实验
实验材料 细胞试剂、试剂盒 弗氏破碎缓冲液匀浆缓冲液仪器、耗材 弗氏破碎器实验步骤 1. 将 5~10 g 新鲜或冻存的细胞沉淀物垂悬于弗氏破碎缓冲液中或者适当的匀浆缓冲液中。通常 4L 的大肠杆菌培养物可以获得大约 7.5 g 的细胞沉淀。2. 悬液中加入无 RNase 的 DNase 至终浓度为
细胞转染实验的实验目的
学习和掌握外源基因导入真核细胞的主要方法—脂质体介导的转染。了解外源基因进入的一般性方法,观测外源蛋白的表达(绿色荧光蛋白),为染色准备实验材料。
细胞转染实验的实验原理
外源基因进入细胞主要有四种方法:电击法、磷酸钙法、脂质体介导法和病毒介导法。电击法是在细胞上短时间暂时性的穿孔让外源质粒进入;磷酸钙法和脂质体法是利用不同的载体物质携带质粒通过直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因进入细胞;病毒法是利用包装了外源基因的病毒感染细胞的方法使得其进入细胞。但是由于电击法和
细胞技术专题:细胞传代实验
根据细胞生长的恃点,传代方法有3种:悬浮生长细胞传代、半悬浮生长细胞传代(Hela细胞)、贴壁生长细胞传代。实验方法细胞培养技术 消化法 实验方法原理培养细胞传代根据不同细胞采取不同的方法。贴壁生长的细胞用消化法传代;部分贴壁生长的细胞用直接吹打可传代;悬浮生长的细胞可以采用直接吹打或离心分离后传代
细胞成团和细胞出芽实验
近几年来,3D(three dimensional)细胞培养系统开始成为生物学研究新的研究方法。使用3D系统培养系统能更好的模拟生物体内的真实生理环境,而2D(传统的贴壁培养)细胞培养系统不能有效的模拟细胞在生物体内的生理环境。3D细胞技术有很多种方法,使用多细胞形成的细胞团是其中主要的研究应用之一
心脏再同步化治疗不适用于非左室传导阻滞
相关研究情况概述 近期,一个长达7年的大型临床随机试验研究结果显示,如果轻度心衰患者存在左室传导阻滞(LBBB)伴左室射血分数(LV)降低及起搏治疗的其他适应症,加用CRT具有长期的修复治疗作用。 心脏再同步治疗多通道自动除颤器植入试验(MADIT-CRT)结果显示,与仅仅接
上皮细胞类培养实验_肝细胞培养实验
实验方法原理肝实质由大量肝细胞和少量间质组成,人胎儿、成人和动物的肝脏皆可用于培养;肝脏具有取材方便和易于生长的优点,能获得典型上皮细胞培养。肝细胞形态规整,有多种功能并具有代谢活化致癌物的能力,适用做多种研究;我国已建有多个人肝癌细胞系。实验材料肝脏试剂、试剂盒BSS消化液胰蛋白酶胶原酶仪器、耗材
实验时间_流式细胞仪检测细胞凋亡实验
流式细胞仪检测细胞凋亡可以:鉴定细胞凋亡形态;可以准确的进行凋亡细胞的计数;可以进行特异的定性分析和定量分析。实验原理细胞凋亡时,在细胞、亚细胞和分子水平上会发生的特征性改变,这些改变包括细胞核的改变、细胞器的改变、细胞膜成分的改变和细胞形态的改变等,其中细胞核的改变最具特征性。通过流式细胞仪检测这