支原体的检测实验_荧光染色法
实验方法原理荧光显微镜检查法，荧光染料用 Hoechst 33258，它是一种能与DNA 特异结合的荧光染料。支原体内含有DNA，能着色，是现有检测法中最方便和最有效的一种。实验材料细胞试剂、试剂盒Hanks醋酸甲醇蒸馏水仪器、耗材盖片显微镜实验步骤1. 标本盖片培养细胞汇合前从瓶中取出（如细胞已完全汇合，能影响对支原体的观察）；2. 漂洗将细胞盖片置于碟皿中，用不含酚红的Hanks液漂洗；如为细胞悬液则先离心去上清营养液后，再加入Hanks液漂洗；3. 固定用醋酸甲醇（1：3）固定10 分钟；4. 漂洗用生理盐水或去离子水漂洗，处理方法同2；5. 染色置于33258（用不含酚红的Hanks 或生理盐水配制，浓度为50 μg/ml）中染色10 分钟；6. 漂洗置于蒸馏水漂洗1～2 分钟，处理方法同2；7. 观察从蒸馏水中取出细胞盖片，令细胞面向上......阅读全文
支原体的检测实验_荧光染色法
实验方法原理荧光显微镜检查法，荧光染料用 Hoechst 33258，它是一种能与DNA 特异结合的荧光染料。支原体内含有DNA，能着色，是现有检测法中最方便和最有效的一种。实验材料细胞试剂、试剂盒Hanks醋酸甲醇蒸馏水仪器、耗材盖片显微镜实验步骤1. 标本盖片培养细胞汇合前从瓶中取出（如细胞已
细胞支原体污染的荧光检测方法：DNA萤光染色法
DNA萤光染色法 ·原理︰利用萤光染剂（bisbenzimide, Hoechst 33258）侦测支原体污染。此染剂会结合到DNA之Adenosine-Thymidine (A-T) rich区域，因为支原体之DNA中A-T含量占多数（55～80%），所以可将其染色而侦测。被支原体污染
荧光检测支原体
实验方法原理在无抗生素情况下，至少将细胞培养一周，将培养上清转移至处于对数生长早期的指示细胞中，孵育 3~5d ，将细胞固定和染色，寻找细胞核之外的荧光。实验材料来自于7天单层培养的无抗生素的细胞培养上清液或经离心后的上清液指示细胞试剂、试剂盒Hoechst 33258 染料BSS-PRD-PBSA
荧光检测支原体
实验方法原理在无抗生素情况下，至少将细胞培养一周，将培养上清转移至处于对数生长早期的指示细胞中，孵育 3~5d ，将细胞固定和染色，寻找细胞核之外的荧光。实验材料来自于7天单层培养的无抗生素的细胞培养上清液或经离心后的上清液
支原体的检测实验
相差显微镜检测法 低涨处理地衣红染色观察法 荧光染色法 电镜检测法 培养检测法 实验材料 细胞
细胞支原体污染的荧光检测方法
DNA荧光染色法：1.原理：利用荧光染剂（bisbenzimide, Hoechst 33258）侦测支原体污染。此染剂会结合到DNA之Adenosine-Thymidine (A-T) rich区域，因为支原体之DNA中A-T含量占多数（55～80%），所以可将其染色而侦测。被支原体污染之细胞经染
支原体的检测实验_培养检测法
实验方法原理这是用支原体培养基方法进行检测，培养法稍显繁锁，但比较精确。实验材料肉汤血清试剂、试剂盒细胞悬液仪器、耗材培养基实验步骤1. 肉汤制备用支原体肉汤（Sigma 产）和北京生物制品所制两种均可；用前加10%马血清；2. 培养每45 ml肉汤培养基加2.5×106 /ml细胞悬液5 ml
支原体的检测实验_电镜检测法
实验方法原理在用一般方法难以确定时，可做电镜检测。实验材料细胞试剂、试剂盒胰蛋白酶仪器、耗材吸管实验步骤1. 细胞培养 48～72 小时。2. 接近汇合前，用0.05%～0.25%胰蛋白酶消化细胞5～10 分钟。3. 用吸管轻轻吹打，制备成细胞悬液。
荧光显微镜检测支原体
实验方法原理 检测支原体有两种不同的策略：第一种方法将在下述方案中述及，利用对 DNA 染色的荧光染料 Hoechst 33258, 它对细胞核周围（在细胞表面或胞质中）的特殊物质进行染色，可显示支原体污染；第二种方法是利用 DNA 探针识别细胞提取物中的 DNA 支原体特异序列，进行支
荧光显微镜检测支原体
实验方法原理 检测支原体有两种不同的策略：第一种方法将在下述方案中述及，利用对 DNA 染色的荧光染料 Hoechst 33258, 它对细胞核周围（在细胞表面或胞质中）的特殊物质进行染色，可显示支原体污染；第二种方法是利用 DNA 探针
荧光显微镜检测支原体
实验方法原理检测支原体有两种不同的策略：第一种方法将在下述方案中述及，利用对 DNA 染色的荧光染料 Hoechst 33258, 它对细胞核周围（在细胞表面或胞质中）的特殊物质进行染色，可显示支原体污染；第二种方法是利用 DNA 探针识别细胞提取物中的 DNA 支原体特异序列，进行支原体污染的检测
荧光显微镜检测支原体
荧光显微镜检测支原体实验方法原理检测支原体有两种不同的策略：第一种方法将在下述方案中述及，利用对 DNA 染色的荧光染料 Hoechst 33258, 它对细胞核周围（在细胞表面或胞质中）的特殊物质进行染色，可显示支原体污染；第二种方法是利用 DNA 探针识别细胞提取物中的 DNA 支原体特
支原体的检测
实验材料 细胞仪器、耗材 培养瓶载物片盖片显微镜实验步骤 1. 标本制备用尖镊子从培养瓶中直接取出预先置入的支持物（长形盖片；24 小时前置入），令细胞面向上，置放在载物片上，再覆以24 mmX 36 mm的较大盖片；如不用支持物培养法，也可取少许培养液滴在载物片上，再覆以盖片法观察亦可。2.
什么是荧光染色法
用各种可以发荧光的物质来染色微生物样品,如利用荧光染色剂将人的染色体染色,可以通过染色不同,看到显微镜下染色体上的基因
支原体的检测实验_相差显微镜检测法
实验材料细胞仪器、耗材培养瓶载物片盖片显微镜实验步骤1. 标本制备用尖镊子从培养瓶中直接取出预先置入的支持物（长形盖片；24 小时前置入），令细胞面向上，置放在载物片上，再覆以24 mmX 36 mm的较大盖片；如不用支持物培养法，也可取少许培养液滴在载物片上，再覆以盖片法观察亦可。2. 观察相
支原体污染及检测
（1）支原体污染在细胞培养中最常见、不易被查觉，但支原体污染可显著影响细胞功能干扰实验结果。支原体是介于细菌和病毒之间的目前所知能独立生活的最小微生物，它无细胞壁，形态呈高度多形性，最小直径0.2um，可通过滤器。 目前通过对国内100余株/系细胞的检测，形势不容乐观。污染率达30% ~ 60% 。
支原体培养实验
实验材料 肺炎支原体试剂、试剂盒 糖酵解培养基基础培养基牛血清酵母浸液酚红醋酸铊 青霉素仪器、耗材 培养皿烧杯玻璃棒天平移液管离心机棉花拭子实验步骤 一、标本采集 支原体常侵及人和动物的粘膜表面，一般可用棉花拭子涂抹取样后放入2~3 ml支原体液体培养基的小管中，或取其分泌液，若标本是组织块，可在灭
两种支原体检测试剂盒检测原理与操作比较
在细胞培养，特别是传代细胞培养中，支原体污染率达到15-35%。支原体的侵染会引起细胞功能和基因表达的严重改变，并造成持续危害。由于支原体污染会严重影响实验结果的可靠性、重复性和一致性，对支原体的常规检测非常重要。传统的支原体检测方法很耗费时间，通常需要一天至数周，而且操作比较繁琐，准确度不高。中国
细胞培养中支原体污染的检测方法！
细胞培养中令人头疼的问题之一是支原体的污染。在人们日常生活工作环境中，支原体无处不在，它可以通过人的毛发、口腔、穿着的衣服、动物的皮毛以及日常的细胞培养的操作环境造成对细胞污染。据说有11%的细胞株均受到不同程度的支原体污染，更有统计细胞培养中支原体感染发生率达到63%，对实验结果会产生不可预期的影
细胞培养中支原体污染的检测方法
细胞培养中最令人头疼的问题之一是支原体的污染。在人们日常生活工作环境中，支原体无处不在，它可以通过人的毛发、口腔、穿着的衣服、动物的皮毛以及日常的细胞培养的操作环境造成对细胞污染。据说有11%的细胞株均受到不同程度的支原体污染，更有统计细胞培养中支原体感染发生率达到63%，对实验结果会产生不可预期的
血清质量的鉴定有哪些方面？
●理化性质：如渗透压、pH值、蛋白电泳图谱、蛋白含量、激素水平、内毒素等。蛋白含量包括血清总蛋白含量（不低于35-45g/L）、球蛋白含量（应小于20g/L)、血红蛋白含量等。其中球蛋白含量是一项非常重要的指标，血清中球蛋白主要是抗体，球蛋白含量越低血清质量越高。血红蛋白也是越低越好。 ●微生
如何看出来细胞培养液体中有支原体
1. 观察细胞的形态和生长特征:支原体污染比较严重时可出现生长减慢，有的培养基pH明显变酸，并出现细胞病变，以此可依次对支原体污染进行检测，但有些情况下支原体污染引起的病变特征与病毒感染相似，因此不能准确诊断。2. 分离培养法:大多数支原体可出现特有的典型菌落。因而可依次尽心检测，该方法准确、可靠，
如何看出来细胞培养液体中有支原体
1. 观察细胞的形态和生长特征:支原体污染比较严重时可出现生长减慢，有的培养基pH明显变酸，并出现细胞病变，以此可依次对支原体污染进行检测，但有些情况下支原体污染引起的病变特征与病毒感染相似，因此不能准确诊断。2. 分离培养法:大多数支原体可出现特有的典型菌落。因而可依次尽心检测，该方法准确、可靠，
细胞中支原体的污染检测有如下几种方法
支原体早发现于1898年，1956年Robinson等*从细胞培养物中分离出支原体，之后国内外关于支原体污染细胞的报道屡见不鲜。它广泛存在于自然界中，有100余种。现在只要是做细胞培养并发表论文，期刊就要求一定要做支原体检测。一般要一周测一次支原体。支原体检测有好几种方法。药典规定有培养法和DNA染
细胞凋亡检测实验——Annexin－V/PI双染色法
实验方法原理细胞凋亡早期改变发生在细胞膜表面，目前早期识别仍有困难。这些细胞膜表面的改变之一是磷脂酰丝氨酸（PS）从细胞膜内转移到细胞膜外，使PS暴露在细胞膜外表面。PS是一种带负电荷的磷脂，正常主要存在于细胞膜的内面，在细胞发生凋亡时细胞膜上的这种磷脂分布的不对称性被破坏而使PS暴露在细胞膜外。A
目前普遍使用的支原体检测方法有几种？
当我们在养细胞的时候，有可能会出现如下的状况：细胞生长缓慢、细胞变形、碎片增加、悬浮细胞容易成团、培养基提前变色、镜下发现有小黑点。本文威正翔禹/缔一生物为您分析目前普遍使用的支原体检测方法有几种？1、支原体的分离培养 它是支原体污染鉴定的金标准，准确，价格便宜。但支原体在分离培养的过程中，要长出
什么情况查支原体标本易被污染
一般根据支原体种类不同，采取不同的方法进行检测。目前常用的检测方法有：1. 试剂盒检测法：目前已有专门做支原体检测的试剂盒，可以用细胞滴片进行检测。2. 观察细胞的形态和生长特征：支原体污染比较严重时可出现生长减慢，有的培养基pH明显变酸，并出现细胞病变，以此可依次对支原体污染进行检测，但有些情况下
细胞培养中支原体污染的特点及检验
支原体是一种大小介于细菌和病毒之间(最小直径0．2um)并独立生活的微生物。约有1%可通过滤菌器。支原体无细胞壁形态呈高度多形性。可为圆形、丝状或梨形。支原体形态多变，在光境下不易看清内部结构。电镜下观察支原体膜为三层结构。其中心有电干密度大的密集颗粒群或丝状的中心束。支原体多吸附或散在于细胞表面和
PCR法检测支原体
PCR法是20世纪80年代中期建立起来的一种体外DNA扩增技术，其基本原理是酶促DNA合成反应，即在DNA模板、引物和脱氧核糖核酸存在下，经DNA聚合酶的作用，使DNA 链扩增延伸。该方法具有灵敏度高、特异性强、快速的特点，但其对实验环境的要求严格，实验成本较高，有时还有假阳性的现象出现。1、仪
PCR法检测支原体
PCR法是20世纪80年代中期建立起来的一种体外DNA扩增技术，其基本原理是酶促DNA合成反应，即在DNA模板、引物和脱氧核糖核酸存在下，经DNA聚合酶的作用，使DNA 链扩增延伸。该方法具有灵敏度高、特异性强、快速的特点，但其对实验环境的要求严格，实验成本较高，有时还有假阳性的现象出现。1、仪器设