动物细胞培养——无菌技术II：准备培养基
实验方法原理目的操作已灭菌溶液时保持无菌状态。训练目标无菌操作：练习灵巧和无菌的操作。监督：连续监督。背景信息无菌技术的目标（见 6.1 节）；无菌环境的要素（见 6.2 节）；无菌操作（见 6.3 节）．在层流超净台中工作（见 6.4 节）；可见的微生物污染物（见 19.3.1 节）.示范材料和操作：示范如何擦拭工作面和将物品拿人超净台。解释层流超净台和空气微粒过滤器的工作原理。给实习生示范如何打开和盖上培养瓶和试剂瓶的盖子，以及如何在工作面上摆放盖子。示范如何握持吸管，将其插人移液器，如何使它不碰到任何未灭菌的东西以免被污染，如何在无菌条件下转移液体，如何在移液时倾斜试剂瓶和培养瓶。强调清理和擦拭超净台并检夜卜作面下部．练习概要向 I X 培养基储液中加人必需的添加剂和补充成分。标准方案用 I X 储存液制备培养基（见方案11.7）。标准方案的实脸补充1）向2个已灭菌试剂瓶中分别加人soml培养基．2）将·个试剂瓶放置在4℃......阅读全文
动物细胞培养——无菌技术II：准备培养基
实验方法原理目的操作已灭菌溶液时保持无菌状态。训练目标无菌操作：练习灵巧和无菌的操作。监督：连续监督。背景信息无菌技术的目标（见 6.1 节）；无菌环境的要素（见 6.2 节）；无菌操作（见 6.3 节）．在层流超净台中工作（见 6.4 节）；可见的微生物污染物（见 19.3.1 节）.示范材料和操
动物细胞培养——无菌技术I：吸取与移液
实验方法原理目的快速准确地将液体从一个容器转移到另一个容器。训练目标熟练掌握吸管的使用，掌握必要的速度、准确性和精度。监督：开始时连续监督，然后让实习生重复练习并记录准确度。时间：30 min~ l h。背景信息已灭菌液体的操作（见 5.2.7 节）；试剂瓶和培养瓶的操作（见 6.3.4 节）；移液
动物细胞培养——无菌技术I：吸取与移液
实验方法原理目的快速准确地将液体从一个容器转移到另一个容器。训练目标熟练掌握吸管的使用，掌握必要的速度、准确性和精度。监督：开始时连续监督，然后让实习生重复练习并记录准确度。时间：30 min~ l h。背景信息已灭菌液体的操作（见 5.2.7 节）；试剂瓶和培养瓶的操作（见 6.3.4 节）；移液
动物细胞培养
动物细胞培养 基本练习 2.2 无菌技术I：吸取与移液 练习2 细胞培养介绍 2.2 无菌技术I：吸取与移液 练习3无菌技术II：准备培养基 练习4：单层细胞的换液 练习5：玻璃器皿的清洗和灭菌 练习
哺乳类无菌动物技术
实验概要本实验介绍了哺乳类无菌动物的制备流程。无菌动物在自然界并不存，必须用人为的方法养育而成。一般将临产前的健康动物用麻醉药品或拉断颈椎处死后，立即浸泡在37℃灭菌液中，送进无菌室（或无菌隔离器），按无菌手术进行剖腹，切除带胎子宫（子宫内首先应无菌），将其浸入消毒液里并立即输送到另一只隔离器中，切
细胞培养基本技术
实验概要无菌操作基本技术 1. 实验进行前，无菌室及无菌操作台(laminar flow) 以紫外灯照射30-60 分钟灭菌，以70 % ethanol 擦拭无菌操作抬面，并开启无菌操作台风扇运转10 分钟后，才开始实验操作。每次操作只处理一株细胞株，且即使培养基相同亦不共享培养基，以避免失
细胞培养实验的无菌化技术
The use of aseptic technique is essential for avoiding the production of infection whilst undertaking tissue culture activities.Many activities take p
细胞培养无菌操作技术规范
打开无菌工作台及净化室的紫外灯，消毒半小时以上。2.进入净化室前先关闭紫外灯，打开超净台风机，等待30min以上，以排尽臭氧。3.穿好隔离衣，戴好口罩，帽子。 4.风淋2分钟。 5.0.1%过氧乙酸水泡手，擦干。 6. 点燃酒精灯；超净台内应避免放入过多的物品；使用的吸管，滴管，试管，培
动物细胞培养——水的准备与灭菌
实验方法原理目的纯水，火菌水的常规供应．训练目标在无菌区外正确地进行准备操作。了解水的纯化和制备过程的必要知识。监份：间断的。时间：30min.背景信息超纯水（UPW）的制备和灭菌（见 11.4节．图 5.17，图11.10）。示范材料和操作：准备1几作的监督人要讲解水纯化设备的原理和操作，并示范操
实验技术：细胞培养基本技术
细胞培养 一、操作规程： 1.实验前,无菌室及无菌操作台用紫外灯照射30-60分钟灭菌,用70％酒精擦拭无菌操作台面,并开启无菌操作台风机运转10分钟后,才可开始实验操作.每次操作只处理一株细胞,以免造成细胞交叉污染.实验结束后,将实验物品带出工作台。如需要继续进行下一个实验,则用
实验技术：细胞培养基本技术
一、操作规程：1.实验前,无菌室及无菌操作台用紫外灯照射30-60分钟灭菌,用70％酒精擦拭无菌操作台面,并开启无菌操作台风机运转10分钟后,才可开始实验操作.每次操作只处理一株细胞,以免造成细胞交叉污染.实验结束后,将实验物品带出工作台。如需要继续进行下一个实验,则用70％酒精擦拭无菌操作台面,再
动物细胞培养基的成分有哪些
动物细胞培养基有平衡盐溶液、天然培养基、合成培养基、无血清培养液等四种。 平衡盐溶液： 目前常用的平衡盐溶液有乳酸钠和复方氯化钠溶液（1.86%乳酸钠溶液和复方氯化钠溶液之比为1:2）与碳酸氢钠和等渗盐水溶液（1.25%碳酸氢钠溶液和等渗盐水之比为1:2）两种。 天然培养基： 天然培养基
细胞培养基本技术概述（二）
培养基 1. 液体培养基贮存于4 oC 冰箱，避免光照，实验进行前放在37 oC 水槽中温热。 2. 液体培养基(加血清) 存放期为六个月，期间glutamine 可能会分解，若细胞生长不佳，可以再添加适量glutamine。 3. 粉末培养基配制(以1 升为例)： 3.1. 细胞培
细胞培养基本技术概述（四）
细胞传代培养 1. 细胞生长至高密度时，即须分殖至新的培养瓶中，一般稀释比例为1:3 至1:6，依细胞种类而异。 2. 材料： 2.1. 无菌磷酸生理缓冲液(Dulbecco’s phosphate-buffered saline, Ca++/Mg++ free, D-PBS,GibcoBRL
细胞培养基本技术概述（三）
血清 1. 血清必须贮存于–20 ～ -70 oC，若存放于4 oC，请勿超过一个月。如果一次无法用完一瓶，可将40～45 ml 分装于无菌50 ml 离心管中，由于血清结冻时体积会增加约10 %，必须预留此膨胀体积之空间，否则易发生污染或容器冻裂之情形。 2. 一般厂商提供之血清为无菌，不需再
细胞培养基本技术概述（七）
冷冻细胞活化 1. 冷冻细胞之活化原则为快速解冻，以避免冰晶重新结晶而对细胞造成伤害，导致细胞之死亡。 2. 细胞活化后，约需数日，或继代一至二代，其细胞生长或特性表现才会恢复正常(例如产生单株抗体或是其它蛋白质)。 3. 材料 3.1 37 oC 恒温水槽 3.2 新鲜培养基 3.3 无菌吸管/
细胞培养基本技术概述（五）
实验用品 1. 种类︰ 1.1. 细胞培养实验用品均为无菌，除了玻璃容器与pasteur pipet 外，其它均为塑料无菌 制品。 1.2. TC 级培养盘表面均有coating 高分子物质以让细胞吸附，培养容器种类有Tflask, plates, dishes, roller bottle 等，依
细胞培养基本技术概述（一）
无菌操作基本技术 1. 实验进行前，无菌室及无菌操作台(laminar flow) 以紫外灯照射30-60 分钟灭菌，以70 %ethanol 擦拭无菌操作抬面，并开启无菌操作台风扇运转10 分钟后，才开始实验操作。每次操作只处理一株细胞株，且即使培养基相同亦不共享培养基，以避免失误混淆或
细胞培养基本技术概述（六）
抗生素 1. 细胞库之细胞培养基不加抗生素 1.1. 培养自ATCC 引进之细胞株，培养基中不加抗生素。 1.2. 培养自其它实验室引进之细胞株，制作token freeze 前培养基须添加抗生素，待token freeze 通过污染测试后，大量培养时则不加抗生素。 2. 寄送活细胞时，须将培养液充
动物细胞培养基常见问题20问
培养基是细胞培养中不可缺少的营养成分，但是最基础的培养基却给实验者带来了一系列的问题。别小看细胞培养，这里可蕴含着大学问。 1.怎样查到一个特定细胞株的相关知识和培养条件？ATCC（American Type Culture Collection）收集了绝大多数细胞的详细资料。打开ATCC网页的Ce
动物细胞培养基常见问题20问
培养基是细胞培养中不可缺少的营养成分，但是最基础的培养基却给实验者带来了一系列的问题。别小看细胞培养，这里可蕴含着大学问。 1.怎样查到一个特定细胞株的相关知识和培养条件？ ATCC（American Type Culture Collection）收集了绝大多数细胞的详细资料。
细胞培养的无菌环境
在冻存过程中保护剂的选择使用，细胞的密度，降低温度速度以及复苏时的温度，融化速度等等都对细胞活力有影响。 常用的仪器设备，则就是有无菌室，超净工作台，三重纯水蒸馏器，抽气泵，压力蒸气消毒器，电热恒温培养箱，培养器具，细胞计数板和电子细胞技术仪等等。 而对于无菌室结构一般由更衣间，缓冲间，操作间三个部
动物细胞培养基常见问题20问（二）
11.为什么有客户要求培养基中不含酚红？研究表明，酚红可以模拟固醇类激素的作用（特别是雌激素）。为避免固醇类反应，细胞培养，尤其是哺乳类细胞时，用不加酚红的培养基。由于酚红干扰检测，一些研究人员在做流式细胞检测时，不使用加酚红的培养基。12.酚红的作用是什么？酚红在培养基中被用来作为PH值指示剂：中
动物细胞培养基常见问题20问（一）
培养基是细胞培养中不可缺少的营养成分，但是最基础的培养基却给实验者带来了一系列的问题。别小看细胞培养，这里可蕴含着大学问。1.怎样查到一个特定细胞株的相关知识和培养条件？ATCC（American Type Culture Collection）收集了绝大多数细胞的详细资料。打开ATCC网页的Cel
动物细胞培养的基础培养基的介绍
细胞培养基成分复杂，包括盐类、糖类、维生素、氨基酸、代谢前体、生长因子、激素和微量元素。对这些物质的需求因细胞而有差异，这也导致大量的不同培养基配方出现。主要碳源物质通常是葡萄糖，有时也会使用半乳糖代替，这是因为半乳糖的代谢速度较慢。氨基酸（尤其是L-谷氨酰胺）和丙酮酸盐也可作为碳源。 除了营
动物细胞培养的技术应用
1、生物制品的生产(如制备单克隆抗体） 2、转基因动物的培养 3、检测有毒物质并判断其强弱 4、医学研究（生理 病理 药理） 5、器官移植培养 6、筛选抗癌药物
转化细胞培养技术中的准备工作
一、转化细胞准备工作 准备工作对开展细胞培养异常重要，推备工作中某一环节的疏忽可导致实验失败或无法进行。准备工作的内容包括器皿的清洗、干燥与消毒，培养基与其他试剂的配制、分装及灭菌，无菌室或超净台的清洁与消毒，培养箱及其他仪器的检查与调试等。 1、清洁、消毒、液体 直接接触细胞的用品要超净处理——无
简述动物细胞培养技术的应用
(1)生产病毒疫苗、单克隆抗体、干扰素等。 (2)利用动物细胞培养技术中的细胞贴壁生长和接触抑制的特点，可用烧伤病人自己的健康皮肤细胞培养出大量的自身薄层皮肤细胞，以供植皮所需。 (3)培养的动物细胞用于检测有毒物质，判断某种物质的毒性。
细胞培养的前期准备
一.常用设备 准备室的设备： 单蒸馏水蒸馏器、双蒸馏水蒸馏器、酸缸、烤箱、高压锅、储品柜（放置未消毒物品）、储品规（放置消毒过的物品）、包装台。配液室的设备：扭力天平和电子天平（称量药品）、PH计（测量培养用液PH值）、磁力搅拌器（配置溶液室搅拌溶液）。培养室的设备：液氮罐、储品柜（存放杂物）、
如何确认所配制的动物细胞培养基没有被污染
将未接种的培养基在适宜的温度下，放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生即可。动物细胞培养需要提供无菌、无毒环境，因此，除了要对培养液和培养用具进行灭菌外，通常还要在培养液中添加一定量的抗生素，以防培养过程中的污染。