细胞表面抗原检测实验_免疫荧光抗体法

细胞表面有糖蛋白,这种蛋白质上有多糖,起到识别作用,当无法识别的糖蛋白进入血液就会引起身体的免疫反应引来严重后果,直接输血才会引起,如果喝就不会,因为胃都将其降解成氨基酸了,进入身体合成自身蛋白质就不会有事故。实验方法原理用人结肠癌细胞为免疫原,免疫小鼠,制得鼠抗人结肠癌细胞表面抗原(Ag)的单克隆抗体 IgG(第一抗体),二者可以发生特异性的抗原抗体反应,形成抗原抗体复合物,再加入市售(也可自制)的荧光标记的羊抗鼠IgG抗体(第二抗体),可以与复合物进一步发生抗原抗体反应(二次抗体反应),这样就可以在光显微镜下观察到这种抗原在结肠癌细胞表面的存在。实验材料HeLa细胞试剂、试剂盒1640培养液小牛血清甲醛固定液PBS液体石蜡仪器、耗材盖片载片培养瓶培养皿滤纸镊子吸管倒置显微镜荧光显微镜微量加样器实验步骤1. 将培养瓶中的结肠癌细胞接种到装有盖片的培养皿中,培养2~3天。2. 在倒置镜下观察到盖片上的细胞......阅读全文

免疫荧光标记技术的方法分类及技术特点

根据抗原抗体反应的结合步聚的不同,免疫荧光标记技术可分为直接法、间接法、补体法和双重免疫荧光法四种。直接法是将荧光素标记的特异性抗体直接与相应的抗原结合,以检查出相应的抗原成分。间接法是先用特异性抗体与相应的抗原结合,洗去未结合的抗体,再用荧光素标记的抗特异性抗体(间接荧光抗体)与特异性抗体相结合,

抗血细胞表面抗原的抗体能引起哪些自身免疫性疾病?

  1.自身免疫性溶血性贫血(AIHA)  AIHA的特点是:  ①体内出现抗红细胞自身抗体,抗人球蛋白试验阳性;  ②红细胞寿命缩短。  红细胞抗体根据其性质可分为三类:  ①冷凝集素:为IgG,在低温时能与红细胞结合,使其凝集。常引起冷凝集素综合征(CAS);  ②温抗体:为IgG,37℃可与红

抗血细胞表面抗原的抗体能引起哪些自身免疫性疾病?

  1.自身免疫性溶血性贫血(AIHA)  AIHA的特点是:  ①体内出现抗红细胞自身抗体,抗人球蛋白试验阳性;  ②红细胞寿命缩短。  红细胞抗体根据其性质可分为三类:  ①冷凝集素:为IgG,在低温时能与红细胞结合,使其凝集。常引起冷凝集素综合征(CAS);  ②温抗体:为IgG,37℃可与红

抗血细胞表面抗原的抗体能引起哪些自身免疫性疾病?

  1.自身免疫性溶血性贫血(AIHA)  AIHA的特点是:  ①体内出现抗红细胞自身抗体,抗人球蛋白试验阳性;  ②红细胞寿命缩短。  红细胞抗体根据其性质可分为三类:  ①冷凝集素:为IgG,在低温时能与红细胞结合,使其凝集。常引起冷凝集素综合征(CAS);  ②温抗体:为IgG,37℃可与红

系统性风湿病的临床免疫学试验进展

自身抗体(autoantibodies)是指直接抗细胞内、细胞表面和细胞外成份的抗体。(一)细胞内抗原包括核成份和细胞浆成份,常用于免疫风湿病学临床试验诊断的相应抗体有①抗核抗体(antibodies to nuclear antigens, ANAs);②抗细胞浆抗体(antibodies t

细胞表面抗原流式细胞检测的一般步骤(供参考)

  1.实验材料:   检测管或96微孔板 一抗(FITC标记),以表记Anti-CD19/FITC抗体为例   缓冲液:PBS(PH7.4)   设备:移液器、离心机、冰盒或冰箱、流式细胞仪   2. 注意事项:   标记抗体在使用之前用PBS溶解并振匀,并确认没有沉淀,迅速离心几

细胞表面抗原流式细胞检测的一般步骤(供参考)

1.实验材料:检测管或96微孔板 一抗(FITC标记),以表记Anti-CD19/FITC抗体为例缓冲液:PBS(PH7.4)设备:移液器、离心机、冰盒或冰箱、流式细胞仪2. 注意事项:标记抗体在使用之前用PBS溶解并振匀,并确认没有沉淀,迅速离心几秒,使所有的液体都集中到管底,标记抗体应避光4℃保

抗胰岛细胞抗体检测

胰岛细胞由分泌胰岛素的β细胞、分泌胰高血糖素的α细胞和分泌生长激素释放因子的δ细胞组成。抗胰岛细胞抗体(insular cellular antibody,ICA)于1974年由Bottaazzo等首次报道,主要靶抗原为胞质中谷氨酸脱羧酶(glutamate decarboxylase,GAD)和酪

细胞表面抗原的分类介绍

  红细胞表面抗原有两种:A和B,同时也存在A和B的表面抗体,这种抗原的存在的种类决定着血型,有A型抗原的人就不存在A型的抗体,同理有B型抗原的人就不存在B型的抗体,比如A型血的人就存在A抗原而没有A抗体,当打入B型血的时候,B抗原造成免疫反应生成B抗体从而发生特异性结合,使得血液凝固成块堵塞血管,

简述细胞表面抗原的应用

  虽然要求同型输血,但是不同血型之间也是可以输血的,O型血由于既没有A抗原又没有B抗原,所以可以给所有的人输血,因为什么抗原都没有就不会引起免疫反应了,所以O型血被称之为万能输血者,AB型血由于什么抗原都有,那么两种抗原的任何一种从外面输入都不会引起免疫反应,因为两种抗原身体都识别,AB型血称之为

单层生长细胞的免疫荧光标记实验

实验材料 单层细胞试剂、试剂盒 PBS多聚甲醛甲醇抗体仪器、耗材 离心机水浴锅培养箱实验步骤 1.  置生长成片的单层细胞于冰上冷却,吸去培养液并以4℃PBS洗涤。吸去PBS。2.  如欲研究细胞表面抗原,则以2%PFA于冰上面定30 min。如为细胞质抗原,则可用含0.1% Triton X-10

单层生长细胞的免疫荧光标记实验

免疫荧光标记是微生物学、免疫学、病理学及免疫组织化学中常用的一种免疫学实验方法,在临床上得到了广泛的应用。实验方法原理免疫荧光标记技术(immunofluorescence technique)是将已知的抗体或抗原分子标记上荧光素,当与其相对应的抗原或抗体起反应时,在形成的复合物上就带有一定量的荧光

免疫表型的分析程序_细胞表面抗原检测的染色方案

实验材料单克隆抗体抗凝血试剂、试剂盒溶血素PBS实验步骤1. 取 20 单克隆抗体与 100 ul 抗凝血,共同混合置室温 20 min。2. 加溶血素 1500 ul,置室温避光 15 min,2500 r/min 离心 5 min。3. 弃上清,加 1500 ul PBS,混匀,2500 r/m

大鼠Ⅱ型肺泡细胞表面抗原(KL6)ELISA检测法

大鼠Ⅱ型肺泡细胞表面抗原(KL-6)ELISA试剂盒 (用于血清、血浆、细胞培养上清液和其它生物体液内) 原理本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA法。用抗大鼠 KL-6 单抗包被于酶标板上,标准品和样品中的 KL-6与单抗结合,加入生物素化的抗大鼠KL-6,形成免疫复合物连接在板上,辣根过氧化物

免疫荧光实验流程

免疫荧光实验步骤实验流程:(1) 细胞准备。对单层生长细胞,在传代培养时,将细胞接种到预先放置有处理过的盖玻片的培养皿中,待细胞接近长成单层后取出盖玻片,PBS洗两次;对悬浮生长细胞,取对数生长细胞,用PBS离心洗涤(1000rpm,5min)2次,用细胞离心甩片机制备细胞片或直接制备细胞涂

病毒免疫荧光实验

实验方法原理 实验材料 待检测病毒试剂、试剂盒 丙酮0. 01mol L PBS95%乙醇二甲苯仪器、耗材 玻片实验步骤 1. 培养细胞小玻片标本的制备 根据所检测病毒种类,选择敏感细胞进行培养,如乙型肝炎病毒用乳地鼠肾细胞 (BHK21 细胞)培养,森林脑炎病毒用绿猴肾细胞 (Vero 细胞)培养

免疫荧光染色的一抗,二抗分别用什么稀释

PBS稀释。当然最好用封闭液直接稀释,再加一点TritonX100效果好。培养液成分太多了。而且固定之后细胞都死了,用培养液没什么意义,只要保证其pH等条件适合就好了。抗体说明书上都会有推荐的稀释倍数。上网查一下,有很多protocol。一般一比几百到一万都有,依抗体而定。可以4度过夜,这样染色效果

免疫荧光染色的一抗,二抗分别用什么稀释

PBS稀释。当然最好用封闭液直接稀释,再加一点TritonX100效果好。培养液成分太多了。而且固定之后细胞都死了,用培养液没什么意义,只要保证其pH等条件适合就好了。抗体说明书上都会有推荐的稀释倍数。上网查一下,有很多protocol。一般一比几百到一万都有,依抗体而定。可以4度过夜,这样染色效果

免疫荧光染色的一抗,二抗分别用什么稀释

PBS稀释。当然最好用封闭液直接稀释,再加一点TritonX100效果好。培养液成分太多了。而且固定之后细胞都死了,用培养液没什么意义,只要保证其pH等条件适合就好了。抗体说明书上都会有推荐的稀释倍数。上网查一下,有很多protocol。一般一比几百到一万都有,依抗体而定。可以4度过夜,这样染色效果

免疫荧光的一抗核二抗分别用什么稀释

PBS稀释。当然最好用封闭液直接稀释,再加一点TritonX100效果好。培养液成分太多了。而且固定之后细胞都死了,用培养液没什么意义,只要保证其pH等条件适合就好了。抗体说明书上都会有推荐的稀释倍数。上网查一下,有很多protocol。一般一比几百到一万都有,依抗体而定。可以4度过夜,这样染色效果

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免疫荧光染色的一抗,二抗分别用什么稀释

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免疫荧光染色的一抗,二抗分别用什么稀释

PBS稀释。当然最好用封闭液直接稀释,再加一点TritonX100效果好。培养液成分太多了。而且固定之后细胞都死了,用培养液没什么意义,只要保证其pH等条件适合就好了。抗体说明书上都会有推荐的稀释倍数。上网查一下,有很多protocol。一般一比几百到一万都有,依抗体而定。可以4度过夜,这样染色效果

细胞免疫荧光步骤

细胞免疫荧光可应用于:可以观察组织或细胞内抗原物质的定位,以及一些特殊信号分子蛋白的出核/入核的定位变化。实验方法原理在进行细胞免疫荧光过程中,需要用到细胞爬片,通过将爬片浸在细胞培养基内,细胞在爬片上生长,进而进行细胞的免疫荧光。实验材料细胞样品试剂、试剂盒多聚甲醛70%甲醇丙酮PBSTriton

细胞免疫荧光步骤

实验材料 细胞样品试剂、试剂盒 多聚甲醛70%甲醇丙酮PBSTriton BSADAPI染液DABCOTris甘油仪器、耗材 玻片实验步骤 细胞爬片免疫荧光实验步骤第一天:1. 在培养板中将已爬好细胞的玻片用PBS浸洗3次,每次3min;2. 用4%的多聚甲醛固定爬片15min, PBS浸洗玻片3次

细胞免疫荧光染色

实验概要细胞免疫荧光染色实验原理利用抗原抗体反应,鉴定细胞是否表达某种蛋白。细胞经固定后,用特异性抗体(一抗)识别目的蛋白,再用一抗的抗体(二抗)识别一抗,二抗一般耦联荧光基团或化学反应基团,通过荧光或化学发光显示目的蛋白。主要试剂防淬灭剂、DPBS、指甲油、4% PFA、10 μg/mL PI、1

抗核抗体与间接免疫荧光技术

在自身免疫性疾病中,人体组织细胞细胞核的核膜、核内的染色质、非组蛋白,以及核糖核酸(RNA)和相关的蛋白质等都可成为自身免疫反应攻击的靶子,产生抗核抗体(ANA)。其中有不少抗体因对疾病的诊断有高度的特异性,已成为诊断某一类疾病的血清标志性抗体,如抗双链DNA抗体、抗Sm抗体之于SLE,抗SSB抗体

细胞表面标记的检测技术

碱性磷酸酶-抗碱性磷酸酶(APAAP)免疫组化染色技术检测淋巴细胞表面标记 活细胞免疫荧光技术-流式细胞仪标本的制备             实验方法原理 APAAP(Al

细胞表面标记的检测技术

碱性磷酸酶-抗碱性磷酸酶(APAAP)免疫组化染色技术检测淋巴细胞表面标记 活细胞免疫荧光技术-流式细胞仪标本的制备             实验方法原理 APAAP(Al

酶标抗体法—转基因检测的介绍

  检测转基因物质的双抗体夹心ELISA具备多克隆抗体费用较低。单克隆抗体亲和力高的特点,使得后续研究开发的试剂盒检测成本低廉,灵敏可靠,而且可以稳定、方便地提供标准化试剂,便于实现工业化生产。双抗体夹心ELISA检测方法的研究和建立,为制备免疫胶体金试纸条提供了便利,为建立转基因动物的现场、快速查