方案21.3用Hoechst33258测定DNA实验
实验方法原理在缓冲液中匀浆细胞或组织，继用超声处理。以一定量的细胞悬液与Hoechst33258混匀，测定其荧光。实验步骤材料非无菌：缓冲液：0.05mol/LNaPO4；2.0mol/L NaCl，pH7.4 , 含 2 X l0-3 mol/L EDTA 。Hoechst33258；缓冲液中，100ng/ml 以上的 DNA 用 lug/ml,10~100ng/ml 则用 0.lug/ml。操作步骤1. 在缓冲液中用 Potter 匀浆器匀浆细胞，1X 105 个细胞/ml , 1min。2. 超声处理 30s。3. 用 Hoechst 33258 和缓冲液按 1 : 10 稀释细胞。4. 在 492nm，激发为 356nm 处检测荧光辐射，以小牛胸腺 DNA 作为标准。展开......阅读全文
用－Hoechst33258－测定DNA实验
实验方法原理 在缓冲液中匀浆细胞或组织，继用超声处理。以一定量的细胞悬液与Hoechst33258混匀，测定其荧光。 实验步骤 材料非无菌：缓冲液：0.05
用－Hoechst33258－测定DNA实验
实验方法原理在缓冲液中匀浆细胞或组织，继用超声处理。以一定量的细胞悬液与Hoechst33258混匀，测定其荧光。实验步骤材料非无菌：缓冲液：0.05mol/LNaPO4；2.0mol/L NaCl，pH7.4 , 含 2 X l0-3 mol/L EDTA 。Hoechst33258；缓冲液中，1
方案－21.3－用－Hoechst33258－测定DNA实验
实验方法原理在缓冲液中匀浆细胞或组织，继用超声处理。以一定量的细胞悬液与Hoechst33258混匀，测定其荧光。实验步骤材料非无菌：缓冲液：0.05mol/LNaPO4；2.0mol/L NaCl，pH7.4 , 含 2 X l0-3 mol/L EDTA 。Hoechst33258；缓冲液中，1
测定DNA含量用什么方法
组成核酸分子的碱基,均具有一定的吸收紫外线特性,最大吸收值在波长为250~270nm之间.核酸的最大吸收波长是260nm,这个物理特性为测定核酸溶液浓度提供了基础.在波长260nm紫外线下,1OD值的光密度相当于双链DNA浓度为50μg/ml;单链DNA或RNA为20μg/ml.可以次来计算核酸样品
DNA结合蛋白测定实验
本实验主要用于检测粗制提取物中序列特异性的DNA结合蛋白。实验方法原理本分析方法是一种简单、快速和极为灵敏的用于检测粗制提取物中序列特异性的DNA结合蛋白的方法。在电泳时，与末端标记的DNA片段特异结合的蛋白质阻滞了片段的迁移，因而产生对应于蛋白-DNA复合物的清晰电泳条带。实验材料质粒DNA试剂、
DNA结合蛋白测定实验
实验方法原理 本分析方法是一种简单、快速和极为灵敏的用于检测粗制提取物中序列特异性的DNA结合蛋白的方法。在电泳时，与末端标记的DNA片段特异结合的蛋白质阻滞了片段的迁移，因而产生对应于蛋白-DNA复合物的清晰电泳条带。
DNA结合蛋白测定实验
实验材料 质粒DNA试剂、试剂盒 dNTPDNA聚合酶Klenow酶TETAE溴化乙锭TEMED过硫酸铵BSA仪器、耗材 培养箱离心管实验步骤 1. 用一种或多种限制性内切酶在100 μl 体积中消化10 μg 质粒人，产生25~100 bp 的含有结合位点的DNA片段，并至少有一端是5’突出的
测定用乙醇固定的－DNA－的含量
测定DNA含量可以用于：（1）进行基因片段连接实验。（2）进行转化转染之前的质粒浓度测定。实验方法原理DNA和RNA在260nm处有一很高的吸收峰，利用这个原理我们测其OD260，再推算出其浓度。实验材料细胞样品试剂、试剂盒PBS缓冲液70%乙醇PI液仪器、耗材离心机恒温箱筛网实验步骤一、培养细胞的
测定DNA含量可以用什么方法
外分光光度计 OD260/280比值，如果浓度够大的话可以适当稀释，是OD260在0.1到1之间最好。OD260值为1时，双链DNA一般为50ng/ul.单链DNA一般为40ng/ul，需要具体测的话还是用荧光定量DNA检测试剂盒，用多功能酶标仪检测。还有一种就是跑电泳，根据已知浓度条带的亮度对比你
测定用乙醇固定的－DNA－的含量
实验方法原理 DNA和RNA在260nm处有一很高的吸收峰，利用这个原理我们测其OD260，再推算出其浓度。 实验材料 细胞样品
DNA核酸浓度的测定实验
DNA核酸浓度的定量实验可以用于（1）对纯化的PCR产物进行浓度测定；（2）对纯化的酶切产物进行浓度测定；（3）对提取的质粒进行浓度测定。实验方法原理寡核苷酸，单链、双链DNA，以及RNA可以定量溶于缓冲液，构成核酸的嘌呤碱和嘧啶碱具有共轭双键，使核苷核和核酸在紫外线光具有特征性的吸收光谱，最大吸收
DNA的Tm值测定实验
紫外分光光度法 实验方法原理 当DNA 的稀盐溶液加热到80～100 ℃ 时, 双螺旋结构即发生解体, 两条链分开, 形成无规线团。一系列物化性质也发生
DNA核酸浓度的测定实验
实验方法原理 构成核酸的嘌呤碱和嘧啶碱具有共轭双键，使核苷核和核酸在紫外线光具有特征性的吸收光谱，最大吸收峰为260nm。窄光带紫外分光光度计，长260nm．，比色杯光径1cm，1个吸光度值（1A）相当于50ug/ml双螺DNA，40ug/m1单螺旋DNA或RNA），20ug/ml寡核苷酸实验材料
DNA的Tm值测定实验
实验方法原理 当DNA 的稀盐溶液加热到80～100 ℃ 时, 双螺旋结构即发生解体, 两条链分开, 形成无规线团。一系列物化性质也发生改变: 260 nm 区紫外吸收值增高(增色效应) , 粘度降低, 浮力密度降低等。DNA 的变性的特点是爆发式的, 变性作用发生在一个很窄的范围。通常把D
用检测和驱动－DNA－探针进行差异杂交实验
试剂、试剂盒 洗涤缓冲液SDSSSCBlocking 溶液经过剪切的鲑鱼精 DNA探针仪器、耗材 沸水浴杂交炉实验步骤 一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂高严格性洗涤缓冲液（0.2XSSC，5 g/LSDS），预热到 68°C(可选，见第 9 步）低严格性洗涤缓冲液（2XSSC，5 g/LSDS)，预
用检测和驱动－DNA－探针进行差异杂交实验
试剂、试剂盒 洗涤缓冲液 SDS SSC Blocking 溶液 经过剪切的鲑鱼精 DNA探针
用检测和驱动－DNA－探针进行差异杂交实验
下面 4 个探针用于差异筛选杂交。1. 检测者特异性消减探针（正向消减探针）。2. 驱动者特异性消减探针（反向消减探针）。3. 从检测者 mRNA(或检測者基因组 DNA) 直接合成的 cDNA 探针。4. 从驱动者 mRNA(或驱动者基因组 DNA) 直接合成的 cDNA 探针。本实验来源于 PC
用－PCR－控制基因组－DNA－文库的质量实验
在该方案中，用限制性内切酶的混合物处理人类基因组 DNA(内切酶混合物的识别位点为 4bp)，产生大概 50〜500bp 的片段。最终使用这一类型的表达文库，是通过利用表型的和生化的筛选方法，分离编码功能多肽或蛋白片段的基因片段。用KlenowDNA 聚合酶处理后，基因组 DNA 片段成为平末端，然
用－PCR－控制基因组－DNA－文库的质量实验
试剂、试剂盒 ddH20 Vent 缓冲液 Vent DNA 聚合酶 dNTP 质粒 DNA PCR 引物
用－PCR－控制基因组－DNA－文库的质量实验
试剂、试剂盒 ddH20Vent 缓冲液Vent DNA 聚合酶 dNTP质粒 DNAPCR 引物仪器、耗材 琼脂糖凝胶电泳所需的试剂和设备热循环仪实验步骤 一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂ddH202. 酶和酶缓冲液10X Vent 缓冲液Vent DNA 聚合酶3. 核酸和寡核苷酸dNTP，各
流式细胞仪技术
测量群体中单个细胞经适当染色后其成分所发出的散射光和荧光，经染色的细胞在悬液中以单行流过高强度光源的焦点，当每个细胞经过焦点时，发出一束散射光/或荧光,经过过滤及光镜系统收集到达一个光电检测器，光检测器把散射光定量转化成电信号，经数字转换器进行数字化后而成整数，以调出显示和进行分析。一、样品的制备细
用大片段基因组－DNA－克隆直接筛选－cDNA实验
试剂、试剂盒 扩增缓冲液 DNA 聚合酶 DNaseI 限制性内切核酸酶 ATP 链霉亲和素-磁珠结合缓冲液 T4DNA 连接酶
用有机溶剂抽提法从DNA中除去溴化乙锭实验
实验方法原理 欲从经 CsCl 梯度纯化的 DNA 中去除溴化乙锭，常用有机溶剂反复抽提的方法。随后可用透析或沉淀的方法去除 CsCl。实验材料 DNA 样品试剂、试剂盒 乙醇水饱和的异戊醇或 n-丁醇酚TE仪器、耗材 透析管和夹离心机和转头实验步骤 一、材料1. 缓冲液和溶液乙醇，水饱和的异戊醇或
用离子交换层析法从DNA中去除溴化乙锭实验
实验方法原理 经过氯化铯梯度离心所纯化的 DNA 中的溴化乙锭可以通过离子交换层析法去除，随后则用乙醇沉淀去除氯化铯。 实验材料 DNA 样品
用大片段基因组－DNA－克隆直接筛选－cDNA实验
本方案使用克隆在 BAC 载体上的一段 500kb 的人基因组 DNA 连续序列，直接筛选与其互补的的 cDNA。但本方法也可适用于任意大小的基因组靶 DNA。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）上册，作者：黄培堂。试剂、试剂盒扩增缓冲液DNA 聚合酶 DNaseI限制性内切核酸酶ATP链霉亲和素
用－Taq－DNA－聚合酶进行双脱氧测序反应实验
试剂、试剂盒 去离子蒸馏水ddNTPdNTP甲酰胺加样缓冲液。酶和缓冲液。Taq 酶或类似的热稳定 DNA 聚合酶Taq 酶稀释缓冲液核酸和寡核苷酸寡核苷酸引物模板 DNA(100ug ul) 溶于 TE 中放射性化合物5'32P 标记的寡核苷酸引物仪器、耗材 微量离心管（0.5 ml) 或
用大片段基因组－DNA－克隆直接筛选－cDNA实验
试剂、试剂盒 扩增缓冲液DNA 聚合酶 DNaseI限制性内切核酸酶ATP链霉亲和素-磁珠结合缓冲液T4DNA 连接酶热稳定 DNA 聚合酶琼脂糖凝胶BACDNA缺口平移缓冲液杂交液平末端 cDNACot1 基因组 DNA胞浆 poly(A)+RNAdNTP 溶液DNA 分子质量标志物寡
用原子力显微镜表征DNA纯化效果的实验
实验概要运用原子力显微镜(AFM)表征3种DNA纯化试剂盒对DNA的纯化效果。方法：PCR扩增K562/A02细胞mdr1基因DNA，分别以3种不同的DNA纯化试剂盒对PCR产物进行纯化后，按终浓度为10 ng・μl-1固定在用1 ng・μl-1 L型多聚赖氨酸预先处理过的新剥离的云母片上，用AFM
用离子交换层析法从DNA中去除溴化乙锭实验
经过氯化铯梯度离心所纯化的 DNA 中的溴化乙锭可以通过离子交换层析法去除，随后则用乙醇沉淀去除氯化铯。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理经过氯化铯梯度离心所纯化的 DNA 中的溴化乙锭可以通过离子交换层析法去除，随后则用乙醇沉淀去除氯化铯。实验材料DNA 样品试剂、试剂盒
用有机溶剂抽提法从DNA中除去溴化乙锭实验
实验方法原理 欲从经 CsCl 梯度纯化的 DNA 中去除溴化乙锭，常用有机溶剂反复抽提的方法。随后可用透析或沉淀的方法去除 CsCl。 实验材料 DNA