NK／LAK细胞杀伤活性的检测
实验步骤基 本 方案 51C r 释 放 法检 测 NK/LA K 细胞杀伤活性材 料展......阅读全文
NK/L－A－K－细－胞－杀－伤－活－性－的－检－测
实验步骤基 本 方案 51C r 释 放 法检 测 NK/LA K 细胞杀伤活性材 料展
巨－噬－细－胞－吞－噬－功－能－和－杀－伤－功－能－的－检－测
实验步骤基本方案1 巨噬细胞吞噬功能的检测材 料单核/巨噬细胞：如巨噬细胞株、小鼠腹腔巨噬细胞[单元6.1，需 用 1 0 %豚蛋白胨或4 % (m /V ) 硫基乙酸盐肉汤]，或 人 P B M C (单 元 8.1)平衡盐溶液（balanced salt solution， BSS)细菌（如单核
巨－噬－细－胞－抗－肿－瘤－活－性－的－检－测
实验步骤基本方案 [111In] 释放法检测巨噬细胞对肿瘤细胞的杀伤作用材 料辅助方案 [111In ] 标记肿瘤靶细胞材 料展开
细－胞－毒－性－T－淋－巴－细－胞－的－诱－导－及－检－测
实验步骤基 本 方 案 1 从 C TL 前体中诱导细胞毒性注意：反应细胞应根据抗原的种类选择是否需要进行体内致敏。材 料反应细胞来源：未致敏的或者体内致敏的小鼠脾脏细胞（见辅助方案 1 和 2致敏培养基刺激细胞来源：未修饰或半抗原修饰的小鼠脾脏细胞（见辅助方案 3)R P M I -1 0 完全培
ELISPOT方－法－检－测－分－泌－细－胞－因－子－的－细－胞
实验步骤基本方案材 料包被缓冲液洗液：含 0.25% (v/v) Tween 20 的 PBS 溶液阻断缓冲液：含 5 % (m/V) BSA 或 FCS 的 PBS 溶液VRPMMO 完全培养基（或其他适宜培养基）分泌细胞因子的细胞（小鼠或人的）丝裂原，抗原或其他促细胞因子分泌的刺激物带有标记物的
流－式－细－胞－仪－检－测－全－血－的－人－淋－巴－细－胞
实验步骤基本方案材 料（打 V 项 目 见 附 录 1)全血，通 常 用 E D T A 抗凝P B S ，有 或 无 0.1% (m /V ) 叠氮钠，过滤除菌单 克 隆 抗 体（标记的，未标记的或生物素化的），通过滴定确定最佳工作浓度间 标 二 抗（仅用于未标记的一抗）F T T C 标记的链霉
B－细－胞－分－泌－抗－体－的－检－测
实验步骤基 本 方案材 料外周 血 单 个 核 细 胞（P B M C ; 单 元 8.1)RPMI- 5 和 RPMI-IO 完全培养基P W M 溶液9 6 孔 平 底 培 养 板（Costar)1 . 计 数 PBMC (附录 3A ) ， 用 RPMI-5 完全培养基调整浓度至 4 X 10
BrdU－检－测－丁－细－胞－和－B－细胞增殖
实验步骤基本方案材 料实验动物0.8m g / m l B r d U (Sigma) 水 溶 液（口 服用）或 4m g / m l B r d U P B S 溶 液（注射用)P B S ， p H 7. 40.15mo l / L 冰冷的 NaCl冰 冷 的 9 5 % 乙醇多聚甲醛固定液D
小－鼠－巨－噬－细－胞－的－表－型－检－测
实验步骤基 本 方 案 直 标 法 检 测 小 鼠 巨 噬 细 胞 的 表 型材料Sorvall RT 6000B 离心机I . 准 备 4 只 12m m X 75m m 试管，将试管编号为 1〜4。每 管 中 加 入 2 X IO7个细胞/ml细胞悬液 50ul。2.每管加入 3 mg/ml 阻
巨－噬－细－胞－一－氧－化－氮－的－检－测
实验步骤基本方案材料展开
B－细－胞－功－能－的－增－殖－检－测－方－法
实验步骤基 本 方 案 抗 I g M 与 L P S 刺激的 B 细胞增殖材 料（带 V 项 目 见 附 录 1)纯化的静息 B 细 胞（单 元 2. 5)，采 用 Percoll 梯度离心制备V D M E M -10 完全培养基山羊抗 IgM (JacksonImmunoresearch) 或
PCR－检－测－细－胞－因－子－m－R－N－A－的表达
实验步骤基 本 方 案 定 量 IL -2 mRNA表达水平材 料内参照：转 录 质 粒 载 体（含有临床生物检测标本相关的c D N A )胍盐溶液50 U/ul RNasin5 X 反转录酶缓冲液0.5m g / m l olig (d T )16l m g /m l 乙酰化的B S A4d N
P－C－R－检－测－小－鼠－T－细－胞－受－体－表－达
实验步骤 基本方案 I P C R 分析小鼠 T C R 基因表达材 料正常小鼠的组织匀浆或者是 H B S S 制备的单个细胞悬液（IO4〜IO7) (附 录 1)无菌水展开
P－C－R－检－测－人－T－细－胞－受－体－基－因－的－表－达
实验步骤 基 本 方 案 PCR检 测 人 T 细胞受体基因的表达展
干细胞的鉴定实验——流－式－细－胞－仪－检－测－分－析－技－术
实验步骤流 式 细 胞 仪 检 测 分 析 技 术实 验 材 料(1) 不同来源的干细胞，细胞数不少于 5xl0 5 个/管。(2) 荧光标记的抗体或抗体及荧光二抗。(3)PBS。实 验 步 骤(1) 将 细 胞 用 PBS 充分洗涤后重悬于 5000 PBS 中，如果细胞收集和鉴定不能同天完成，可
α、－β和－γ干－扰－素－诱－导－的－抗－病－毒－活－性－的－检－测
实验步骤基 本 方 案 小 鼠 干 扰 素 诱 导 的 抗 病 毒 活 性 的 检 测材 料干扰素敏感的 L 929 成纤维细胞E M E M 培 养 基（Eagle 氏最低要求培养基）胰酶消化液检 测 样 品（具干扰素活性的血清或培养上清）小鼠干扰素的参照标准品 α -干扰素、β-干扰素、 γ-干
外－源－性－抗－原－向－T－细－胞－的－呈－递
实验步骤基本方案 一 种 抗 原 加 工 处 理 和 呈 递 的 检 测 体 系材 料具有增殖能力的（如转化的 B 细胞）或非增殖的且与 T 杂交瘤细胞 M H C 匹配的抗原呈递细胞（单 元 7.1)D M E M -1 0 完全培养基， 37°C对数生长期的 T 杂交瘤细胞抗原：溶解于水的蛋白质
T－细－胞－中－丝－裂－原－活－化－的－蛋－白－激－酶（MAPK)－活性分析
实验步骤基 本 方 案 1 免疫复合物蛋白激酶测定此方法可用于测定 E R K 、 J N K 和 p38 M A P K 的活性，也可使用针对每个 M A P K组分的商品化抗体。然而，特定的抗体对各组分内特定的亚型会显示一定的特异性。材 料基本方案 2 固相蛋白激酶法检测 J N K 活性这种方
淋－巴－细－胞－活－化－过－程－中－肌－醇－磷－脂－周－转－的－分－析
实验步骤基 本 方 案 1 通 过 道 威 克 斯（DOWEX) 离 子 交 换 层 析 分 析 [3H] 肌醇磷酸材料备 选 方 案 通 过 HPLC 方 法 分 析 [3H] 肌醇磷酸附加材料[3 H ] InsP 样 本（见基本方案，步 骤 6) 和标准品除 气 的 H PLC 级水2mol/
T－细－胞－克－隆－的－建－立
实验步骤基本方案 1 产生和维持同种反应性 T h 和 CTL 克隆尽管同种反应性 T 细胞可以从未刺激的脾细胞或淋巴结细胞中产生，但如果细胞在初次混合淋巴细胞（M L C ) 中第一次被同种抗原刺激，反应细胞的得率会更高。见以下介绍。材 料同种反应性小鼠脾脏 T 细胞V H B S S (可选使用
小－鼠－巨－噬－细－胞－的－分－离
实验步骤基 本 方 案 1 小鼠腹腔巨噬细胞的分离材料小鼠，洁 净 环 境 中 饲 养（最好置层流柜中饲养）7 3 % (m /V ) 豚 蛋 白 胨 或 者 3 % (W V r) Brewer 硫 基 乙 酸 盐 肉 汤（Brewerthioglycollate medium，分离炎性腹腔巨嗤细
人－NK－T－细－胞－的－分－离－和－扩－增
实验步骤基本方案 1 NK T 细胞的鉴定材 料外周肝素抗凝血P B SR P M I -1640 培养基，含 1 0 % (V /V ) 人血清或 F C S 以 及 10U /m l I L -2 (可选）流 式 细 胞 缓 冲 液（flow cytometry buffer， FCbuffer
γ干－扰－素－的－检－测
实验步骤基本方案材 料展
检测凋亡和其他形式的细胞死亡
实验步骤基本方案1 用活细胞或荧光染料定量细胞活性显微镜观察是一种简单且准确的检测凋亡的方法。凋亡的标志性特征包括细胞核浓缩 、细胞膜完整但出现发泡现象，以及清晰的胞质。材 料 （带7 项 目 见 附 录 1)V 染料混合剂P B S 的 细 胞 悬 液 （附 录 1)9 6 孔圆底板显微镜用的载玻
磁－珠－法－分－离T－细－胞－和－B－细胞
实验步骤基 本 方 案 1 用 AUTOMACS 系 统 进行 总 T 细胞、 CD4 +细 胞 或 CD8+T细胞的自动分离材 料小鼠HBSS 洗涤缓冲液基 本 方 案 2 使 用 AUTOMACS 系 统 进 行 B 细胞的自动分选材 料小鼠HBSS 洗涤缓冲液MACS 缓冲液CD45R (B2
简述巴氏杆菌的多杀性
多杀巴氏杆菌是一种两端钝圆，中央微突的短杆菌或球杆菌，长0.6-2.5微米，宽0.25-0.6微米，不形成芽胞，不运动，无鞭毛，革兰氏染色阴性的需氧兼性厌氧菌。本菌在添加血清或血液的培养基上生长良好。在血琼脂上生成灰白色，湿润而粘稠的菌落，不溶血；在普通琼脂上形成细小透明的露珠状菌落；在普通肉汤
钙调蛋白样品的测活实验
钙调蛋白样品的测活实验 试剂、试剂盒 MLCK 的底物肽 ATP 钙调蛋白储液
钙调蛋白样品的测活实验
试剂、试剂盒 MLCK 的底物肽ATP钙调蛋白储液 MLCK 酶磷酸丙酮（任选）MLCK 测活缓冲液仪器、耗材 聚丙烯微量离心管 Whatman*P81 磷酸纤维素纸（切成条)玻璃烧杯加样器闪烁瓶闪烁计数器吹干机（任选)实验步骤 材料与设备聚丙烯微量离心管 (1.5-ml)MLCK 的底物肽（10m
钙调蛋白样品的测活实验
试剂、试剂盒MLCK 的底物肽ATP钙调蛋白储液MLCK 酶磷酸丙酮（任选）MLCK 测活缓冲液仪器、耗材聚丙烯微量离心管Whatman*P81 磷酸纤维素纸（切成条)玻璃烧杯加样器闪烁瓶闪烁计数器吹干机（任选)实验步骤材料与设备聚丙烯微量离心管 (1.5-ml)MLCK 的底物肽（10mmol/L
T细胞克隆的建立
基本方案 1 产生和维持同种反应性 T h 和 CTL 克隆尽管同种反应性 T 细胞可以从未刺激的脾细胞或淋巴结细胞中产生，但如果细胞在初次混合淋巴细胞（M L C ) 中第一次被同种抗原刺激，反应细胞的得率会更高。见以下介绍。材 料同种反应性小鼠脾脏 T 细胞V H B S S (可选使用）V D