采用细胞内荧光染料CFSE检测淋巴细胞的迁移和增殖
实验步骤基 本 方 案 淋 巴 细 胞 的 CFSE 标记材 料（带 V 项 目 见 附 录 1)实验动物，人外周血或者培养的淋巴细胞VPBS, pH7. 4H a n k s 平 衡 盐 溶 液（H B S S ) p H 7. 4含 5 % (V /V ) 热 灭 活 F B S 的 P B S5m m o l / L C F S E 储存液0.5 m o l / L E D T A 的 P B S 溶 液（用于培养的淋巴细胞）实验所需的抗原和有丝分裂原I Oml 塑 料 管（选用）配备荧光滤片的荧光显微镜注 ：细胞标记 C F S E 后不能马上检测，因为这时的荧光强度极髙。细胞摄入的大部分 C F S E 尚不稳定，在随后的几天内会逐渐丢失。la. 细胞数较多时：用 附 录 2 H 、单 元 2. 1 和 单 元 8. 1 中介绍的方法制备淋巴细胞，人P B M C 用 PBS (无血清）混悬至 5 0 X 106 个细......阅读全文
ELISPOT方－法－检－测－分－泌－细－胞－因－子－的－细－胞
实验步骤基本方案材 料包被缓冲液洗液：含 0.25% (v/v) Tween 20 的 PBS 溶液阻断缓冲液：含 5 % (m/V) BSA 或 FCS 的 PBS 溶液VRPMMO 完全培养基（或其他适宜培养基）分泌细胞因子的细胞（小鼠或人的）丝裂原，抗原或其他促细胞因子分泌的刺激物带有标记物的
细－胞－毒－性－T－淋－巴－细－胞－的－诱－导－及－检－测
实验步骤基 本 方 案 1 从 C TL 前体中诱导细胞毒性注意：反应细胞应根据抗原的种类选择是否需要进行体内致敏。材 料反应细胞来源：未致敏的或者体内致敏的小鼠脾脏细胞（见辅助方案 1 和 2致敏培养基刺激细胞来源：未修饰或半抗原修饰的小鼠脾脏细胞（见辅助方案 3)R P M I -1 0 完全培
流－式－细－胞－仪－检－测－全－血－的－人－淋－巴－细－胞
实验步骤基本方案材 料（打 V 项 目 见 附 录 1)全血，通 常 用 E D T A 抗凝P B S ，有 或 无 0.1% (m /V ) 叠氮钠，过滤除菌单 克 隆 抗 体（标记的，未标记的或生物素化的），通过滴定确定最佳工作浓度间 标 二 抗（仅用于未标记的一抗）F T T C 标记的链霉
B－细－胞－分－泌－抗－体－的－检－测
实验步骤基 本 方案材 料外周 血 单 个 核 细 胞（P B M C ; 单 元 8.1)RPMI- 5 和 RPMI-IO 完全培养基P W M 溶液9 6 孔 平 底 培 养 板（Costar)1 . 计 数 PBMC (附录 3A ) ， 用 RPMI-5 完全培养基调整浓度至 4 X 10
BrdU－检－测－丁－细－胞－和－B－细胞增殖
实验步骤基本方案材 料实验动物0.8m g / m l B r d U (Sigma) 水 溶 液（口 服用）或 4m g / m l B r d U P B S 溶 液（注射用)P B S ， p H 7. 40.15mo l / L 冰冷的 NaCl冰 冷 的 9 5 % 乙醇多聚甲醛固定液D
巨－噬－细－胞－一－氧－化－氮－的－检－测
实验步骤基本方案材料展开
小－鼠－巨－噬－细－胞－的－表－型－检－测
实验步骤基 本 方 案 直 标 法 检 测 小 鼠 巨 噬 细 胞 的 表 型材料Sorvall RT 6000B 离心机I . 准 备 4 只 12m m X 75m m 试管，将试管编号为 1〜4。每 管 中 加 入 2 X IO7个细胞/ml细胞悬液 50ul。2.每管加入 3 mg/ml 阻
B－细－胞－功－能－的－增－殖－检－测－方－法
实验步骤基 本 方 案 抗 I g M 与 L P S 刺激的 B 细胞增殖材 料（带 V 项 目 见 附 录 1)纯化的静息 B 细 胞（单 元 2. 5)，采 用 Percoll 梯度离心制备V D M E M -10 完全培养基山羊抗 IgM (JacksonImmunoresearch) 或
PCR－检－测－细－胞－因－子－m－R－N－A－的表达
实验步骤基 本 方 案 定 量 IL -2 mRNA表达水平材 料内参照：转 录 质 粒 载 体（含有临床生物检测标本相关的c D N A )胍盐溶液50 U/ul RNasin5 X 反转录酶缓冲液0.5m g / m l olig (d T )16l m g /m l 乙酰化的B S A4d N
巨－噬－细－胞－抗－肿－瘤－活－性－的－检－测
实验步骤基本方案 [111In] 释放法检测巨噬细胞对肿瘤细胞的杀伤作用材 料辅助方案 [111In ] 标记肿瘤靶细胞材 料展开
NK/L－A－K－细－胞－杀－伤－活－性－的－检－测
实验步骤基 本 方案 51C r 释 放 法检 测 NK/LA K 细胞杀伤活性材 料展
蛋白质凝胶染色法实验3
糖蛋白的检测1. 通用糖蛋白检测糖 基 化 是 真 核 细 胞 中 最 常 见 的 蛋 白 质 翻 译 后 修 饰 。寡 糖 通 常 连 接 于 天 冬 酰 胺 侧 链(iV-连 接 糖 基 化 ) 或 丝 氨 酸 和 苏 氨 酸 羟 基 侧 链 (〇 连 接 糖 基 化）。凝 胶 中 蛋 白 质
P－C－R－检－测－小－鼠－T－细－胞－受－体－表－达
实验步骤 基本方案 I P C R 分析小鼠 T C R 基因表达材 料正常小鼠的组织匀浆或者是 H B S S 制备的单个细胞悬液（IO4〜IO7) (附 录 1)无菌水展开
蛋白质凝胶染色法实验（五）
磷 蛋 白 的 检 测作为基本的细胞信号机制, 指定氨基酸残基的可逆磷酸化作用的重要性已无需争辩。当前磷蛋白染料具有受ZL保护的构型，即磷酸基结合部分共价连接于荧光团。检测的方式是选择性结合磷酸化的氨基酸，但是没有荧光增强作用。从某种程度上讲, 许多可溶的荧光复合物都可作为总蛋白质染色剂
Western－Blot的过程与优化，着重于化学发光检测
实验步骤一、蛋白质印迹法蛋白质印迹 (Western Blotting) 法是在混合的复合物中鉴定和定量特定蛋白质的一种有效且常用的方法 (Towbin et al. ,1979)。这一技术对固定在硝酸纤维素膜或聚偏二氟乙烯 (PVDP) 膜上的蛋白质样本进行非直接的检测。在常规的蛋白质印迹中，蛋白
采用细胞内荧光染料CFSE检测淋巴细胞的迁移和增殖
实验步骤基 本 方 案 淋 巴 细 胞 的 CFSE 标记材 料（带 V 项 目 见 附 录 1)实验动物，人外周血或者培养的淋巴细胞VPBS, pH7. 4H a n k s 平 衡 盐 溶 液（H B S S ) p H 7. 4含 5 % (V /V ) 热 灭 活 F B S 的 P B S
采用细胞内荧光染料CFSE检测淋巴细胞的迁移和增殖
基 本 方 案 淋 巴 细 胞 的 CFSE 标记材 料（带 V 项 目 见 附 录 1)实验动物，人外周血或者培养的淋巴细胞VPBS, pH7. 4H a n k s 平 衡 盐 溶 液（H B S S ) p H 7. 4含 5 % (V /V ) 热 灭 活 F B S 的 P B S5m m
Western－Blot的过程与优化，着重于化学发光检测（一）
一、蛋白质印迹法蛋白质印迹 (Western Blotting) 法是在混合的复合物中鉴定和定量特定蛋白质的一种有效且常用的方法 (Towbin et al. ,1979)。这一技术对固定在硝酸纤维素膜或聚偏二氟乙烯 (PVDP) 膜上的蛋白质样本进行非直接的检测。在常规的蛋白质印迹中，
巨－噬－细－胞－吞－噬－功－能－和－杀－伤－功－能－的－检－测
实验步骤基本方案1 巨噬细胞吞噬功能的检测材 料单核/巨噬细胞：如巨噬细胞株、小鼠腹腔巨噬细胞[单元6.1，需 用 1 0 %豚蛋白胨或4 % (m /V ) 硫基乙酸盐肉汤]，或 人 P B M C (单 元 8.1)平衡盐溶液（balanced salt solution， BSS)细菌（如单核
干细胞的鉴定实验——流－式－细－胞－仪－检－测－分－析－技－术
实验步骤流 式 细 胞 仪 检 测 分 析 技 术实 验 材 料(1) 不同来源的干细胞，细胞数不少于 5xl0 5 个/管。(2) 荧光标记的抗体或抗体及荧光二抗。(3)PBS。实 验 步 骤(1) 将 细 胞 用 PBS 充分洗涤后重悬于 5000 PBS 中，如果细胞收集和鉴定不能同天完成，可
P－C－R－检－测－人－T－细－胞－受－体－基－因－的－表－达
实验步骤 基 本 方 案 PCR检 测 人 T 细胞受体基因的表达展
IL－2－和－IL－4－的检测实验
实验步骤基 本 方 案 采 用 CTLL- 2 细 胞 检 测 小 鼠 IL - 2 和 IL -4材 料较 总 T C G F 和 抗 IL-4 存在时的 T C G F 单位数获得。通过比较抗 IL-4 抗体存在下的T C G F 活性和两种抗体都存在下的 T C G F 活性的不同来计算 IL
Western－Blot的过程与优化，着重于化学发光检测
实验步骤 一、蛋白质印迹法 蛋白质印迹 (Western Blotting) 法是在混合的复合物中鉴定和定量特定蛋白质的一种有效且常用的方法 (Towbin et al. ,1979)。这一技术对固定在硝酸纤维素膜或聚偏二氟乙烯
Western－Blot的过程与优化，着重于化学发光检测（二）
2.3 半定量蛋白质印迹法通 常 认 为 蛋 白 质 印 迹 法 是 定 性 的 ，但 当 加 入 特 定 对 照 时 ，它 也 可 成 为 一 种 定 量 方 法 。当 E L I S A 无 法 用 于 某 种 样 本 ，或 是 当 生 物 样 本 中 的 某 种 组 分 会 干 扰 E
免疫荧光和细胞分离
实验步骤基 本 方 案 1 单细胞表面抗原的免疫荧光标记材 料基 本 方 案 2 固定和渗透单细胞的细胞内抗原的免疫荧光标记材 料辅 助 方 案 1 用 异 硫 氰 酸 荧 光 黄（FITC) 偶联抗体材 料6 . 计算荧光素/蛋 白 质 比（F/P ):F/P = F I T C 摩尔数/蛋白质摩
流式细胞仪检测全血的人淋巴细胞
基本方案材 料（打 V 项 目 见 附 录 1)全血，通 常 用 E D T A 抗凝P B S ，有 或 无 0.1% (m /V ) 叠氮钠，过滤除菌单 克 隆 抗 体（标记的，未标记的或生物素化的），通过滴定确定最佳工作浓度间 标 二 抗（仅用于未标记的一抗）F T T C 标记的链霉亲和素或
流式细胞仪检测全血的人淋巴细胞
实验步骤基本方案材 料（打 V 项 目 见 附 录 1)全血，通 常 用 E D T A 抗凝P B S ，有 或 无 0.1% (m /V ) 叠氮钠，过滤除菌单 克 隆 抗 体（标记的，未标记的或生物素化的），通过滴定确定最佳工作浓度间 标 二 抗（仅用于未标记的一抗）F T T C 标记的链霉
抗－体－的－体－内－诱－导－和－检－测
实验步骤基 本 方案 1 蛋白质或多糖抗原体内法诱导抗体的产生材 料人外周血类毒素混合物： 25Lf U/ml 白 喉 类 毒 素（Connaught Laboratories 或 State Laboratoriy Institute of Massachusetts) 与 IOLf U/ml 破
蛋白质凝胶染色法实验
实验步骤 总蛋白质的检测 1. 总蛋白质色度法染色 简便的目视检测、相对简单的使用及广大熟悉方法的用户基础群，使得考马斯亮蓝(C B B )—直是最普遍使用的总蛋白质凝胶染色剂。如需要比考马斯亮蓝染色更高的检测敏感度，那么银
H－I－V的检测与分析——外周血中HIV的分离和定量检测
实验步骤外 周 血 中 H IV 的 分 离 和 定 量 检 测基 本 方 案 1 外 周 血 中 H IV 的培养以及通过 TCID 定量来测定其滴度注 ：所有的培养都在 37°C ，含 5 % 0 3 2 的加湿培养箱中进行。材 料（带 V 项 目 见 附 录 1)来 自 正 常 个 体（H I