单向定量免疫电泳实验
实验方法原理火箭电泳(rocketimmunoelectrophoresis)又称单向定量免疫电泳,将抗原样品放在含有专一性抗体的凝胶孔中,抗体静电荷为零不移动;而抗原分子在电场作用下移动,形成抗原-抗体复合物沉淀下来。后面的抗原继续向正极泳动遇到沉淀的抗原-抗体复合物,抗原过量使复合物沉淀溶解,与未结合的抗体结合,又形成新的抗原-抗体复合物沉淀下来,不断沉淀-溶解-再沉淀,最后形成锥形的沉淀峰,称火箭电泳。其高度与所加抗原的量大致成比例。(来源:生物化学与分子生物学实验指导,邵雪玲等,武汉大学出版社,2003)实验材料人IgG 兔抗人IgG试剂、试剂盒琼脂仪器、耗材玻璃板 电泳仪 水平电泳槽 打孔器 微量加样器 恒温水浴锅实验步骤1. 抗体琼脂板的制备 将融化的琼脂冷却到55 ℃,加入适量(看免疫血清的效价高低而定)的抗体,立即混匀(不要出现泡沫),将上述的抗体琼脂(大约20 ml)制成琼脂板,冷却后按下图打孔备用。......阅读全文
免疫电泳实验技术原理和操作方法
(一)原理免疫电泳是琼脂平板电泳和双相免疫扩散两种方法的结合。将抗原样品在琼脂平板上先进行电泳,使其中的各种成分因电泳迁移率的不同而彼此分开,然后加入抗体做双相免疫扩散,把已分离的各抗原成分与抗体在琼脂中扩散而相遇,在二者比例适当的地方,形成肉眼可见的沉淀弧。该方法可以用来研究:①抗原和抗体的相对应
关于火箭免疫电泳的实验操作步骤介绍
1、抗原、抗体浓度的选择 以分别固定抗原含量与抗体浓度的方法,选取最小抗原量与最低抗体浓度,在免疫电泳后能出现最清晰项端狭窄且尖的锥形沉淀峰,长达2~5cm者为标准。一般抗原用量为0.5~5微克,抗血清用量为5~10微升,稀释度于1:10~1:200之间进行选择。 2、预复琼脂玻板的制备
PCR-产物定量实验
测序之前对模板精确定量至关重要。根据 DNA 用量的多少,有几种不同的方法可供选择。下面介绍另外两种方法:荧光测定法和比较溴化物染色法。本实验来源于 PCR 实验指南(第二版),作者:种康,瞿礼嘉。试剂、试剂盒DNA 标准TEPCR 产物仪器、耗材荧光计金属箔纸微量离心管实验步骤方法 A: 荧光测定
PCR-产物定量实验
试剂、试剂盒 DNA 标准TEPCR 产物仪器、耗材 荧光计金属箔纸微量离心管实验步骤 方法 A: 荧光测定法荧光测定法可以在纳克级范围精确定量。荧光计和 DNA 定量试剂盒许多公司都有出售。确定荧光计是否安装了适合于特定染料的激发和发射的部件至关重要。该方法在设计上适用于配有带蓝色 LED
PCR-产物定量实验
试剂、试剂盒 DNA 标准 TE PCR 产物 仪器、耗材 荧光计 金属箔纸
氨基酸单向纸层析实验原理和步骤(1)
一、实验目的:1、通过氨基酸的分离,学习并掌握纸层析的原理和操作技术;2、掌握分配层析法;3、掌握影响分配系数的因素。层析分离技术是利用被分离的混合物中各组分物理化学的性质(分子的形状和大小、分子极性、吸附力、分子亲和力、分配系数等)的不同,使各组分以不同程度分布在两相(流动相和固定相)中,当流动相
氨基酸单向纸层析实验原理和步骤(2)
(4)滤纸:层析滤纸由高纯度棉花制成,要求滤纸要清洁,质地均一,厚薄一致,纤维松紧度适中,具有一定的机械强度,要被溶剂所饱和。不同型号的滤纸,其厚薄程度、纤维松紧度各不相同,因此,滤纸纤维结合水的量不一样,两相的体积比也就不同,Rf也不同;另外,滤纸的杂质也会影响Rf,必要时进行预处理(可用0.01
火箭电泳试验
火箭电泳试验火箭电泳实际是一种定量免疫电泳。其原理为:在电场作用下,抗原在含定量抗体的琼脂介质中泳动,二者比例在合适时在较短时间内形成状似火箭或锥形的沉淀线,而此沉淀线的高度常与抗原量成正比关系,因此本法可以测定样品中抗原的含量。材料:1.诊断血清(抗体):抗人IgG或IgA免疫血清2.待检血清(抗
免疫电泳
一、操作步骤1.取一块干净的玻璃板,用少量75%乙醇冲洗,晾干后置于水平台,将1%琼脂糖融化,56℃水浴中保温。2.将琼脂糖铺于玻璃板上,厚度约为1㎜。凝固后,打孔。3.在孔内加入抗原,其中一孔内加电泳指示剂。4.将凝胶板放在电泳槽中进行电泳,确定电泳时间。5.电泳后在凝胶板上沿电泳方向平行挖2㎜宽
免疫电泳
实验概要本实验介绍了免疫电泳(immunoelectrophoresis,IE)实验原理及操作流程。蛋白质是一种两性电解质,它同时具有游离氨基和羧基。每种蛋白质都有自己的等电点。在等电点时,蛋白质所带的正负电荷相等。在pH值大于等电点的溶液中,羧基解离多,此时蛋白质带负电荷,带负电荷的蛋白质在电场中
免疫电泳
实验概要蛋白质是一种两性电解质,它同时具有游离氨基和羧基。每种蛋白质都有自己的等电点。在等电点时,蛋白质所带的正负电荷相等。在pH值大于等电点的溶液中,羧基解离多,此时蛋白质带负电荷,带负电荷的蛋白质在电场中向正极移动;在pH值小于等电点的溶液中,氨基解离多,此时蛋白质带正电荷,在电场中向负极移动。
火箭免疫电泳的简介
火箭免疫电泳(rocket immunoelectrophoresis,RIEP)是将单向免疫扩散和电泳相结合的一种定量检测技术。 电泳时,含于琼脂凝胶中的抗体不发生移动,而在电场的作用下促使样品中的抗原向正极泳动。当抗原与抗体分子达到适当比例时,形成一个形状如火箭的不溶性免疫复合物沉淀峰,峰
火箭免疫电泳是什么?
火箭免疫电泳(rocket immunoelectrophoresis,RIEP)是将单向免疫扩散和电泳相结合的一种定量检测技术。电泳时,含于琼脂凝胶中的抗体不发生移动,而在电场的作用下促使样品中的抗原向正极泳动。当抗原与抗体分子达到适当比例时,形成一个形状如火箭的不溶性免疫复合物沉淀峰,峰的高度与
火箭免疫电泳的定义和应用介绍
火箭免疫电泳(rocket immunoelectrophoresis,RIEP)是将单向免疫扩散和电泳相结合的一种定量检测技术。电泳时,含于琼脂凝胶中的抗体不发生移动,而在电场的作用下促使样品中的抗原向正极泳动。当抗原与抗体分子达到适当比例时,形成一个形状如火箭的不溶性免疫复合物沉淀峰,峰的高度与
火箭免疫电泳的概念简介
火箭免疫电泳(rocket immunoelectrophoresis,RIEP)是将单向免疫扩散和电泳相结合的一种定量检测技术。电泳时,含于琼脂凝胶中的抗体不发生移动,而在电场的作用下促使样品中的抗原向正极泳动。当抗原与抗体分子达到适当比例时,形成一个形状如火箭的不溶性免疫复合物沉淀峰,峰的高度与
火箭免疫电泳的实验仪器和器材介绍
(一)材料和试剂1、PH8.6,0.1M巴比妥--巴比妥钠缓冲液巴比妥钠 10.3 g巴比妥 1.84 g硫柳汞 100 mg(防腐剂)蒸馏水加热溶解并定容至500ml2、1%预复琼脂(或琼脂糖)1g琼脂(或琼脂糖)加蒸馏水100ml溶化即可。3、1.5%琼脂糖凝胶1.5g琼脂糖加50ml蒸馏水置水
单向聚丙烯酰胺凝胶电泳实验
实验材料 蛋白质溶液团粒状细胞蛋白试剂、试剂盒 4X浓缩胶缓冲4X分离胶缓冲10X电泳缓冲液2XSDS-PAGE上样缓冲液正丁醇甲醇SDS储存液仪器、耗材 离心机电泳装置凝胶上样吸头玻璃板加热器实验步骤 一、灌制平板胶1.清洗玻璃板。a.将玻璃板放人 2%PCC-54 清洗液中浸泡 3?24 h。b
单向聚丙烯酰胺凝胶电泳实验
蛋白质的SDS-PAGE实验 传统的考马斯亮蓝染色实验 快速考马斯亮蓝染色实验 InstaStain Blue 凝胶纸染色实验 InstaStain Blue 凝胶纸染色实验 SYPRO Ruby 荧光染色实验 SYPR
火箭免疫电泳
实验概要本文介绍了火箭免疫电泳的基本原理和主要操作流程。实验原理火箭免疫电泳(rocket immunoelectrophoresis,RIEP)是将单向免疫扩散和电泳相结合的一种定量检测技术。电泳时,含于琼脂凝胶中的抗体不发生移动,而在电场的作用下促使样品中的抗原向正极泳动。当抗原与抗体分子达到
什么是单向阀?如何选购合适的REXROTH单向阀?
当REXROTH单向阀出现问题且不能修复时,我们需要去选购新的单向阀,在选购单向阀之前,我们先来了解一下单向阀的作用及结构,以便于我们能够更好地选购到合适的单向阀。下面就来看看什么是单向阀,又要如何选购合适的单向阀。单向阀又称止回阀或逆止阀。用于液压系统中防止油流反向流动,或者用于气动系统中防止压缩
定量PCR实验技术分享
1. 如果扩增曲线ct值比较靠后的话,32左右,一般有什么方法解决?ct值比较靠后,对实验有一定的影响,因为经过那么多次的循环,酶的活性有可能有所下降,这时候扩增效率会有所改变(而定量PCR的理论基础就是每次循环的扩增效率我们认为是确定的一个值)。因此最好能够把ct值往前移。解决办法可以将模板加以浓
叶绿素的定量测定实验
实验方法原理根据叶绿素对可见光的吸收光谱,利用分光光度计在某一特定波长下测定其光密度,而后用公式计算出叶绿素含量,此法精确度高,且能在未经分离的情况下分别测出叶绿素a、b的含量。根据朗伯-比尔定律,某有色溶液的光密度D与其浓度C及液层厚度L成正比,即:D=kCL式中k为比例常数,当溶液浓度以重量百分
荧光定量PCR实验步骤
1、总RNA抽提(枪头和离心管均经过湿热灭菌,无RNA酶) 1)取匀浆器,加入1ml的Trizol Reagent,置冰上预冷。 2)取100mg组织,加入到匀浆器中。 3)充分研磨直至无可见组织块。 4)12000rpm离心10min取上清。 5)加入250 μl三氯甲烷,颠倒离心管
叶绿素的定量测定实验
实验方法原理根据叶绿素对可见光的吸收光谱,利用分光光度计在某一特定波长下测定其光密度,而后用公式计算出叶绿素含量,此法精确度高,且能在未经分离的情况下分别测出叶绿素a、b的含量。根据朗伯-比尔定律,某有色溶液的光密度D与其浓度C及液层厚度L成正比,即: D=kCL 式中k为比例常数,当溶液浓度以重量
蛋白质定量实验
试剂、试剂盒 考马斯亮蓝 G250乙醇磷酸实验步骤 (1) 准备 100~1500 ug/ml 的标准品, 溶于 Bradford 法相兼容缓冲液中。对于较稀的样品,可能通过增加样品在试剂体积中的比率而扩大灵敏度(microBradfordassay:1~25ug/mL)。如果样品与染料的比
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叶绿素的定量测定实验
实验方法原理 根据叶绿素对可见光的吸收光谱,利用分光光度计在某一特定波长下测定其光密度,而后用公式计算出叶绿素含量,此法精确度高,且能在未经分离的情况下分别测出叶绿素a、b的含量。根据朗伯-比尔定律,某有色溶液的光密度D与其浓度C及液层厚度L成正比,即:D=kCL式中k为比例常数,当溶液浓度以重量百
蛋白质定量实验
考马斯亮蓝蛋白质浓度分析法 碱性铜还原分析法 胺衍生法 实验方法原理 蛋白质分子中的芳香族氨基酸酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸残基,其化学结构中
核酸的定量测定实验
实验方法原理 核酸、核苷酸及衍生物都具有共轭双键系统, 能吸收紫外光, RNA、DNA 的紫外吸收高峰在260 nm 波长处。一般在260 nm 波长下, 每1 ml 含1 μg RNA 的溶液光吸收值为0.022 , 每1 ml 含1 μg DNA 的溶液光吸收值约为0.020 , 故测定
核酸的定量测定实验
紫外分光光度法 地衣酚显色法 二苯胺法 实验方法原理 核酸、核苷酸及衍生物都具有共轭双键系统, 能吸收紫外光, RNA、DNA 的紫外